第八章 蛋白质的测定

1、第八章第八章 蛋白质和氨基酸的测定蛋白质和氨基酸的测定 第一节第一节 概述概述 1. 蛋白质概况蛋白质概况 蛋白质是含氮的有机化合物，分子量很大。蛋白质是含氮的有机化合物，分子量很大。 主要由主要由C、H、O、N、S五种元素组成。某五种元素组成。某 些蛋白质中还含有微量的些蛋白质中还含有微量的 P、Cu、Fe、I 等。等。 食品和其原料中蛋白质含量的测定，主要食品和其原料中蛋白质含量的测定，主要 （也是最常用的）用凯氏定氮法测定总氮量，然（也是最常用的）用凯氏定氮法测定总氮量，然 后乘一个蛋白质换算系数。这里也包括非蛋白的后乘一个蛋白质换算系数。这里也包括非蛋白的 氮，如核酸、含氮碳水化合物、

2、生物碱等；含氮氮，如核酸、含氮碳水化合物、生物碱等；含氮 类脂、卟啉和含氮的色素所以只能称为粗蛋白的类脂、卟啉和含氮的色素所以只能称为粗蛋白的 含量含量（但马铃薯等非蛋白氮多的要单测）。（但马铃薯等非蛋白氮多的要单测）。 蛋白质是生命的物质基础，人体蛋白质是生命的物质基础，人体11%13%总总 热量来自蛋白质。无论动物、植物都含有蛋白质，热量来自蛋白质。无论动物、植物都含有蛋白质， 只是含量及类型不同。只是含量及类型不同。 关于氮关于氮-pro换算等数换算等数 对于氮含量换算成对于氮含量换算成pro含量的等数，历来采用含量的等数，历来采用 6.25，这个数值是以，这个数值是以pro平均含氮而导

3、出的数值，平均含氮而导出的数值， 但是食品中含氮的比例，因食品种类不同，差但是食品中含氮的比例，因食品种类不同，差 别是很大的，我们在测定别是很大的，我们在测定pro时，应该是不同时，应该是不同 的食品采用不同的换算等数，一般手册上列出的食品采用不同的换算等数，一般手册上列出 了一部分换称等数，用时可查，了一部分换称等数，用时可查，蛋蛋=6.25，肉，肉 =6.25，牛乳，牛乳=6.38，稻米，稻米=5.95，大麦，大麦=5.83，玉，玉 米米=6.25，小麦，小麦=5.83，麸皮，麸皮=6.31，面粉，面粉=5.70， 如果手册上查不到的样品则可用如果手册上查不到的样品则可用6.25，一般在

4、一般在 写报告时要注明采用的换算等数以何物代替。写报告时要注明采用的换算等数以何物代替。 蛋白质的测定方法分两大类：蛋白质的测定方法分两大类： 一类是利用蛋白质的共性即含氮量、肽键和折一类是利用蛋白质的共性即含氮量、肽键和折 射率等测定蛋白质含量；射率等测定蛋白质含量； 另一类是利用蛋白质中的氨基酸残基、酸性和另一类是利用蛋白质中的氨基酸残基、酸性和 碱性基因以及芳香基团等测定蛋白质含量。碱性基因以及芳香基团等测定蛋白质含量。 具体测定方法：具体测定方法： 凯氏定氮法凯氏定氮法最常用的，国内外应用普遍。最常用的，国内外应用普遍。 双缩脲反应、染料结合反应、酚试剂法双缩脲反应、染料结合反应、酚试

5、剂法 国外：国外： 红外分析仪红外分析仪 氨基酸总量氨基酸总量酸碱滴定法测定。酸碱滴定法测定。 各种氨基酸的分离与定量各种氨基酸的分离与定量色谱技术。色谱技术。 有多种氨基酸分析仪。有多种氨基酸分析仪。 第二节第二节 蛋白质的定性测定蛋白质的定性测定 一、蛋白质的一般显色反应一、蛋白质的一般显色反应 电泳或纸层析之后用一些染料与蛋白质结合电泳或纸层析之后用一些染料与蛋白质结合 并变色。书中列举了并变色。书中列举了 5 种染料。种染料。 二、复合蛋白质的显色反应二、复合蛋白质的显色反应 （一）糖蛋白的显色（一）糖蛋白的显色（3种方法）种方法） （二）脂蛋白的显色（二）脂蛋白的显色（2种方法）种方

6、法） 第三节第三节 蛋白质的定量测定蛋白质的定量测定 一般说来，动物性食品的蛋白质含量高于植物一般说来，动物性食品的蛋白质含量高于植物 性食品。例如牛肉中蛋白质含量为性食品。例如牛肉中蛋白质含量为 20.0%左右，左右， 猪肉猪肉 9.5%， 兔肉兔肉 21%， 鸡肉鸡肉 20%， 牛乳牛乳 3.5%， 带鱼带鱼 18.0%， 大豆大豆 40%， 面粉面粉 9.9%， 菠菜菠菜 2.4%， 黄瓜黄瓜 1.0%， 苹果苹果 1.4% 测定食品中的蛋白质的含量，对于评价食品的测定食品中的蛋白质的含量，对于评价食品的 营养价值，合理开发利用食品资源、提高产品质营养价值，合理开发利用食品资源、提高产品

7、质 量、优化食品配方、指导经济核算及生产过程控量、优化食品配方、指导经济核算及生产过程控 制均具有极其重要的意义。制均具有极其重要的意义。 一些蛋白质的含氮量一些蛋白质的含氮量 一般为一般为 15% 17.6%，有的上下浮动，有的上下浮动 可以测出总氮可以测出总氮 N 一、一、 凯氏定氮法凯氏定氮法 由由Kieldhl于于1833年提出，现发展为常量、年提出，现发展为常量、 微量、自动定氮仪法，半微量法及改良凯氏法。微量、自动定氮仪法，半微量法及改良凯氏法。 书中只介绍前三种。书中只介绍前三种。 16% N = N6.25 = 蛋白质含量蛋白质含量 （一）常量凯氏定氮法（一）常量凯氏定氮法 1

8、. 原理原理 样品与浓硫酸和催化剂一同加热消化，样品与浓硫酸和催化剂一同加热消化， 使蛋白质分解，其中碳和氢被氧化为二氧使蛋白质分解，其中碳和氢被氧化为二氧 化碳和水逸出，而样品中的有机氮转化为化碳和水逸出，而样品中的有机氮转化为 氨与硫酸结合成硫酸铵。然后加碱蒸馏，氨与硫酸结合成硫酸铵。然后加碱蒸馏， 使氨蒸出。用使氨蒸出。用H3BO3吸收后再以标准吸收后再以标准HCl 或硫酸溶液滴定。根据标准酸消耗量可以或硫酸溶液滴定。根据标准酸消耗量可以 计算出蛋白质的含量。计算出蛋白质的含量。 2、整个过程分三步：、整个过程分三步：消化、蒸馏、吸收与滴定消化、蒸馏、吸收与滴定 （1）消化）消化 总反应

9、式：总反应式： 加硫酸钾加硫酸钾 作为增温剂，提高溶液沸点，作为增温剂，提高溶液沸点， 纯硫酸沸点纯硫酸沸点 340，加入硫酸钾之后可以提高，加入硫酸钾之后可以提高 至至400以上。也可加入硫酸钠，氯化钾等提以上。也可加入硫酸钠，氯化钾等提 高沸点，但效果不如硫酸钾。高沸点，但效果不如硫酸钾。 2NH2（CH2）2COOH+13H2SO4 （NH4）2SO4+6CO2+12SO2+16H2O 一定要用浓硫酸（一定要用浓硫酸（98%） 加硫酸铜加硫酸铜 作为催化剂。还可以作消化终点作为催化剂。还可以作消化终点 指示剂（做蒸馏时碱性指示剂）。还可以加氧指示剂（做蒸馏时碱性指示剂）。还可以加氧 化汞

10、、汞（均有毒，价格贵）、硒粉、二氧化化汞、汞（均有毒，价格贵）、硒粉、二氧化 钛。钛。 加氧化剂加氧化剂 如双氧水、次氯酸钾等加速有机如双氧水、次氯酸钾等加速有机 物氧化速度。物氧化速度。 仪器：要防止仪器：要防止 爆沸。爆沸。 另外：介绍另外：介绍 “自动回流消自动回流消 化仪化仪” （2） 蒸馏蒸馏 消化液消化液 + 40% 氢氧化钠加热氢氧化钠加热 蒸馏，放出氨蒸馏，放出氨 气。气。 （3） 吸收与滴定吸收与滴定 用用4%硼酸吸收，用盐酸标准溶液滴定，指示硼酸吸收，用盐酸标准溶液滴定，指示 剂用混合指示剂（甲基红剂用混合指示剂（甲基红溴甲基酚绿混合指溴甲基酚绿混合指 示剂）国标用亚甲基兰

11、示剂）国标用亚甲基兰+甲基红。甲基红。 指示剂指示剂 红色红色 绿色绿色 红色红色 （酸）（酸） （碱）（碱） （酸）（酸） 用过量的用过量的 H2SO4 或或 HCl 标准溶液吸收，再标准溶液吸收，再 用用 NaOH 标准溶液滴定过剩的酸液，用甲基红标准溶液滴定过剩的酸液，用甲基红 指示剂。指示剂。 吸收吸收 滴定滴定 3、说明：、说明： 所用试剂溶液应用无氨蒸馏水配制。所用试剂溶液应用无氨蒸馏水配制。 消化时不要用强火，应保持和缓沸腾，消化时不要用强火，应保持和缓沸腾， 以免粘贴在凯氏瓶内壁上的含氮化合物以免粘贴在凯氏瓶内壁上的含氮化合物 在无硫酸存在的情况下消化不完全而造在无硫酸存在的情

12、况下消化不完全而造 成氮损失。成氮损失。 消化时应注意不时转动凯氏烧瓶，以便利用冷消化时应注意不时转动凯氏烧瓶，以便利用冷 凝酸液将附在瓶壁上的固体残渣洗下，并促进其消凝酸液将附在瓶壁上的固体残渣洗下，并促进其消 化完全。化完全。 样品中若含脂肪或糖较多时，消化过程中易样品中若含脂肪或糖较多时，消化过程中易 产生大量泡沫，为防止泡沫溢出瓶外，在开始产生大量泡沫，为防止泡沫溢出瓶外，在开始 消化时应用小火加热，并时时摇动；或者加入消化时应用小火加热，并时时摇动；或者加入 少量辛醇或液体石蜡或硅油消泡剂，并同时注少量辛醇或液体石蜡或硅油消泡剂，并同时注 意控制热源强度。意控制热源强度。 当样品消化

13、液不易澄清透明时，可将凯氏烧当样品消化液不易澄清透明时，可将凯氏烧 瓶冷却，加入瓶冷却，加入30过氧化氢过氧化氢 23 m1 后再继续后再继续 加热消化加热消化。 若取样量较大，如干试样超过若取样量较大，如干试样超过5 g 可按每克试可按每克试 样样5 m1的比例增加硫酸用量。的比例增加硫酸用量。 般消化至呈透明后，继续消化般消化至呈透明后，继续消化30分钟即可，分钟即可， 但对于含有特别难以氨化的氮化合物的样品如但对于含有特别难以氨化的氮化合物的样品如 含赖氨酸、组氨酸、色氨酸、酪氨酸或脯氨酸等含赖氨酸、组氨酸、色氨酸、酪氨酸或脯氨酸等 时，需适当延长消化时间。有机物如分解完全，时，需适当延

14、长消化时间。有机物如分解完全， 消化液呈蓝色或浅绿色，但含铁量多时，呈较深消化液呈蓝色或浅绿色，但含铁量多时，呈较深 绿色。绿色。 蒸馏装置不能漏气。蒸馏装置不能漏气。 蒸馏前若加碱量不足，消化液呈蓝色不生成蒸馏前若加碱量不足，消化液呈蓝色不生成 氢氧化铜沉淀，此时需再增加氢氧化钠用量。氢氧化铜沉淀，此时需再增加氢氧化钠用量。 氢氧化铜在氢氧化铜在7090时发黑。时发黑。 蒸馏完毕后，应先将冷凝管下端提离液面清蒸馏完毕后，应先将冷凝管下端提离液面清 洗管口，再蒸洗管口，再蒸1分钟后关掉热源否则可能造成分钟后关掉热源否则可能造成 吸收液倒吸。吸收液倒吸。 二、二、 微量凯氏定氮法微量凯氏定氮法

15、1、原理及适用范围同前、原理及适用范围同前 2、与常量法不同点：、与常量法不同点： 加入硼酸量加入硼酸量有有50 ml 10 ml, 滴定用盐酸浓度由滴定用盐酸浓度由0.1 mol/L 0.01 mol/L , 可用微量滴定管。可用微量滴定管。 3、蒸馏装置见下图、蒸馏装置见下图 。 10-210-2 三、三、 自动凯氏定氮法自动凯氏定氮法 1 1、原理及适用范围同前原理及适用范围同前 2 2、特点：特点： （1）消化装置用优质玻璃制成的凯氏消化瓶，红）消化装置用优质玻璃制成的凯氏消化瓶，红 外线加热的消化炉。外线加热的消化炉。 （2）快速：一次可同时消化）快速：一次可同时消化8个样品，个样品

16、，30分钟可消分钟可消 化完毕。化完毕。 （3）自动：自动加碱蒸馏，自动吸收和滴定，自）自动：自动加碱蒸馏，自动吸收和滴定，自 动数字显示装置。可计算总氮百分含量并记录，动数字显示装置。可计算总氮百分含量并记录，12 分钟完成分钟完成1个样。个样。 北京福德泰和科技有限公司北京福德泰和科技有限公司 产品名称：产品名称： 凯氏定氮仪凯氏定氮仪 二、双缩脲法二、双缩脲法 传统的凯氏定氮法应用范围广，灵敏度高、准传统的凯氏定氮法应用范围广，灵敏度高、准 确，不要大仪器，但费时间，有环境污染。确，不要大仪器，但费时间，有环境污染。 新开发的：双缩脲法、新开发的：双缩脲法、 紫外分光光度法、紫外分光光度

17、法、 染料结合法、染料结合法、 水杨酸比色法等。水杨酸比色法等。 1.原理原理 脲（尿素）脲（尿素）NH2CONH2 加热至加热至150160时，时， 两分子缩和成双缩脲。两分子缩和成双缩脲。 双缩脲能和硫酸铜的碱性溶液生成紫色络和物，这双缩脲能和硫酸铜的碱性溶液生成紫色络和物，这 种反应叫双缩脲反应。（缩二脲反应）种反应叫双缩脲反应。（缩二脲反应） 蛋白质分子中含有肽键蛋白质分子中含有肽键 CONH 与双缩脲结构与双缩脲结构 相似。在同样条件下也有呈色反应，在一定条件下，相似。在同样条件下也有呈色反应，在一定条件下， 其颜色深浅与蛋白质含量成正比，可用分光光度计其颜色深浅与蛋白质含量成正比，

18、可用分光光度计 来测其吸光度，确定含量。（来测其吸光度，确定含量。（560nm） NH2CONHCONH2 + NH3 NH2CONH2 + NH2CONH2 注：测蛋白质时叫双缩脲法，并不另加双缩脲。注：测蛋白质时叫双缩脲法，并不另加双缩脲。 样品不用消化样品不用消化 2. 方法特点及应用范围方法特点及应用范围 本法灵敏度较低，但操作简单快速，故在生物化学本法灵敏度较低，但操作简单快速，故在生物化学 领域中测定蛋白质含量时常用此法。本法亦适用于领域中测定蛋白质含量时常用此法。本法亦适用于 豆类、油料、米谷等作物种子及肉类等样品测定。豆类、油料、米谷等作物种子及肉类等样品测定。 3.主要仪器：

19、主要仪器： 分光光度计，离心机（分光光度计，离心机（4000 r/min） 4. 试剂：试剂： (1) 碱性硫酸铜溶液碱性硫酸铜溶液 (2) 四氯化碳四氯化碳 5操作方法：采用凯氏法测出的蛋白质样品为操作方法：采用凯氏法测出的蛋白质样品为 标准样绘标准曲线标准样绘标准曲线。 三紫外吸收法三紫外吸收法 1 1原理：利用蛋白质的特有基团，原理：利用蛋白质的特有基团， R R （ NH NHCHCHCOCO） 对紫外光有吸收作用在对紫外光有吸收作用在280 nm280 nm下，吸光度与蛋白下，吸光度与蛋白 质浓度成直线关系，求含量。质浓度成直线关系，求含量。 2 2适用范围：常用于生物化学工作，因为

20、干扰因适用范围：常用于生物化学工作，因为干扰因 素多，故在食品分析领域应用不广泛。素多，故在食品分析领域应用不广泛。 3 3主要仪器：主要仪器： 紫外分光光度计紫外分光光度计 离心机（离心机（3000 3000 5000 r/min 5000 r/min） 4 4操作：用凯氏法测定作标样做标准曲线操作：用凯氏法测定作标样做标准曲线 第五节第五节 氨基酸的定性测定氨基酸的定性测定 利用各种显色反应利用各种显色反应 第六节第六节 氨基酸定量测定氨基酸定量测定 一氨基酸的一般定量测定一氨基酸的一般定量测定 （一）甲醛滴定法（一）甲醛滴定法 1.1.原理：氨基酸本身有碱性原理：氨基酸本身有碱性 NHN

21、H2 2 基，又有基，又有 酸性酸性 COOH COOH 基，成中性内盐，加入甲醛基，成中性内盐，加入甲醛 溶液后，与溶液后，与 NHNH2 2 结合，碱性消失，再结合，碱性消失，再 用强碱来滴定用强碱来滴定 COOH COOH 基。基。 2 2特点：适用于发酵工业，如发酵液中含氮量，其特点：适用于发酵工业，如发酵液中含氮量，其 发酵过程中氮量减少情况等。（适于食品发酵过程中氮量减少情况等。（适于食品 中游离氨基酸的测定）中游离氨基酸的测定） 3 3双指示剂：双指示剂： 40% 40%中性甲醛溶液：以百里酚酞作指示剂，用中性甲醛溶液：以百里酚酞作指示剂，用 氢氧化钠将氢氧化钠将40%40%甲醛

22、中和至蓝色。甲醛中和至蓝色。 0.1% 0.1%百里酚酞乙醇溶液，百里酚酞乙醇溶液， 0.1% 0.1%中性红中性红50%50%乙醇溶液，乙醇溶液， 0.1 mol/L 0.1 mol/L 氢氧化钠标准溶液。氢氧化钠标准溶液。 4 4操作：同时取两份样：操作：同时取两份样： + + 中性红指示剂，用氢氧化钠直接滴，中和中性红指示剂，用氢氧化钠直接滴，中和 样液中其它酸性物质。样液中其它酸性物质。 + + 百里酚酞百里酚酞+ + 中性甲醛中性甲醛+ NaOH+ NaOH 滴，中和了滴，中和了 样液中氨基酸的羧基与其它酸性物质的总样液中氨基酸的羧基与其它酸性物质的总 和。和。 二者之差可计算氨基酸

23、含量二者之差可计算氨基酸含量 （二）茚三酮的比色法（二）茚三酮的比色法 原理：氨基酸在一定条件下与茚三酮起反应，原理：氨基酸在一定条件下与茚三酮起反应， 生成蓝紫色化合物，可比色定量。颜色深浅与氨生成蓝紫色化合物，可比色定量。颜色深浅与氨 基酸含量成正比，最大吸收波长为基酸含量成正比，最大吸收波长为570nm.570nm. （三）电位滴定法（三）电位滴定法 第七节第七节 氨基酸的分离与测定氨基酸的分离与测定 一薄层色谱法（薄层层析法（一薄层色谱法（薄层层析法（TLC TLC 法）法） Thin Layer ChromatographyThin Layer Chromatography 简介：简

24、介： 近年来发展起来的一种微量而快速的层析近年来发展起来的一种微量而快速的层析 方法，它把吸附剂或支持剂均匀的铺在玻璃板方法，它把吸附剂或支持剂均匀的铺在玻璃板 上成一薄层，把样品点在薄层上，然后用合适上成一薄层，把样品点在薄层上，然后用合适 的溶剂展开，从而达到分离、鉴定和定量的目的溶剂展开，从而达到分离、鉴定和定量的目 的。因为层析在薄层上进行，所以称为薄层层的。因为层析在薄层上进行，所以称为薄层层 析。它的应用范围比纸上层析更广泛，常用来析。它的应用范围比纸上层析更广泛，常用来 分析氨基酸、农药残留量、黄曲霉毒素等。分析氨基酸、农药残留量、黄曲霉毒素等。 （一）原理：（一）原理： 取一定

25、量经水解的样品溶液，滴在制好的薄层取一定量经水解的样品溶液，滴在制好的薄层 板上，在溶剂系统中进行双向上行法展开，板上，在溶剂系统中进行双向上行法展开，样品各样品各 组分在薄层板上经过多次的被吸附、解吸、交换等组分在薄层板上经过多次的被吸附、解吸、交换等 作用，同一物质具有相同的作用，同一物质具有相同的Rf值，不同成分则有不值，不同成分则有不 同的同的Rf值，因而各种混合物可达到彼此被分离的目值，因而各种混合物可达到彼此被分离的目 的。然后用茚三酮显色，与标准氨基酸进行对比，的。然后用茚三酮显色，与标准氨基酸进行对比， 鉴别各种氨基酸种类，从显色斑点颜色的深浅可以鉴别各种氨基酸种类，从显色斑点

26、颜色的深浅可以 大致确定其含量。大致确定其含量。 R Rf f = a / b = a / b a b 样点样点 溶剂前沿溶剂前沿 点样原点点样原点 优点：优点： 展开时间短，一般在展开时间短，一般在20203030分钟，展开距离分钟，展开距离 通常只需通常只需10 cm10 cm，且分离效果好。，且分离效果好。 层析后得到的斑点小而清晰。层析后得到的斑点小而清晰。 能够使用多种显色剂。能够使用多种显色剂。 点样量少，灵敏度高。（比纸层析高点样量少，灵敏度高。（比纸层析高1010100100 倍）倍） 精确到精确到0.01ug0.01ug。 也可用于大量分离也可用于大量分离500 mg500

27、mg，作为样品制备，作为样品制备 层析。层析。 缺点：缺点：R Rf f值重现性比纸上层析差。值重现性比纸上层析差。 分类：按层析的原理可分为：吸附、分配、分类：按层析的原理可分为：吸附、分配、 离子交换、凝胶等。离子交换、凝胶等。 （三）操作方法：（三）操作方法： 薄层板制备薄层板制备 样品液制备样品液制备 点样：距薄板底端点样：距薄板底端2cm2cm处，用针画一标记作为处，用针画一标记作为 原点。再以点样距扳子宽窄可点几个点同时原点。再以点样距扳子宽窄可点几个点同时 展开，点与点之间间隔展开，点与点之间间隔1 12cm2cm。 a.a.可用毛细玻璃管、微量吸管或微量注射器。注可用毛细玻璃管

28、、微量吸管或微量注射器。注 意要等一个点干了再点另一个点。意要等一个点干了再点另一个点。 b.b.用一小直径用一小直径3 mm 3 mm 滤纸片，浸入样液，埋到滤纸片，浸入样液，埋到 板子上先挖好一个小洞穴。板子上先挖好一个小洞穴。 展开：点样完了，放入密闭容器中（展开展开：点样完了，放入密闭容器中（展开 槽），倾斜一定角度槽），倾斜一定角度10103030，下端浸入展，下端浸入展 开剂开剂1cm1cm，千万别让溶剂浸过了样点。到离，千万别让溶剂浸过了样点。到离 顶端一部分，取出样板、晾干、显色。顶端一部分，取出样板、晾干、显色。 a.a.展开剂的有关情况：主要是低沸点的展开剂的有关情况：主要

29、是低沸点的2 23 3种有种有 机溶剂组成的溶剂系统，分离效果主要决定于展机溶剂组成的溶剂系统，分离效果主要决定于展 开剂的选择，因为吸附剂在一定情况下是恒定的，开剂的选择，因为吸附剂在一定情况下是恒定的， 吸附剂的选择余地远远小于展开剂的选择吸附剂的选择余地远远小于展开剂的选择。 b.b.展开剂的选择方法：展开剂的选择方法： .微量圆环法。微量圆环法。 .用小载波片试验，微量展开剂展开用小载波片试验，微量展开剂展开5cm5cm。 .图解法：图解法： 样品极性小，选吸附剂活性高，展开剂极性低的。样品极性小，选吸附剂活性高，展开剂极性低的。 样品极性大，选吸附剂活性低，展开剂极性高。样品极性大，

30、选吸附剂活性低，展开剂极性高。 有机溶剂极性由小到大为：有机溶剂极性由小到大为： 石油醚、环己烷、四氯化碳、三氯乙烷、甲苯、石油醚、环己烷、四氯化碳、三氯乙烷、甲苯、 苯、二氯甲烷、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、丙酮、苯、二氯甲烷、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、丙酮、 正丙醇、乙醇、甲醇、水、吡啶、有机酸类等。正丙醇、乙醇、甲醇、水、吡啶、有机酸类等。 c.c.展开的方式：展开的方式： 上行法、下行法、双向展开、单向多次展开、双上行法、下行法、双向展开、单向多次展开、双 向多次展开。向多次展开。 双向展开：双向展开： 显色：显色： a.a.喷适当的溶液，使斑点显色，即喷雾显色。喷适当的溶液，使斑点显色，即喷雾显色。 b.b.喷有荧光反应的物质，在紫外光下观察斑点。喷有荧光反应的物质，在紫外光下观察斑点。 c.c.将涂有荧光指示剂的薄层板放在紫外灯下观察。将涂有