生药贡静的超氧化物歧化酶SOD的生产

1、超氧化歧物酶的概念超氧化歧物酶的概念 l超氧物歧化酶是一种新型酶制剂。它在生物界超氧物歧化酶是一种新型酶制剂。它在生物界 的分布极广，几乎从动物到植物，甚至从人到的分布极广，几乎从动物到植物，甚至从人到 单细胞生物，都有它的存在。单细胞生物，都有它的存在。 lSOD被视为生命科技中最具神奇魔力的酶、被视为生命科技中最具神奇魔力的酶、 人体内的垃圾清道夫。人体内的垃圾清道夫。SOD是氧自由基的自是氧自由基的自 然天敌，是机体内氧自由基的头号杀手，是生然天敌，是机体内氧自由基的头号杀手，是生 命健康之本。命健康之本。 超氧化歧物酶的来源超氧化歧物酶的来源 l超氧化物歧化酶是超氧化物歧化酶是1938

2、年年Marn等人首次从牛等人首次从牛 红血球中分离得到超氧化物歧化酶开始算起，红血球中分离得到超氧化物歧化酶开始算起， 人们对人们对SOD的研究己有七十多年的历史。的研究己有七十多年的历史。 l1969年年McCord等重新发现这种蛋白，并且发等重新发现这种蛋白，并且发 现了它们的生物活性，弄清了它催化过氧阴离现了它们的生物活性，弄清了它催化过氧阴离 子发生歧化反应的性质，所以正式将其命名为子发生歧化反应的性质，所以正式将其命名为 超氧化物歧化酶。超氧化物歧化酶。 超氧化歧物酶的分类超氧化歧物酶的分类 l一、含铜锌金属辅基的称（一、含铜锌金属辅基的称（Cu.ZnSOD），）， 最为常见的一种酶

3、，呈绿色，主要存在于机体最为常见的一种酶，呈绿色，主要存在于机体 细胞浆中细胞浆中 ； l二、是含锰金属辅基的称（二、是含锰金属辅基的称（MnSOD），呈），呈 紫色，存在于真核细胞的线粒体和原核细胞内；紫色，存在于真核细胞的线粒体和原核细胞内； l三、含铁金属辅基的称（三、含铁金属辅基的称（FeSOD），呈黄），呈黄 褐色，存在于原核细胞中。褐色，存在于原核细胞中。 超氧化歧物酶的化学反应超氧化歧物酶的化学反应 l 2O2-+2H+H2O2+O2 lO2-称为超氧阴离子自由基，是生物体多称为超氧阴离子自由基，是生物体多 种生理反应中自然生成的中间产物。它是活性种生理反应中自然生成的中间产物。

4、它是活性 氧的一种，具有极强的氧化能力，是生物氧毒氧的一种，具有极强的氧化能力，是生物氧毒 害的重要因素之一。害的重要因素之一。 l O2-具有细胞毒性，可使脂质过氧化，损具有细胞毒性，可使脂质过氧化，损 伤细胞膜，引起炎症，肿瘤和自身免疫性疾病，伤细胞膜，引起炎症，肿瘤和自身免疫性疾病， 并可能促使机体衰老。并可能促使机体衰老。 超氧化歧物酶对人体的作用超氧化歧物酶对人体的作用 l抑制心脑血管疾病 l抗衰老 l防治自身免疫性疾病 l肺气肿 l辐射病及辐射防护 l抗疲劳 l老年性白内障 l抗氧化 l预防慢性病 l抗疲劳 l化解女性的危机 l有效降低血脂、胆固醇、 血压 SOD应用领域应用领域

5、1、药物类、药物类 主要集中在炎症病患者，尤其治疗类风湿关 节炎、慢性多发性关节炎、心肌梗塞、心血管病、 肿瘤患者以及放射性治疗炎症病患者 ； 2、生化制药生化制药 作为一种生化酶制剂，广泛应用于临床和科 研上，可抗衰老，抗肿瘤、调节人体内分泌系统 ； SOD应用领域应用领域 3 3、化妆品、化妆品 可添加在化妆品中，具有抗氧化抗腐蚀的优 良性能。以SOD为主要成份的化妆品风靡世界，引 发了化妆品历史上的一场革命，使人类永葆青春 美丽梦想成真； 4 4、保健食品、饮料、保健食品、饮料 SOD糖、SOD口服液、SOD干啤等都非常畅销。 在饮料、糖果、糕点等食品中加入SOD既可利用其 抗腐蚀性延长

6、保质期，又可调节人体内分泌系统。 SOD的生产的生产 一、材料，试剂及仪器一、材料，试剂及仪器 l8 8新鲜蒜瓣，新鲜蒜瓣，0.05mol/L0.05mol/L磷酸缓冲溶液磷酸缓冲溶液 （pH7.8pH7.8），氯仿），氯仿- -乙醇混合液（氯仿乙醇混合液（氯仿- -无水乙无水乙 醇醇3 3：5 5），丙酮（用前预冷至），丙酮（用前预冷至-10-10）。）。 l研钵，石英砂，烧杯（研钵，石英砂，烧杯（50mL50mL），玻璃棒，），玻璃棒，pHpH计，计， 冷冻离心机，离心管冷冻离心机，离心管 二、操作步骤二、操作步骤 整个操作过程在整个操作过程在0 0到到55条件下进行条件下进行 lSODS

7、OD酶的提取酶的提取 称取5g大蒜蒜瓣大蒜蒜瓣，加入石英研磨破碎细胞后， 加入0.05mol/L的磷酸缓冲液（Ph7.8）15ml，继 续研磨20min，使SOD酶充分溶解到缓冲液中，然 后6000r/min冷冻离心15min，弃沉淀，取上清液。 l去除杂蛋白去除杂蛋白 上清液中加入0.25倍体积的氯仿-乙醇混合液 搅拌15min，6000r/min离心15min，弃去沉淀，得 到的上清液即为粗酶液。 lSODSOD酶的沉淀分离酶的沉淀分离 粗酶液中加入等体积的冷丙酮，搅拌15min， 6000/min离心15min，得到SOD酶沉淀。冷冻干燥 后即得成品。对成品进行称量并测定酶活力。 三、三

8、、SOD酶的检验酶的检验 l原理原理 连苯三酚在碱性条件下，能迅速自氧化，释放连苯三酚在碱性条件下，能迅速自氧化，释放 出氧气，生成带色的中间产物。在自氧化过程的出氧气，生成带色的中间产物。在自氧化过程的 初始阶段，黄色中间产物的积累在滞后初始阶段，黄色中间产物的积累在滞后3045s3045s后后 就与时间成线性关系。中间产物在就与时间成线性关系。中间产物在420nm420nm处有强烈处有强烈 的光吸收，在有的光吸收，在有SODSOD存在时由于它能催化生成氧气存在时由于它能催化生成氧气 与过氧化氢，从而阻止了中间物的积累，通过计与过氧化氢，从而阻止了中间物的积累，通过计 算就可以求出算就可以求

9、出SODSOD的活力。的活力。 l酶活性的测定酶活性的测定 （1 1）邻苯三酚自氧化速率的测定）邻苯三酚自氧化速率的测定 在10ml试管中加入pH值为8.30的50mol/LK2HPO4- KH2PO4缓冲溶液4.50ml，在250.5的恒温水浴中保温 10min，然后加入在250.5的恒温水浴中事先预热好的 连苯三酚溶液（空白管用10mmol/L HCL代替），迅速摇匀 倒入1cm比色皿中，以空白管为参比，在325nm下，每隔 30s测1次吸光值，连续记录3min，调节连苯三酚溶液用量， 将其自氧化速率控制在0.070（0.002）D/min。经实验 测得连苯三酚溶液的用量为61 （2 2）

10、样品活性测定）样品活性测定 在10ml试管中加入pH为8.30的4.5ml50mmol/L K2HPO4- KH2PO4缓冲溶液和一定体积的样液，在250.5的恒温 水浴中保温10min，然后加入在250.5的恒温水浴中事 先预热好的连苯三酚61， （空白管用 10mmol/L HCL代 替），迅速摇匀倒入1cm比色皿中，以空白管为参比，在 325nm下，每隔30s测1次吸光值，连续记录3min，调节样 液体积，使样液中连苯三酚的氧化速度控制在0.035 （0.002）D/min，记录此时样液体积。 谢谢观看！谢谢观看！ 超氧化歧物酶的来源超氧化歧物酶的来源 l超氧化物歧化酶是超氧化物歧化酶是

11、1938年年Marn等人首次从牛等人首次从牛 红血球中分离得到超氧化物歧化酶开始算起，红血球中分离得到超氧化物歧化酶开始算起， 人们对人们对SOD的研究己有七十多年的历史。的研究己有七十多年的历史。 l1969年年McCord等重新发现这种蛋白，并且发等重新发现这种蛋白，并且发 现了它们的生物活性，弄清了它催化过氧阴离现了它们的生物活性，弄清了它催化过氧阴离 子发生歧化反应的性质，所以正式将其命名为子发生歧化反应的性质，所以正式将其命名为 超氧化物歧化酶。超氧化物歧化酶。 超氧化歧物酶的化学反应超氧化歧物酶的化学反应 l 2O2-+2H+H2O2+O2 lO2-称为超氧阴离子自由基，是生物体多称为超氧阴离子自由基，是生物体多 种生理反应中自然生成的中间产物。它是活性种生理反应中自然生成的中间产物。它是活性 氧的一种，具有极强的氧化能力，是生物氧毒氧的一种，具有极强的氧化能力，是生物氧毒 害的重要因素之一。害的重要因素之一。 l O2-具有细胞毒性，可使脂质过氧化，损具有细胞毒性，可使脂质过氧化，损 伤细胞膜，引起炎症，肿瘤和自身免疫性疾病，伤细胞膜，引起炎症，肿瘤和自身免疫性疾病， 并可能促使机体衰老。并可能促使机体衰老。 （2 2）样品活性测定）样品活性测定 在10ml试管中加入pH为8.30的4.5ml50mmol/L K2HPO4- KH2PO4缓冲溶液和