血清谷丙转氨酶测定设计实验

1、实验目的实验目的 n掌握谷丙转氨酶活性测定的掌握谷丙转氨酶活性测定的 原理和方法原理和方法 l血清谷丙转氨酶作用于由丙氨酸及血清谷丙转氨酶作用于由丙氨酸及a a一酮戊一酮戊 二酸组成的基质。产生丙酮酸及谷氨酸二酸组成的基质。产生丙酮酸及谷氨酸 l血清加基液保温后产生丙酮酸的多少，即血清加基液保温后产生丙酮酸的多少，即 反应出谷丙转氨酶活性的大小。反应出谷丙转氨酶活性的大小。 l丙酮酸与丙酮酸与2 2，4-4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯肼作用生成丙酮酸 二硝基苯腙，在酸性溶液中显二硝基苯腙，在酸性溶液中显黄色黄色，在碱，在碱 性溶液中成醌型显性溶液中成醌型显棕红色棕红色。 实验原理实验原理

2、 本实验是在碱性条件下，生成醌类化合物的量反本实验是在碱性条件下，生成醌类化合物的量反 应丙酮酸的量，即反应了谷丙转氨酶的活性。应丙酮酸的量，即反应了谷丙转氨酶的活性。 本法以本法以lml血清与基质液在血清与基质液在37，保温，保温30分钟生分钟生 成成2.5g丙酮酸为谷丙转氨酶活性丙酮酸为谷丙转氨酶活性1单位单位 求酶活性单位的方法：求酶活性单位的方法： 1、标准品对照法：、标准品对照法：检品与标准丙酮酸液同样处检品与标准丙酮酸液同样处 理呈色，进行比色，计算出酶活性单位。理呈色，进行比色，计算出酶活性单位。 2、标准曲线法：、标准曲线法：取含待测物的一系列标准溶取含待测物的一系列标准溶 液

3、，作标准曲线，由标准曲线查得活性单位。液，作标准曲线，由标准曲线查得活性单位。 一、标准品对照法一、标准品对照法 取试管取试管4支，标号，按下表加试剂：支，标号，按下表加试剂： 基基 质质 液液 血血 清清 丙丙 酮酮 酸酸 水水 4个管同个管同 时放入时放入 37水浴水浴 中。中。 准确保温准确保温 30分钟，分钟， 呈呈 色色 试试 剂剂 基基 质质 液液 A A（检品）（检品）0.50.10.5 B B（检对照）（检对照）0.10.50.5 S S（标准）（标准）0.50.10.5 S S（标对照）（标对照） 0.10.50.5 实验操作实验操作 56放置放置5分钟。分钟。 加加0.4N

4、 NaOH液液5.0ml 慢慢加入慢慢加入（约（约1分钟），边加边混匀。分钟），边加边混匀。 室温放置室温放置 30分钟，分钟， 测测OD值，波长值，波长 520nm，用，用蒸馏水蒸馏水调零点。调零点。 计 算 （ODA-ODB） （ODs-ODs） = = X （待测样品丙酮酸含量）（待测样品丙酮酸含量） 50ug/ml 0.1 ml X = = （ODA-ODB） （ODs-ODs） 5 5 SGPT单位单位= （ODA-ODB） （ODs-ODs） 5 5 0.10.12.52.5 = （ODA-ODB） （ODs-ODs） 2020 二二、标准曲线法标准曲线法 配制一系列不同浓度的标准

5、丙酮酸液，并且各加以适量的基质液，配制一系列不同浓度的标准丙酮酸液，并且各加以适量的基质液， 作成标准曲线。具体做法如下表。作成标准曲线。具体做法如下表。 管号管号1 12 23 34 45 5空白空白 标准丙酮酸标准丙酮酸 （50g/ml50g/ml） 基质液基质液mlml 蒸馏水蒸馏水mlml 丙酮酸含量丙酮酸含量gg 相当相当GPTGPT单位单位 0.050.05 0.50.5 0.450.45 2.52.5 1010 0.10.1 0.50.5 0.40.4 5.05.0 2020 0.20.2 0.50.5 0.30.3 1010 4040 0.30.3 0.50.5 0.20.2

6、1515 6060 0.40.4 0.50.5 0.10.1 2020 8080 - - 0.50.5 0.50.5 - - 0 0 。 各管混匀，放各管混匀，放37水浴水浴5分钟分钟 加加0.4N NaOH液液5.0ml 慢慢加入慢慢加入（约（约1分钟），边加边混匀分钟），边加边混匀 然后各加呈色试剂然后各加呈色试剂0.5ml，混匀，混匀 56放置放置5分钟。分钟。 室温放置室温放置 30分钟分钟 测定测定OD值值, 波长波长 520nm，用，用蒸馏水蒸馏水调零点。调零点。 ABSS OD值值 一标准对照法一标准对照法 .原始数据记录原始数据记录 2、公式计算酶活性单位（要求带入数据，写出结

7、果、公式计算酶活性单位（要求带入数据，写出结果） 二、标准曲线法二、标准曲线法 .原始数据记录原始数据记录 12345空白空白 OD标准标准 OD标准标准 OD空白空白(纵坐标纵坐标)- 标准标准GPT单位单位(横坐标横坐标)1020406080- 2、绘制标准曲线，（要求规范作图）、绘制标准曲线，（要求规范作图） 3、通过方法一的、通过方法一的ODA-ODB，在标准曲线中，查得酶活性单位，在标准曲线中，查得酶活性单位 实验结果实验结果 注意事项注意事项 n操作中加操作中加 0.4N NaOH0.4N NaOH液时，需以较慢速度液时，需以较慢速度 加入，并且边加边摇匀加快时则加入，并且边加边摇

8、匀加快时则a a一戊酮二一戊酮二 酸引起的发色增强。酸引起的发色增强。 n本实验中各试剂加量都需要准确，并且要本实验中各试剂加量都需要准确，并且要 注意控制条件，保温时间要严格注意控制条件，保温时间要严格 n本法测定本法测定SGTPSGTP正常值为正常值为4040单位以下。单位以下。 n分析实验误差产生的原因分析实验误差产生的原因 n血清血清GPT活性测定的意义活性测定的意义 实验讨论实验讨论 l血清谷丙转氨酶作用于由丙氨酸及血清谷丙转氨酶作用于由丙氨酸及a a一酮戊一酮戊 二酸组成的基质。产生丙酮酸及谷氨酸二酸组成的基质。产生丙酮酸及谷氨酸 l血清加基液保温后产生丙酮酸的多少，即血清加基液保

9、温后产生丙酮酸的多少，即 反应出谷丙转氨酶活性的大小。反应出谷丙转氨酶活性的大小。 l丙酮酸与丙酮酸与2 2，4-4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯肼作用生成丙酮酸 二硝基苯腙，在酸性溶液中显二硝基苯腙，在酸性溶液中显黄色黄色，在碱，在碱 性溶液中成醌型显性溶液中成醌型显棕红色棕红色。 实验原理实验原理 （ODA-ODB） （ODs-ODs） = = X （待测样品丙酮酸含量）（待测样品丙酮酸含量） 50ug/ml 0.1 ml X = = （ODA-ODB） （ODs-ODs） 5 5 SGPT单位单位= （ODA-ODB） （ODs-ODs） 5 5 0.10.12.52.5 = （ODA-ODB） （ODs-ODs） 2020 各管混匀，放各管混匀，放37水浴水浴5分钟分钟 加加0.