1048.利用MTT法测定盐酸氮芥注射液对Hela细胞增殖的抑制效果

1、利用mtt法测定盐酸氮芥注射液对hela细胞增殖的抑制效果 摘要：研究盐酸氮芥注射液对hela细胞增殖的抑制效果。方法：应用mtt法分析不同浓度的盐酸氮芥注射液（chlormethinehydrochlorideinjection）对hela细胞增殖的抑制效果。结果：随着氮芥注射液浓度的逐渐增加，od值逐渐减小；由细胞增殖抑制率计算公式可以得出不同浓度的氮芥注射液对hala细胞的增殖抑制率分别为（15g/ml、30g/ml、60g/ml、120g/ml）的氮芥注射液对hala细胞的增殖抑制率分别为：-25.88% -57.76% -71.01% -83.64%。从结果可知，hala细胞增殖抑制

2、率随着氮芥注射液浓度的增高而增大。关键词：mtt法 盐酸氮芥注射液 hela细胞抗癌药物体外敏感性试验一直是临床化疗界瞩目的问题。现今已建立了多种肿瘤化疗药敏试验方法，但因成功率低和受试条件限制，都未能在临床推广应用1。由mosman(1983) 建立的mtt显色法是近年来用于验测药物对肿瘤细胞增殖影响的新指标。mtt比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性mtt还原为水不溶性的蓝紫色（或蓝色）结晶甲瓒（formazan）并沉积在细胞中；在通常情况下，甲臜生成量与活细胞数成正比。二甲基亚砜（dmso）能溶解细胞中的甲瓒，因此用酶联免疫检测仪在4

3、90nm或570nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。由于死细胞中不含琥珀酸脱氢酶，因此加入mtt 不会有反应。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。盐酸氮芥注射液是一种脂肪氮芥，是最早应用于临床的抗肿瘤药物之一。它是一种强烷化剂,对肿瘤的杀伤能力较大,抗瘤谱广,但选择性较差,毒性也较大。本文应用mtt法分析了不同浓度的盐酸氮芥注射液对hela细胞增殖的抑制效果。1 材料与方法1.1 材料制备用基础培养液分别配置浓度梯度分别为15ug/ml、30ug/ml、60ug/ml、120ug/ml的

4、氮芥注射液备用。1.2 实验方法1.2.1 接种收集对数期hela细胞细胞，调整细胞悬液浓度，使细胞浓度为23104/ml，每孔加入细胞悬液200l，使每孔内的细胞数为4000- 6000个。1.2.2 培养与药物处理培养箱内培养2436h，吸出培养液加入不同浓度梯度15ug/ml、30ug/ml、60ug/ml、120ug/ml的氮芥注射液各200 l，每个浓度接种4孔作为重复实验，以提高实验数据的准确性。同时，设置一个调零孔（培养基、mtt、二甲基亚砜），和一个对照孔（细胞、培养液、mtt、二甲基亚砜），为后面的实验做好准备。1.2.3 呈色培养箱内继续培养到第3天，于倒置显微镜下观察细胞

5、生长情况后，每孔加5 mg/ml的mtt溶液20 l，继续孵育4 h，终止培养；快速翻转培养板，弃去孔内培养上清液；然后每孔加dmso 150l，振荡30min，使结晶物充分融解。1.2.4 比色选择490nm波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果。1.2.5 计算与分析按照公式计算各种药物处理对细胞增殖率的影响。细胞增殖抑制率（未加药物处理的对照组吸光值药物处理组的吸光值）/未加药物处理的对照组吸光值。若该值为正说明药物对细胞增殖具有抑制作用，若值为零表明药物对细胞增殖无影响；若值为负说明药物对细胞增殖具有促进作用。2. 实验结果及其分析 表一：不同浓度的盐酸氮芥注射液对hela

6、细胞的抑制率盐酸氮芥注射液（ug/ml）空白组对照组153060120od值0.0630.4830.3580.2040.1400.079抑制率-25.88%-57.76%-71.01%-83.64%图一 不同浓度盐酸氮芥注射液对hela细胞的抑制作用从表一可以看到，盐酸氮芥注射液在浓度15g/ml-120g/ml范围内，随着浓度的递增，其对hela细胞的抑制越来越明显，抑制率不断上升，抑制率和剂量呈正相关趋势，目前本实验发现，浓度最高的那组浓度（120g/ml）对hela细胞的抑制作用最强（抑制率为-83.64%）。3.讨论与分析： 盐酸氮芥是一种脂肪氮芥，是最早应用于临床的抗肿瘤药物之一，其

7、抗肿瘤作用强，但其毒性过大，它们在杀伤肿瘤细胞的同时也杀伤了大量的机体增殖旺盛的体细胞引起机体抵抗力下降，而且在水中容易分解，故限制了其在临床上的应用。2-3如何选择适当的药物浓度，成为一个关键。 本次实验采用了不同的浓度药物对肿瘤细胞进行抑制。结果显示：抑制率与药物浓度呈正相关趋势，浓度最高的那一组，对肿瘤细胞的抑制也最明显。说明了此药能很好地限制了肿瘤细胞的增殖与生长。测定细胞生长情况是采用mosman创立的mtt比色分析法4，这一实验技术可通过测定线粒体能量代谢，以反映细胞的增殖情况，mtt测定是细胞内的线粒体酶可将黄绿色的mtt降解形成蓝紫色甲绨，用酶联免疫检测仪测定甲绨的含量来测定细

8、胞的存活比例。 本次是实验虽然得出结论，抗肿瘤效果与剂量成正相关趋势，但是如果进一步提高药物浓度，是不是就可以进一步提高抑制效果？再者，本次实验也有很大的提升空间，虽然高剂量的药物浓度杀伤了更多的肿瘤细胞，同时它也杀伤了更多人体的正常细胞（如果是应用于临床上），副作用会更大。如果让盐酸氮芥注射液，同时对正常培养的体细胞进行一个抑制，是不是可以得出一个浓度使得盐酸氮芥注射液对肿瘤细胞抑制教强，对体细胞抑制却相对较小。或者得出盐酸氮芥注射液对两种细胞抑制的数据，为临床应用提供一个可以权衡利弊的参考依据。参考文献：1 陈婷梅，祝彼得 抗白血病及天然药物的研究现状，中西医结合杂志，19952 刘铁梅等 葡萄糖苯氮芥衍生物的合成及其抗肿瘤活性的研究 中国实验诊断学 2007 3 任敏 盐酸氮芥极其异构体抗肿瘤研究 天津医药 2001 19 （12）4 campling bg, van cam