核算中质量与浓度的换算

1、核算中质量与浓度的换算 光度计测量的转换：双链 DNA (ds DNA): A260 = OD260 = 1 相当于 50 卩 g/ml 溶液单链 DNA(ss DNA) A260 = OD260 = 1 相当于 33 卩 g/ml 溶液RNA A260 = OD260 = 1 相当于 40 卩 g/ml 溶液参考 文献： Freifelder, D., Physical Biochemistry:ApplicationstoBiochemistry & Molecular Biology, . Freema n and Compa ny, CA, 1982, p. 494-536.核酸分子量

2、计算方程式：吸光度(A)=摩尔消光系数X浓度X长度500 bp 的双链 DNAf 325,000 Daltons500 nt* 的单链 DNA 162,500 Daltons *nt = nucleotidedNMP勺平均分子量=325 Daltons (总的也就是腺苷三磷酸 dNMP, d是脱氧的意思，n是 核苷总称(包括ATCG) , M代表1 , P磷酸基团合起来就是脱氧核苷酸 2 -deox yn ucleoside- 5 - mono phosphate )寡聚体定量：寡聚体-寡聚体，是一种由数量较少的单体以共价键重复的连接而成的短多聚体，常是指氨基酸、糖、核苷酸的短多聚体。其单体的

3、数目一般在20以下，常为210个monomerie unit ( mer):单体单元，相当于 nt或者BP都可以。通常用于双链核酸中的单位，100 mer DNA相当于每一条链有 100nt，那么整条链就是 100bp20-mer, A260 = 1 的贮存液含有 5 nmol 寡聚体：5 nmol = 33 卩 g/(20 X 325)40-mer, A260 = 1 的贮存液含有 5 nmol 寡聚体：nmol = 33 卩 g/(40 X 325) pmol为单位的引物转换为 卩g为单位的引物：(X pmoles X长度 bpX 325) / 1,000,000例：10pmoles 的

4、25-mer，则为(10pmolx 25bpX 325) / 1,000,000 = 卩 g primer卩g为单位的引物转换为pmol为单位的引物：(X pmoles X 1,000,000 ) / (长度 bp X 325)例：卩g的20-mer，则为(卩 gX 1,000,000 ) / (20bpX 325) = pmoles primerpcr扩增反应引物浓度的计算：引物毫摩尔浓度(mM = pmoles/卩l例1: 100卩l PCR反应体系中有20pmol的引物=mM例2:引物为24bp,并溶解于 卩l H2O中；10卩l溶液稀释至测定其 A260为：A260 = OD260 =

5、;则贮存液在260nm( A260的吸光度为76;的贮存液含有个单位的A260;引物碱基组成为：A=6, C=6, G=6, T=6 ;260nm 引物的摩尔消光系数 =a(16,000) + b(12,000) + c(7,000) + d(9,600) 注：a、b、c、d分别是As、Gs、Cs、Ts的碱基个数；PCR 引物的摩尔消光系数 =6(16,000) + 6(12,000) + 6(7,000) + 6(9,600)=267,600则PCR引物贮存液的摩尔浓度为：76/267,600 = 284 mM核酸数据(Nucleic Acid Data)Kd是kilodaltons 的缩写

6、，既千道尔顿。是氨基酸的分子量单位。Kbs是千碱基对的意思，是核酸的单位名称。1个脱氧核糖核酸碱基的平均分子量为333 Dalto ns (道尔顿)1个核糖核酸碱基的平均分子量为 340 Dalto ns (道尔顿)DNA与表达蛋白之间分子量换算：1 kb DNA = 333 ami no acid x 104 Da (道尔顿)10,000 Da Protein270 bp DNA30,000 Da Protein810 bp DNA50,000 Da Protein1350 bp DNA100,000 Da Protein27 kb DNA一个DNA碱基对（钠盐）的平均分子量 =650道尔顿

7、A260 unit ds DNA =:50卩 g/ml =mM (in nu cleotides)A260 unit ss DNA =:33卩 g/ml =mM (in nu cleotides)A260 unit ss RNA =:40卩 g/ml =mM (in nu cleotides)双链DNA分子的分子量（道尔顿）=碱基对数目x 650双链DNA分子的末端摩尔数 =2 x DNA质量（克）/ DNA分子量（道尔顿） 限制性内切酶酶切后的DNA末端摩尔数：a) 环状DNA分子:2 x DNA摩尔数x 位点数b) 线性DNA分子：2 x DNA摩尔数x位点数 + 2 x DNA摩尔数1 卩 g 1000 bp DNA = pmol = x 1011 molecules1 卩 g pUC18/19 DNA (2686 bp) = pmol = x 1011 molecules1 卩 g pBR322 DNA (4361 bp) = pmol = x 1011 molecules1 卩 g M13mp18/19 DNA (7249 bp)1 卩 g 入 DNA (48502 bp) = pmol =1 pmol 1000 bp DNA = 卩 g1 pmol pUC18/19 DNA (2686 bp)=1 pmol p