中药新药安全性评价课件

1、中药新药安全性评价1 中药新药安全性评价中药新药安全性评价 技术与方法技术与方法 中药新药安全性评价2 o 毒理学毒理学 o 药物毒理学药物毒理学 o 新药安全性评价新药安全性评价 中药新药急性毒性试验中药新药急性毒性试验 中药新药长期毒性试验中药新药长期毒性试验 中药新药一般药理学试验中药新药一般药理学试验 中药注射剂过敏、刺激、溶血性试验中药注射剂过敏、刺激、溶血性试验 其他其他 中药新药安全性评价3 中药新药注册分类中药新药注册分类 1 1、未在国内上市销售的从植物、动物、矿物等物质中提取的有效成分及其制剂。、未在国内上市销售的从植物、动物、矿物等物质中提取的有效成分及其制剂。 2 2、

2、新发现的药材及其制剂。、新发现的药材及其制剂。 3 3、新的中药材代用品。、新的中药材代用品。 4 4、药材新的药用部位及其制剂。、药材新的药用部位及其制剂。 5. 5. 未在国内上市销售的从植物、动物、矿物等物质中提取的有效部位及其制剂未在国内上市销售的从植物、动物、矿物等物质中提取的有效部位及其制剂 国家药品标准中未收载的从单一植物、动物、矿物等物质中提取的一类或国家药品标准中未收载的从单一植物、动物、矿物等物质中提取的一类或 数类成份组成的有效部位及其制剂，其有效部位含量应占提取物的数类成份组成的有效部位及其制剂，其有效部位含量应占提取物的5050以以 上。上。 6. 6. 未在国内上市

3、销售的中药、天然药物复方制剂未在国内上市销售的中药、天然药物复方制剂 6.16.1中药复方制剂；中药复方制剂； 6.26.2天然药物复方制剂；天然药物复方制剂； 6.36.3中药、天然药物和化学药品组成的复方制剂。中药、天然药物和化学药品组成的复方制剂。 7 7、改变国内已上市销售中药、天然药物给药途径的制剂。、改变国内已上市销售中药、天然药物给药途径的制剂。 8 8、改变国内已上市销售中药、天然药物剂型的制剂、改变国内已上市销售中药、天然药物剂型的制剂 9 9、已有国家标准的中药、天然药物。、已有国家标准的中药、天然药物。 中药新药安全性评价4 药品属性三原则药品属性三原则 安全性安全性 有

4、效性有效性 质量稳定可控质量稳定可控 中药新药安全性评价5 中药、天然药物申报资料：中药、天然药物申报资料：综述资料综述资料 1、药品名称。 2、证明性文件。 3、立题目的与依据。 4、对主要研究结果的总结及评价。 5、药品说明书样稿、起草说明及最新参考文献。 6、包装、标签设计样稿。 中药新药安全性评价6 中药、天然药物申报资料：中药、天然药物申报资料：药学研究资料药学研究资料 7、药学研究资料综述。 8、药材来源及鉴定依据。 9、药材生态环境、生长特征、形态描述、或培植 （培育）技术、产地加工和炮制方法 10、药材标准草案及起草说明，并提供药品标准物 质及有关资料。 11、提供植、矿物标本

5、，植物标本应当包括花、果 实、种子等。 12、生产工艺的研究资料及文献资料，辅料来源及 质量标准。 中药新药安全性评价7 中药、天然药物申报资料：中药、天然药物申报资料：药学研究资料药学研究资料 13、确证化学结构或组分的试验资料及文献资料。 14、质量研究工作的试验资料及文献资料。 15、药品标准草案及起草说明，并提供药品标准物 质及有关资料。 16、样品检验报告书。 17、药物稳定性研究的试验资料及文献资料。 18、直接接触药品的包装材料和容器的选择依据及 质量标准。 中药新药安全性评价8 中药、天然药物申报资料：中药、天然药物申报资料：药理毒理研究药理毒理研究 1919、药理毒理研究资料

6、综述。、药理毒理研究资料综述。 2020、主要药效学试验资料及文献资料。、主要药效学试验资料及文献资料。 2121、一般药理研究的试验资料及文献资料。、一般药理研究的试验资料及文献资料。 2222、急性毒性试验资料及文献资料。、急性毒性试验资料及文献资料。 2323、长期毒性试验资料及文献资料。、长期毒性试验资料及文献资料。 2424、过敏性（局部、全身和光敏毒性）、溶血性和局部（血管、皮肤、粘、过敏性（局部、全身和光敏毒性）、溶血性和局部（血管、皮肤、粘 膜、肌肉等）刺激性、依赖性等主要与局部、全身给药相关的特殊安全性膜、肌肉等）刺激性、依赖性等主要与局部、全身给药相关的特殊安全性 试验资料

7、和文献资料。试验资料和文献资料。 2525、致突变试验资料及文献资料。、致突变试验资料及文献资料。 2626、生殖毒性试验资料及文献资料。、生殖毒性试验资料及文献资料。 2727、致癌试验资料及文献资料。、致癌试验资料及文献资料。 2828、动物药代动力学试验资料及文献资料、动物药代动力学试验资料及文献资料 。 中药新药安全性评价9 中药、天然药物申报资料：中药、天然药物申报资料：临床试验资料临床试验资料 29、临床试验资料综述。 30、临床试验计划与方案。 31、临床研究者手册。 32、知情同意书样稿、伦理委员会批准件。 33、临床试验报告。 中药新药安全性评价10 急性毒性试验：动物单次或

8、急性毒性试验：动物单次或2424小时内多次接受一定剂量小时内多次接受一定剂量 的受试物，动物在一定时间内出现的毒性反应。的受试物，动物在一定时间内出现的毒性反应。 急性毒性试验主要包括：急性毒性试验主要包括： l 半数致死量（半数致死量（LD50LD50）试验）试验 l 最大给药量试验最大给药量试验 l 最大耐受量试验最大耐受量试验 l 近似致死剂量试验近似致死剂量试验 一、中药新药急性毒性试验一、中药新药急性毒性试验 中药新药安全性评价11 o 定性观察：定性观察：包括动物体重变化、饮食、外观、行为、包括动物体重变化、饮食、外观、行为、 分泌物、排泄物、动物异常反应的症状、起始时间、分泌物、

9、排泄物、动物异常反应的症状、起始时间、 严重程度、持续时间、是否可逆以及动物死亡情况严重程度、持续时间、是否可逆以及动物死亡情况 o 定量指标：定量指标： 半数致死量（半数致死量（LD50LD50） 近似致死剂量（近似致死剂量（ALDALD） 最大耐受量（最大耐受量（MTDMTD） 最大给药量最大给药量 中药新药安全性评价12 实验方法与结果实验方法与结果 受试物受试物 o受试物采用制备工艺稳定、符合临床试用质量标准规定的受试物采用制备工艺稳定、符合临床试用质量标准规定的 中试样品中试样品，注明名称、提供单位、批号、性状、含量、剂，注明名称、提供单位、批号、性状、含量、剂 型、配制方法、保存条

10、件等。型、配制方法、保存条件等。 o如不采用中试样品，应有充分的理由。如不采用中试样品，应有充分的理由。 o若由于给药容积或给药方法限制，可采用原料药进行试验若由于给药容积或给药方法限制，可采用原料药进行试验 中药新药安全性评价13 试验动物试验动物 o1 1，5 5类药至少必须用类药至少必须用2 2种动物（啮齿和非啮齿）种动物（啮齿和非啮齿） o一般采用啮齿类和一般采用啮齿类和/ /或非啮齿类动物，雌雄各半，所用动物或非啮齿类动物，雌雄各半，所用动物 应符合国家有关药物非临床安全性研究的要求。应符合国家有关药物非临床安全性研究的要求。 o如临床为单性别用药，可采用相对应的单一性别的动物。如临

11、床为单性别用药，可采用相对应的单一性别的动物。 o如受试物拟用于儿童，建议考虑采用幼年动物。如受试物拟用于儿童，建议考虑采用幼年动物。 o中毒反应或死亡率与动物的性别有明显相关时，应选择性中毒反应或死亡率与动物的性别有明显相关时，应选择性 别敏感的动物进行复试。别敏感的动物进行复试。 中药新药安全性评价14 试验分组试验分组 按性别、体重采用分区随机法分组按性别、体重采用分区随机法分组 除受试物不同剂量组外，还应设空白除受试物不同剂量组外，还应设空白( (和和/ /或阴性或阴性) )对照组。对照组。充分对照充分对照 给药途径给药途径 须与临床拟给药途径一致，若不同应充分说明理由；根据新药研究技

12、须与临床拟给药途径一致，若不同应充分说明理由；根据新药研究技 术指南，需要进行两种给药途径试验的受试物，如临床为非血管内给术指南，需要进行两种给药途径试验的受试物，如临床为非血管内给 药，另一给药途径采用静脉给药方式；如果因为制剂等原因不能采用药，另一给药途径采用静脉给药方式；如果因为制剂等原因不能采用 静脉给药，应充分说明理由。静脉给药，应充分说明理由。 中药新药安全性评价15 给药容量给药容量 o经口给药前动物禁食不禁水过夜，大鼠给药容量每次一般经口给药前动物禁食不禁水过夜，大鼠给药容量每次一般 不超过不超过20ml/kg20ml/kg，小鼠每次一般不超过，小鼠每次一般不超过40ml/kg

13、40ml/kg。 观察期限观察期限 一般观察一般观察1414天，如观察时间不足天，如观察时间不足1414天，应充分说明理由。天，应充分说明理由。 中药新药安全性评价16 观察指标观察指标 o应定期记录动物的体重及耗食量。如有异常情况，应跟踪应定期记录动物的体重及耗食量。如有异常情况，应跟踪 观察。观察。 o给药当天，尤其是给药后给药当天，尤其是给药后4h4h内应严密观察记录，然后每天内应严密观察记录，然后每天 上、下午各观察上、下午各观察1 1次，连续次，连续1414天，包括动物体重变化、饮食、天，包括动物体重变化、饮食、 外观、行为、分泌物、排泄物、动物异常反应的症状、起外观、行为、分泌物、

14、排泄物、动物异常反应的症状、起 始时间、严重程度、持续时间、是否可逆以及动物死亡情始时间、严重程度、持续时间、是否可逆以及动物死亡情 况。况。 o剖检：死亡动物应及时进行尸检，其他动物在观察期结束剖检：死亡动物应及时进行尸检，其他动物在观察期结束 后后( (给药第给药第1515天天) )，进行大体解剖，记录病变情况，当发现，进行大体解剖，记录病变情况，当发现 器官出现体积、颜色、质地等改变时则须进行病理检查并器官出现体积、颜色、质地等改变时则须进行病理检查并 记录。记录。 中药新药安全性评价17 半数致死量的测定半数致死量的测定 o剂量设定：根据预试结果所获得的剂量设定：根据预试结果所获得的0

15、 0和和100100致死量范围致死量范围 内选用几个剂量进行试验，分内选用几个剂量进行试验，分4 46 6个剂量组，组距设计一个剂量组，组距设计一 般为般为0.650.650.850.85。 o用用BlissBliss的方法求出的方法求出LD50LD50值及值及95%95%的可信区间的可信区间，各剂量组的，各剂量组的 死亡率。若毒性反应有明显的性别差异，应求出不同性别死亡率。若毒性反应有明显的性别差异，应求出不同性别 的的LD50LD50。详细报告试验过程中动物出现的中毒表现及致死。详细报告试验过程中动物出现的中毒表现及致死 症状，综合评价受试物毒性大小。症状，综合评价受试物毒性大小。 中药新

16、药安全性评价18 最大耐受量的测定最大耐受量的测定 o 剂量设定：根据预试结果在动物死亡的剂量剂量设定：根据预试结果在动物死亡的剂量 下按等比级数设剂量组，可分下按等比级数设剂量组，可分2 25 5个剂量组，个剂量组， 组距设计一般为组距设计一般为0.650.650.850.85。最大剂量应有。最大剂量应有 动物死亡，死亡率小于动物死亡，死亡率小于5050。 o 详细报告试验过程中动物出现的异常表现及详细报告试验过程中动物出现的异常表现及 致死症状，计算出动物总给予药量致死症状，计算出动物总给予药量g/kgg/kg（或（或 以含生药量以含生药量g/kgg/kg表示），即动物的最大耐受表示），即

17、动物的最大耐受 量，评价受试物毒性情况。量，评价受试物毒性情况。 中药新药安全性评价19 最大给药量的测定最大给药量的测定 o 剂量设定：以允许并合理的最大浓度、最大容量单剂量设定：以允许并合理的最大浓度、最大容量单 次或一日内次或一日内2 23 3次给予动物。次给予动物。 o 体重：雌雄分别进行组间比较。体重：雌雄分别进行组间比较。 o 详细报告试验过程中动物出现的异常表现，计算出详细报告试验过程中动物出现的异常表现，计算出 动物总给药量动物总给药量g/kgg/kg（或以含生药量（或以含生药量g/kgg/kg表示），即表示），即 动物的最大给药量，推算出相当于临床拟用药量的动物的最大给药量，

18、推算出相当于临床拟用药量的 倍数，评价受试物毒性大小。倍数，评价受试物毒性大小。 中药新药安全性评价20 犬急性毒性试验犬急性毒性试验( (近似致死剂量法）近似致死剂量法） o动物试验前隔夜禁食不禁水，根据小动物毒性实验，参照药物临床实验动物试验前隔夜禁食不禁水，根据小动物毒性实验，参照药物临床实验 治疗使用量，估计可能引起毒性反应和死亡的剂量范围，按治疗使用量，估计可能引起毒性反应和死亡的剂量范围，按50%50%递增法，递增法， 设计出含设计出含10-2010-20个剂量序列表。个剂量序列表。 o以最大给药剂量预实验一条犬，根据情况完成下列步骤：以最大给药剂量预实验一条犬，根据情况完成下列步

19、骤： o若出现死亡或明显毒性反应，由剂量序列表中找出可能的致死剂量范围，若出现死亡或明显毒性反应，由剂量序列表中找出可能的致死剂量范围， 在此范围内，每间隔一个剂量染毒一只动物，测出最低致死剂量和最高在此范围内，每间隔一个剂量染毒一只动物，测出最低致死剂量和最高 非致死剂量，然后用两者之间的剂量染毒一只动物，则此剂量即为近似非致死剂量，然后用两者之间的剂量染毒一只动物，则此剂量即为近似 致死剂量。致死剂量。 o若没有死亡或没有出现明显的毒性反应，则按照最大给药剂量实验放样若没有死亡或没有出现明显的毒性反应，则按照最大给药剂量实验放样 观察药物的可能毒性反应。观察药物的可能毒性反应。 o同时平行

20、实验作为对照组。同时平行实验作为对照组。 中药新药安全性评价21 o检测指标检测指标 o常规观察常规观察 1 1 中毒表现：犬给药后密切观察中毒表现：犬给药后密切观察4 4个小时。此后每天上、下午各观个小时。此后每天上、下午各观 察一次，连续观察察一次，连续观察1414天。观察动物的体重变化、饮食、行为、分泌物、天。观察动物的体重变化、饮食、行为、分泌物、 排泄物等，并记录中毒死亡时间，中毒反应起始时间、持续时间、恢复排泄物等，并记录中毒死亡时间，中毒反应起始时间、持续时间、恢复 期是否可逆，动物最短死亡时间，最长死亡时间，平均死亡时间等，报期是否可逆，动物最短死亡时间，最长死亡时间，平均死亡

21、时间等，报 告近似致死剂量和最大耐受剂量。告近似致死剂量和最大耐受剂量。 2 2 剖剖 检：动物死亡应及时剖检，其他动物在观察期结束后进检：动物死亡应及时剖检，其他动物在观察期结束后进 行大体解剖，记录病变情况，主要观察心脏、肺脏、肾脏、肝脏、脾脏、行大体解剖，记录病变情况，主要观察心脏、肺脏、肾脏、肝脏、脾脏、 胃肠道等内脏，观察是否有出血点、水肿等异常情况，并作书面记录。胃肠道等内脏，观察是否有出血点、水肿等异常情况，并作书面记录。 当发现器官出现体积、颜色、质地等改变时须进行病理检查。当发现器官出现体积、颜色、质地等改变时须进行病理检查。 o对于创新药物，还可进行以下指标检测（体重、摄食

22、量、体温、心电图对于创新药物，还可进行以下指标检测（体重、摄食量、体温、心电图 等指标可酌情增加等指标可酌情增加1 12 2次检测）。次检测）。 中药新药安全性评价22 二、中药新药长期毒性试验二、中药新药长期毒性试验 对动物反复多次连续给药的毒性试验对动物反复多次连续给药的毒性试验 试验的目的试验的目的 1 1、反复多次给药的情况下，实验动物、反复多次给药的情况下，实验动物 出现的毒性反应、量效关系、主要的靶器官、损出现的毒性反应、量效关系、主要的靶器官、损 害程度及其可逆性。害程度及其可逆性。 2 2、获得反复给药情况下，实验动物能、获得反复给药情况下，实验动物能 耐受的剂量范围及无毒性反

23、应的安全范围。耐受的剂量范围及无毒性反应的安全范围。 中药新药安全性评价23 一般药物的长期毒性研究给药期限表一般药物的长期毒性研究给药期限表 药物临床疗程 大鼠长期毒性研究给药 期限 可以支持的临床研究阶 段 单次2周、期 2周1个月、期 2周*1个月期 1个月1个月期 3个月期 3个月3个月期 6个月期 6个月6个月期 6个月期 6个月6个月期 6个月期 中药新药安全性评价24 动动 物物 oSPFSPF级级SDSD或或WistarWistar健康大鼠，一般每组健康大鼠，一般每组10103030只（若药物毒只（若药物毒 性大，或试验周期为性大，或试验周期为6 6个月，每组应增加个月，每组应

24、增加1010只动物），只动物）， 6 6 9 9周龄，动物体重差异应在平均体重的周龄，动物体重差异应在平均体重的20%20%之内，应有动物之内，应有动物 质量合格证书。质量合格证书。 o试验周期试验周期3 3个月以上可选个月以上可选5 56 6周龄大鼠。周龄大鼠。 o每组雌雄各半，雌性应未孕。如临床为单性别用药，应采每组雌雄各半，雌性应未孕。如临床为单性别用药，应采 用相应的单一性别的动物。用相应的单一性别的动物。 中药新药安全性评价25 饲养管理饲养管理 o饲料应有合格证，写明供应单位、批号、检测报告等。饲料应有合格证，写明供应单位、批号、检测报告等。 o动物饲养应在取得实验动物使用许可证的

25、动物房内进行。动物饲养应在取得实验动物使用许可证的动物房内进行。 o大鼠每笼不宜超过大鼠每笼不宜超过5 5只，雌雄分笼饲养。只，雌雄分笼饲养。 o试验前适应性饲养，一般观察试验前适应性饲养，一般观察5 57 7天，应作好观察记录。天，应作好观察记录。 中药新药安全性评价26 受试物受试物 o受试物一般为中试样品，应和药效、一般药理、急性毒性、受试物一般为中试样品，应和药效、一般药理、急性毒性、 药代动力学研究用药有相同的质量标准。如果由于给药容药代动力学研究用药有相同的质量标准。如果由于给药容 量或给药方法限制，可采用原料药进行试验。量或给药方法限制，可采用原料药进行试验。 o应有受试物名称或

26、代号、提供单位、批号、保存条件、使应有受试物名称或代号、提供单位、批号、保存条件、使 用注意事项等。用注意事项等。 o溶媒或赋形剂要注明批号、提供单位等。溶媒或赋形剂要注明批号、提供单位等。 中药新药安全性评价27 分分 组组 一般设高、中、低三个剂量组和对照组，对照组则给予相应的溶媒一般设高、中、低三个剂量组和对照组，对照组则给予相应的溶媒 或赋形剂；若溶媒或赋形剂有毒性，则应增设空白对照组（蒸馏或赋形剂；若溶媒或赋形剂有毒性，则应增设空白对照组（蒸馏 水）。水）。 给给 药药 1 1 给药途径给药途径 1.1 1.1 一般要求与临床给药途径一致，若不同则充分说明理由。一般要求与临床给药途径

27、一致，若不同则充分说明理由。 1.2 1.2 口服可采用直接灌胃给药。口服可采用直接灌胃给药。 1.3 1.3 临床静脉注射的药物采用静脉注射给药，特殊情况另作说明。临床静脉注射的药物采用静脉注射给药，特殊情况另作说明。 中药新药安全性评价28 大鼠长期毒性试验剂量设计大鼠长期毒性试验剂量设计 o 低剂量原则上应高于动物药效学试验的等效剂低剂量原则上应高于动物药效学试验的等效剂 量或预期的临床治疗剂量的等效剂量。高剂量量或预期的临床治疗剂量的等效剂量。高剂量 原则上应使动物产生明显的毒性反应，甚至可原则上应使动物产生明显的毒性反应，甚至可 引起少数动物死亡。高、低剂量组之间应再设引起少数动物死

28、亡。高、低剂量组之间应再设 一个中剂量组。一个中剂量组。 o 对中药复方或其他特殊情况下，可采用长毒可对中药复方或其他特殊情况下，可采用长毒可 允许的最大浓度和最大剂量作为高剂量。允许的最大浓度和最大剂量作为高剂量。 中药新药安全性评价29 剂量设计参考方法剂量设计参考方法 o临床剂量法：中药、天然药物的复方制剂多根据拟推荐临床剂量临床剂量法：中药、天然药物的复方制剂多根据拟推荐临床剂量 决定，一般决定，一般3 3个月以上长期毒性，大鼠高剂量组原则上应使动物产个月以上长期毒性，大鼠高剂量组原则上应使动物产 生明显的毒性反应，甚至可引起少量动物死亡。低剂量组原则上生明显的毒性反应，甚至可引起少量

29、动物死亡。低剂量组原则上 应高于动物药效学试验的等效剂量或预期的临床治疗剂量的等效应高于动物药效学试验的等效剂量或预期的临床治疗剂量的等效 剂量。高、低剂量组之间再设一个中剂量组。此为最常采用的方剂量。高、低剂量组之间再设一个中剂量组。此为最常采用的方 法。法。 o最大耐受量法（最大耐受量法（MTDMTD）：新药研究可参考国外文献资料或最大耐受）：新药研究可参考国外文献资料或最大耐受 量决定。用一个最大耐受量（量决定。用一个最大耐受量（MTDMTD）、）、1/3MTD1/3MTD、1/10MTD1/10MTD分别为大分别为大 鼠长期毒性试验的高、中、低三个剂量。鼠长期毒性试验的高、中、低三个剂

30、量。 o最大浓度法：对毒性较低的中药可采用最大浓度法，以药物可进最大浓度法：对毒性较低的中药可采用最大浓度法，以药物可进 行顺利灌胃的浓度作为高剂量组的给药浓度。行顺利灌胃的浓度作为高剂量组的给药浓度。 中药新药安全性评价30 o给药容量：给药容量：给药容量一般为给药容量一般为1 11.5ml/100g1.5ml/100g体重体重/ /次次 （若每天给药（若每天给药2 23 3次，每次给药容量可酌情减少），次，每次给药容量可酌情减少）， 每周可根据体重情况调整给药量，一般以不等浓度每周可根据体重情况调整给药量，一般以不等浓度 等容量给药。等容量给药。 o给药频率：给药频率：试验周期试验周期33

31、个月，每周个月，每周7 7天连续给药；天连续给药； 33个月，可考虑每周给药个月，可考虑每周给药6 6天，每天给药时间应尽天，每天给药时间应尽 量保持一致。量保持一致。 中药新药安全性评价31 p 检测指标检测指标 一般观察 外观体征和行为活动，流涎等腺体分泌、 粪便性状与颜色、毛色、行为、给药局部反 应、食量及体重变化。对死亡动物应进行系 统病理学检查。 中药新药安全性评价32 血液学指标(10项) 红细胞、网织红细胞计数 血红蛋白 血液学指标 白细胞总数及分类 血小板 凝血时间 中药新药安全性评价33 血液生化学指标（15-16项） 天门冬氨酸氨基转换酶(AST) 丙氨酸氨酸氨基转换酶(A

32、LT) 碱性磷酸酶(ALP) 血液生化 尿酸氮(BUN) 、总蛋白(TP) 主要指标 白蛋白(Alb) 、血糖(ALU) 总胆红素(TB)、肌酐(Cr) 总胆固醇(TC) -谷氨酰转移酶（非啮齿类动物） 中药新药安全性评价34 特殊检查 可能引起眼、耳毒性的药物，应增加眼及可能引起眼、耳毒性的药物，应增加眼及 耳毒性的检查。耳毒性的检查。 有些药物尚需研究对酸碱平衡、水盐代谢有些药物尚需研究对酸碱平衡、水盐代谢 的影响。的影响。 中药新药安全性评价35 系统尸体解剖 脏器系数（10个）：心、肝、脾、肺、肾、 肾上腺、胸腺、睾丸、 附睾、子宫、卵巢、脑 组织病理学检查（34项） 脑、脊髓、视神经

33、、眼、垂体、心、 肝、脾、肺、肾、肾上腺、甲状腺、睾丸、 子宫等。 中药新药安全性评价36 注意事项注意事项 o大鼠在解剖与取血前禁食不禁水过夜。大鼠在解剖与取血前禁食不禁水过夜。 o采血顺序：对照组、高剂量组、中剂量组、低剂量组各取一只，依次重采血顺序：对照组、高剂量组、中剂量组、低剂量组各取一只，依次重 复循环复循环 o血清标本应避光保存。血清标本应避光保存。 o需要保存的血清，可在需要保存的血清，可在4466的冰箱中保存的冰箱中保存7 7天备用。天备用。7 7天后应放在天后应放在- - 7070冷冻保存。冷冻保存。 o低温下保存的标本不能在室温慢慢溶解，而应放在低温下保存的标本不能在室温

34、慢慢溶解，而应放在25253737水浴中短水浴中短 时间快速溶解，充分混匀。时间快速溶解，充分混匀。 o标本应避免重复的冻结溶解，以免标本成分变化。标本应避免重复的冻结溶解，以免标本成分变化。 o采集的样本异常，应予以记录。采集的样本异常，应予以记录。 中药新药安全性评价37 o检测时间：检测时间：应于给药终期及恢复期结束时进行相关指标应于给药终期及恢复期结束时进行相关指标 检测，或于给药中期增加检测，或于给药中期增加1 1次指标检测。次指标检测。 o试验数据的统计：试验数据的统计：体重、耗食量、脏器指数依雌雄分别体重、耗食量、脏器指数依雌雄分别 进行组间比较。进行组间比较。 中药新药安全性评

35、价38 结果与分析结果与分析 o注意毒性反应出现的时间、恢复时间及动物死亡时间。注意毒性反应出现的时间、恢复时间及动物死亡时间。 o对所获取的数据进行全面和科学的分析，对在背景数据范围以外对所获取的数据进行全面和科学的分析，对在背景数据范围以外 的各实测值应在试验结果中详细列出，并予以合理的分析。的各实测值应在试验结果中详细列出，并予以合理的分析。 o应正确理解均值数据和单个数据的意义，并注重个体分析，同时应正确理解均值数据和单个数据的意义，并注重个体分析，同时 结合其它相关安全性试验及药代结合其它相关安全性试验及药代/ /毒代动力学的结果进行分析。综毒代动力学的结果进行分析。综 合考虑数据的

36、统计学意义和生物学意义。合考虑数据的统计学意义和生物学意义。 o试验报告：试验报告应全面客观反映整个试验过程收集的原始资试验报告：试验报告应全面客观反映整个试验过程收集的原始资 料和信息。料和信息。 中药新药安全性评价39 犬长期毒性观察指标犬长期毒性观察指标 一般状况观察一般状况观察 o每天根据体重给药并填写给药记录表每天根据体重给药并填写给药记录表 o应观察包括犬外观体征、行为活动、恶心呕吐、腺体分泌、呼吸、粪便、应观察包括犬外观体征、行为活动、恶心呕吐、腺体分泌、呼吸、粪便、 尿液（尿液（1111项）、摄食量、体重、给药局部及眼科反应等。项）、摄食量、体重、给药局部及眼科反应等。 o每天

37、应观察记录犬的一般状况，填写观察表。每天应观察记录犬的一般状况，填写观察表。 o每周应固定时间测量每周应固定时间测量1 1次犬体重及摄食量。次犬体重及摄食量。 心电图心电图 o检查指标：检查指标：导联心律、心率；导联心律、心率；PRPR间期、间期、QTQT间期、间期、QRSQRS波群、波群、T T波等。波等。 眼科检查眼科检查 o指标：角膜是否浑浊。虹膜有无充血、肿胀。结膜有无充血、水肿及分泌指标：角膜是否浑浊。虹膜有无充血、肿胀。结膜有无充血、水肿及分泌 物。瞳孔对光反射是否正常，必要时检查眼底血管是否正常。检查结果记物。瞳孔对光反射是否正常，必要时检查眼底血管是否正常。检查结果记 录在附表

38、录在附表-2“-2“其他情况其他情况”内。观察到有异常情况时详细记录。内。观察到有异常情况时详细记录。. . 血液学指标血液学指标 o应观察红细胞计数、网织红细胞计数、血红蛋白、白细胞计数及分类、血应观察红细胞计数、网织红细胞计数、血红蛋白、白细胞计数及分类、血 小板、凝血酶原时间等，必要时做骨髓涂片检查。小板、凝血酶原时间等，必要时做骨髓涂片检查。 中药新药安全性评价40 犬长期毒性观察指标犬长期毒性观察指标 系统尸解系统尸解 o大体解剖：系统尸检应全面细致，解剖过程同大鼠大体解剖。大体解剖：系统尸检应全面细致，解剖过程同大鼠大体解剖。 o称重并计算脏器指数的器官。称重并计算脏器指数的器官。

39、 组织病理学检查组织病理学检查 o所有药物长期毒性均应进行给药部位及给药部位淋巴结的病理学检查。所有药物长期毒性均应进行给药部位及给药部位淋巴结的病理学检查。 o对照组、高剂量组及尸检异常时要详细检查。其它剂量组应取材保存，在对照组、高剂量组及尸检异常时要详细检查。其它剂量组应取材保存，在 高剂量组有异常时再进行检查。高剂量组有异常时再进行检查。 o一般需进行病理组织学检查的组织或器官：详见下表一般需进行病理组织学检查的组织或器官：详见下表 o解剖时肉眼可观察到的其他异常器官组织应做详细的病理组织学检查。解剖时肉眼可观察到的其他异常器官组织应做详细的病理组织学检查。 o应根据中药的性、味、功效

40、、主治等情况增加相应的组织病理学检查。应根据中药的性、味、功效、主治等情况增加相应的组织病理学检查。 o组织的病理学检查应根据药物的特点及国家规定的技术要求进行。组织的病理学检查应根据药物的特点及国家规定的技术要求进行。 中药新药安全性评价41 三、中药新药免疫毒性研究技术要点三、中药新药免疫毒性研究技术要点 免疫毒性指外源性化合物对机体免疫免疫毒性指外源性化合物对机体免疫 系统的损伤作用，包括两类：系统的损伤作用，包括两类： 免疫抑制免疫抑制 免疫增强免疫增强 中药新药安全性评价42 型过敏反应试验型过敏反应试验 主动皮肤过敏试验（主动皮肤过敏试验（ACAACA） 主动全身过敏试验（主动全身

41、过敏试验（ASAASA） 被动皮肤过敏试验（被动皮肤过敏试验（PCAPCA） 试验一试验一 主动皮肤过敏试验主动皮肤过敏试验 （Active Cutaneous Anaphylaxis, ACA Active Cutaneous Anaphylaxis, ACA ） 动物：动物： 豚鼠豚鼠 阳性药：阳性药： 2 2，4-4-二硝基氯代苯二硝基氯代苯 （1%1%的致敏浓度和的致敏浓度和0.1%0.1%的激发浓度）的激发浓度） 中药新药安全性评价43 试验方法：试验方法： 致敏：在第致敏：在第0 0、第、第7 7和第和第1414天，以致敏剂量皮肤局部给药（天，以致敏剂量皮肤局部给药（ 致敏接触阶段

42、应保证受试物在皮肤上的停留时间致敏接触阶段应保证受试物在皮肤上的停留时间(6(6小时小时) )） 激发：末次给受试物致敏后激发：末次给受试物致敏后1414天，再次将受试物涂于脱毛天，再次将受试物涂于脱毛 区激发，区激发，6 6小时左右后，观察小时左右后，观察7272小时内皮肤过敏反应情况，记录小时内皮肤过敏反应情况，记录 各组各时间的平均分值，并按皮肤过敏反应评分标准进行评分各组各时间的平均分值，并按皮肤过敏反应评分标准进行评分 ，同时应密切观察动物是否有哮喘、站立不稳或休克等严重的，同时应密切观察动物是否有哮喘、站立不稳或休克等严重的 全身性过敏反应出现。全身性过敏反应出现。 根据试验组和对

43、照组动物皮肤反应的差别，判断受试物对根据试验组和对照组动物皮肤反应的差别，判断受试物对 皮肤过敏反应的性质，计算致敏发生率（将出现皮肤红斑、水皮肤过敏反应的性质，计算致敏发生率（将出现皮肤红斑、水 肿或全身过敏反应的动物例数除以受试动物总数）。肿或全身过敏反应的动物例数除以受试动物总数）。 中药新药安全性评价44 中药新药安全性评价45 试验二试验二 主动全身过敏试验主动全身过敏试验 （Active Systemic Anaphylaxis, ASAActive Systemic Anaphylaxis, ASA） 动动 物：物： 豚鼠豚鼠 阳性对照组：阳性对照组： 1 15mg/5mg/只牛

44、血清白蛋白或卵白蛋白或已只牛血清白蛋白或卵白蛋白或已 知致敏阳性物质知致敏阳性物质 试试 验方验方 法：法： 每组动物数至少每组动物数至少6 6只。只。 低剂量组：低剂量组： 临床最大剂量临床最大剂量 高剂量组：低剂量的数倍量。高剂量组：低剂量的数倍量。 致敏：静脉、腹腔或皮下注射，隔日一次，共致敏：静脉、腹腔或皮下注射，隔日一次，共3-53-5次次 激发：末次致敏后第激发：末次致敏后第10101414日一次快速静脉内给药。日一次快速静脉内给药。 剂量为致敏剂量的剂量为致敏剂量的2 25 5倍，给药容积倍，给药容积1 12ml 2ml 观察每只动物的症状及体重；计算过敏反应发生率。观察每只动物

45、的症状及体重；计算过敏反应发生率。 中药新药安全性评价46 中药新药安全性评价47 试验三试验三 被动皮肤过敏试验被动皮肤过敏试验 （Passive Cutaneous Anaphylaxis, PCAPassive Cutaneous Anaphylaxis, PCA） 动物：动物：大鼠，小鼠，有时用豚鼠大鼠，小鼠，有时用豚鼠 阳性对照：阳性对照：1-5mg/1-5mg/只牛血清白蛋白或卵白蛋白或已知致敏阳只牛血清白蛋白或卵白蛋白或已知致敏阳 性物质性物质 试验方法：试验方法： 每组动物数至少每组动物数至少6 6只。只。 制备抗血清：制备抗血清： 低剂量组：临床最大剂量低剂量组：临床最大剂量

46、 高剂量组：低剂量的数倍量。高剂量组：低剂量的数倍量。 致敏：静脉、腹腔或皮下注射，隔日一次，共致敏：静脉、腹腔或皮下注射，隔日一次，共3 35 5次次 激发：末次致敏后激发：末次致敏后10101414天左右采血，制备抗血清天左右采血，制备抗血清 中药新药安全性评价48 放放 样：样： 将上述各组抗血清用生理盐水稀释成将上述各组抗血清用生理盐水稀释成1 1：2 2、1 1：8 8、1 1：3232 或合适的稀释度。或合适的稀释度。 在动物背部预先脱毛在动物背部预先脱毛3 34cm24cm2的皮内注射各对应组的抗血的皮内注射各对应组的抗血 清清0.1mL0.1mL。 经经2424或或4848小时

47、后，各组静脉注射与致敏剂量相同的激发小时后，各组静脉注射与致敏剂量相同的激发 抗原加等量的抗原加等量的0.50.51%1%伊文思兰染料共伊文思兰染料共1mL1mL。 激发注射激发注射3030分钟后麻醉处死各组动物，剪取背部皮肤，分钟后麻醉处死各组动物，剪取背部皮肤， 进行蓝斑的测定。可采用直接测定法或比色测定法。进行蓝斑的测定。可采用直接测定法或比色测定法。 中药新药安全性评价49 四、中药新药刺激性和溶血性研究四、中药新药刺激性和溶血性研究 技术要点技术要点 o刺激性刺激性是指中药、天然药物制剂（包括活性成分和赋形是指中药、天然药物制剂（包括活性成分和赋形 剂）经皮肤、粘膜、腔道、肌肉、血管

48、等非口服途径给剂）经皮肤、粘膜、腔道、肌肉、血管等非口服途径给 药，经局部吸收或注射后对给药部位以及全身产生的毒药，经局部吸收或注射后对给药部位以及全身产生的毒 性作用，包括血管、肌肉、粘膜等刺激性。性作用，包括血管、肌肉、粘膜等刺激性。 o溶血性溶血性是指中药、天然药物制剂（包括活性成分和赋形是指中药、天然药物制剂（包括活性成分和赋形 剂）产生的溶血或红细胞凝聚等反应。剂）产生的溶血或红细胞凝聚等反应。 中药新药安全性评价50 ( (一一) )刺激性试验方法刺激性试验方法 1 1、血管刺激性试验、血管刺激性试验 试验动物：试验动物：家兔，动物数每组不少于家兔，动物数每组不少于3 3只。只。

49、生理盐水或溶媒生理盐水或溶媒对照对照 可采用同体左右侧自身对比法可采用同体左右侧自身对比法 给药部位：给药部位：选用耳缘静脉。多次给药一般不超过选用耳缘静脉。多次给药一般不超过7 7天。天。 单次给药刺激性试验：单次给药刺激性试验：给药后给药后48489696小时对动物和注射部小时对动物和注射部 位进行位进行肉眼观察肉眼观察； 多次给药刺激性试验：多次给药刺激性试验：每天给药前以及最后一次给药后每天给药前以及最后一次给药后4848 9696小时对动物和注射部位进行肉眼观察。小时对动物和注射部位进行肉眼观察。 给药部位给药部位组织病理学检查组织病理学检查 中药新药安全性评价51 2 2、肌肉刺激

50、性试验、肌肉刺激性试验 试验动物：试验动物：家兔，也可选用大鼠家兔，也可选用大鼠 生理盐水或溶媒作为生理盐水或溶媒作为阴性对照阴性对照 分别在左右两侧股四头肌内以无菌操作法各注入一分别在左右两侧股四头肌内以无菌操作法各注入一 定量的受试物，观察给药后不同时间注射局部肌肉反应定量的受试物，观察给药后不同时间注射局部肌肉反应 情况，如充血、红肿、变性、坏死等。情况，如充血、红肿、变性、坏死等。 注射后注射后4848小时处死动物，解剖取出股四头肌，纵向小时处死动物，解剖取出股四头肌，纵向 切开，观察注射部位肌肉的刺激反应，并计算相应的反切开，观察注射部位肌肉的刺激反应，并计算相应的反 应级，并进行局

51、部组织病理学检查，提供病理照片。应级，并进行局部组织病理学检查，提供病理照片。 中药新药安全性评价52 3 3、皮肤刺激性试验、皮肤刺激性试验 试验动物：试验动物：家兔，每组动物数家兔，每组动物数4 48 8只，雌、雄各半，也只，雌、雄各半，也 可选用小型猪或其他种属的动物。可选用小型猪或其他种属的动物。 设赋形剂或溶媒设赋形剂或溶媒对照对照，采用同体左右侧自身对比法。，采用同体左右侧自身对比法。 将受试物将受试物0.5 ml0.5 ml直接涂布于一侧已去毛的皮肤上，然后直接涂布于一侧已去毛的皮肤上，然后 用二层纱布（用二层纱布（2.5 cm2.5 cm2.5 cm2.5 cm）和一层玻璃纸或

52、类似物覆盖）和一层玻璃纸或类似物覆盖 ，再用无刺激性胶布和绷带加以固定；另一侧涂布赋形剂或，再用无刺激性胶布和绷带加以固定；另一侧涂布赋形剂或 溶媒做对照。贴敷时间至少溶媒做对照。贴敷时间至少4 4小时。贴敷结束后，除去受试物小时。贴敷结束后，除去受试物 并用温水或无刺激性溶剂清洁给药部位。并用温水或无刺激性溶剂清洁给药部位。 破损皮肤刺激性试验时在用药部位用砂纸磨或划破损皮肤刺激性试验时在用药部位用砂纸磨或划“井井” 字并以渗血为度。字并以渗血为度。 中药新药安全性评价53 单次给药单次给药在去药后在去药后30-6030-60分钟，分钟，2424、4848、7272小时观小时观 察，如延长不超过察，如延长不超过1414天。天。 多次给药多次给