第十一章 维生素的测定

1、食品分析食品分析 2 一、维生素的分类 二、各种维生素 的测定方法 3 维生素是是人体生长、发育、生殖 及维持生理机能所必须的营养素。它主 要是调节物质代谢，许多种维生素是构 成辅酶的主要成分，在调节物质代谢方 面具有十分重要的作用。 主要有维生素A、维生素D、维生素E及维生素K。 主要有B 族维生素及维生素C。 机体内存在的一些具有类似维生素生物活性的物质，它 们列为复合维生素B 族这一类中，通常称它们为“类维 生素物质”。包括：胆碱、生物类黄酮（维生素P）、 辅酶Q（泛醌）、肌醇等。 4 维生素是维持人体正常生命活动所必需的一类天然 有机化合物。其种类很多，目前已确认的有30余种，其 中被

2、认为对维持人体健康和促进发育至关重要的有20余 种。必须经常从食物中摄取维生素；长期缺乏任何一种 维生素都会导致相应的疾病。近几年已经查明仅有少数 几种维生素可以在体内合成，大多数维生素都必须由食 物供给。 （一）概述 5 因此，维生素作为强化剂已在食品工业的某些产品中 开始使用，测定食品中的维生素含量，不仅可评价食品 的营养价值，同时还起到监督维生素强化食品的剂量， 以防摄入过多的维生素而引起中毒，所以，测定食品中 维生素在营养分析方面具有重要的意义。 （一）概述 6 维生素化学结构各异，生理功能也各不相同，化学 结构上没有共性。 胺类（VB1） 醛类（VB6） 醇类（VA）等 （一）概述

3、维生素维生素 水溶性维生素水溶性维生素 脂溶性维生素脂溶性维生素 维生素维生素B、C等等 维生素维生素A、D、E、K 7 在这二类中与我们最密切，而且了解最多的有： 维生素A：是人体必需营养素，能促进人体发育，防止眼膜 炎、夜盲症等疾病。 维生素B1：也叫硫胺素，对人体的功能主要是防脚气病、神 经炎，帮助消化，促进发育。 维生素B2：对人体功能防口角炎、皮肤炎，防止怕光现象。 维生素C：防坏血病，促进外伤愈合，使机体增强抵抗力。 维生素D：调节体内矿物盐的平衡，特别是对人体内钙、磷 的代谢，并能防止软骨病。 （一）概述 8 VA：胡萝卜、西红柿、红薯等； B1（硫胺素）：胚芽、米糠、麸皮等；

4、B2（核黄素）：动物肝脏、鸡蛋、牛奶； B12：只有肉类食品还有这种维生素； VC（抗坏血酸）: 各种新鲜蔬菜，新鲜水果等； VE: 麦胚油、玉米油、芝麻油、豆类等。 （二）富含维生素的食品 9 VA、VD、VE、与类脂物一起存于食物中，摄食时可吸收， 可在体内积贮。 脂溶性维生素具有以下理化性质： 溶解性：脂溶性维生素不溶于水，易溶于脂肪、乙醇、丙 酮、氯仿、乙醚、苯等有机溶剂。 耐酸碱性：维生素A、D对酸不稳定， 对碱稳定，维生素E 对碱不稳定，但在抗氧化剂存在下或惰性气体保护下，也 能经受碱的煮沸。 （二）脂溶性V的测定 10 3耐热性、耐氧化性： 耐热性 氧化性 VA 好，能经受煮沸

5、易被氧化（光、热促进其氧化） VD 好，能经受煮沸 不易被氧化 VE 好，能经受煮沸 在空气中能慢慢被 （光、热、碱促进其氧化） （二）脂溶性V的测定 11 根据上述性质，测定脂溶性维生素时，通常： 皂化样品 水洗去除类脂物 有机溶剂提取 脂溶性维生素(不皂化物) 浓缩 溶于适当的溶 剂 测定。 在皂化和浓缩时，为防止维生素的氧化分解，常加入 抗氧化剂(如焦性没食子酸、维生素C等)。 对于A、D、E共存的样品，或杂质含量高的样品，在皂 化提取后，还需进行层析分离。 （二）脂溶性V的测定 12 结构特点与分析方法之间的关系 （二）脂溶性V的测定 1.维生素A的测定 CH3 CH3 CH3 CH2

6、OR CH3CH3 RH 维生素维生素A醇醇 RCOCH3 维生素维生素A醋酸酯醋酸酯 维生素A CH2OR CH3CH3 CH3 CH3 CH3 环己烯环己烯 共轭多共轭多 烯侧链烯侧链 多异构体多异构体 UV 易被氧化易被氧化 结构分析结构分析 共轭多烯结构：具有紫外吸收，可采用紫外吸收光谱法进 行鉴别，采用紫外分光光度法进行含量测定。天然维生素 A是全反式维生素A。 结构特点与分析方法之间的关系 维生素A含量测定方法有三氯化锑比色法、紫外分光光 度法、荧光分析法、液相色谱法。紫外分光光度法是法定 方法。 三氯化锑比色法多用于食品或饲料中的维生素A的测定。 （二）脂溶性V的测定 1.维生素

7、A的测定 维生素A （1）三氯化锑比色法（GB/T 5009.82-2003） 原理 （二）脂溶性V的测定 1.维生素A的测定 氯仿溶液中氯仿溶液中 维生素A+三氯化锑 兰色可溶性配合物 620nm波长比色 （1）三氯化锑比色法（GB/T 5009.82-2003） 适用范围及特点 本法适用于维生素A含量较高的各种样品（含量高于5 10g/g）。 该法的主要缺点是生成的蓝色配合物的稳定性差，比色 测定必须在6S内完成，否则蓝色会迅速消退，将造成极大误 差。 （二）脂溶性V的测定 1.维生素A的测定 （1）三氯化锑比色法（GB/T 5009.82-2003） 试剂 无水硫酸钠、乙酸酐 无水乙醚（

8、不含过氧化物） 无水乙醇（不含醛类物质） 三氯甲烷（不含分解物和水） 250g/L三氯化锑三氯甲烷溶液 1:1氢氧化钠溶液、0.5mol/L氢氧化钾 （二）脂溶性V的测定 1.维生素A的测定 （1）三氯化锑比色法（GB/T 5009.82-2003） 测定步骤： 样品预处理 含有维生素A的样品大多需首先除去脂肪，把维生素A从脂肪 中分离出来。常规的去脂方法是采用皂化法和研磨法。 （二）脂溶性V的测定 1.维生素A的测定 样品预处理样品预处理样品测定样品测定 A、皂化法（皂化反应是碱催化下的酯水解反应，尤指油脂的水解 ）: 脂肪与VA分离原理：脂肪和植物油的主要成分是甘油三酯， 它们在碱性条件下

9、水解的方程式为： （二）脂溶性V的测定 1.维生素A的测定 适用于维生素适用于维生素A含量不高的样品，但全部试验过程费时，且易导致维生素含量不高的样品，但全部试验过程费时，且易导致维生素A的损失。的损失。 u皂化 称取0.55g经组织捣碎机捣碎或充分混匀的样品于 三角瓶中，加入l0ml 1：1氢氧化钾及2040ml乙醇，在 电热板上回流30min。加入10m1水，稍稍振摇,若无浑浊现 象，表示皂化完全。 u提取 将皂化液移入分液漏斗，先用30ml水分两次冲洗皂 化瓶，洗液并入分液漏斗。再用 50ml乙醚分两次冲洗皂 化瓶，所有洗液并入分液漏斗，振摇2min，提取不皂化部 分。 （二）脂溶性V的

10、测定 1.维生素A的测定 静止分层后，水层放入第二分液漏斗。皂化瓶再用 30ml乙醚分 两次冲洗，洗液倾入第二分液漏斗，振摇后静止分层，将水层放入三 角瓶，醚层并入第一分液漏斗。如此重复操作，直至醚层不再使三氯 化锑一三氯甲烷溶液呈蓝色为止。 u洗涤 在第一分液漏斗中加30ml水，轻轻振摇，静止片刻 后，放出水层。再加入1520ml 0.5mol/L的氢氧化钾溶液， 轻轻振摇后，弃去下层碱液（除去醚溶性酸皂），继续用水 洗涤，至水洗液不再使酚酞变红为止。醚液静置10 20min 后，小心放掉析出的水。 （二）脂溶性V的测定 1.维生素A的测定 u浓缩 将醚层液经过无水硫酸钠滤入三角瓶中，再用约

11、 25ml乙醚冲洗分液漏斗和硫酸钠两次，洗液并入三角瓶内。 用水浴蒸馏，回收乙醚。待瓶中剩约5ml乙醚时取下。减 压抽干，立即准确加入一定量三氯甲烷（约5ml左右）， 使溶液中维生素A含量在适宜浓度范围内(35g）。 （二）脂溶性V的测定 1.维生素A的测定 B、研磨法 适用于每克样品维生素A的含量大于510g样 品的测定，如猪肝的分析。步骤简单、省时，结果准确。 u研磨 精确称取25g样品，放入盛有35 倍样品质量的 无水硫酸钠研钵中，研磨至样品中水分完全被吸收，并均质 化。 u提取 小心地将全部均质化的样品移入带盖的三角瓶内， 准确加入50100ml乙醚。紧压盖子，用力振摇2min；静置

12、澄清（大约需12 h），或离心澄清（保持低温）。 （二）脂溶性V的测定 1.维生素A的测定 u浓缩 取澄清提取乙醚液25m1，放入比色管中，在70 80水浴上抽气蒸干；然后立即加入lml三氯甲烷溶解残 渣。 （二）脂溶性V的测定 1.维生素A的测定 标准曲线的绘制 （二）脂溶性V的测定 1.维生素A的测定 6个3cm比色管编号 1 2 3 4 5 6 加各种浓度VA标液1ml 10 20 30 40 50 60 ug/ml 乙酸酐d 1 1 1 1 1 1 于620nm波长处，以 10ml三氯甲烷加 1滴乙酸酐调节吸 光度至零点；然后将标准比色系列按顺序移入光路前，迅速 加入9ml三氯化锑一三

13、氯甲烷溶液，于6s内测定吸光度（每支 比色管都在临测前加入显色剂）。以维生素A含量为横坐标， 以吸光度为纵坐标绘制曲线。 计算 （二）脂溶性V的测定 1.维生素A的测定 式中 -维生素A含量； c-由标准曲线上查得样品溶液中维生素A的含量，g/ml； c0-由标准曲线上查得样品空白液中维生素A的含量，g/ml； m-样品质量，g； V-样品提取后加入三氯甲烷定容之体积，ml； 100-以每100g样品计。 100 - = 0 V m cc x 说明及讨论 （二）脂溶性V的测定 1.维生素A的测定 维生素A极易被光破坏，实验操作应在微弱光线下进行，或使用棕 色玻璃仪器。 乙醚为溶剂的萃取体系，易

14、发生乳化现象。在提取、洗涤操作中， 不要用力过猛，若发生乳化，可加几滴乙醇破乳。 所用氯仿中不应含有水分,因三氯化锑遇水会出现沉淀，干扰比色 测定。故在每毫升氯仿中应加入乙酸酐1滴，以保证脱水。另外，由 于三氯化锑遇水生成白色沉淀，因此用过的仪器要用稀盐酸浸泡后再 清洗。 说明及讨论 （二）脂溶性V的测定 1.维生素A的测定 由于三氯化锑与维生素A所产生的蓝色物质很不稳定，通常生成6S 后便开始比色，产生蓝色后立即读取吸光度。 如果样品中含-胡萝卜素（如奶粉、禽蛋等食品）干扰测定，可 将浓缩蒸干的样品用正己烷溶解，以氧化铝为吸附剂，丙酮、乙烷混 合液为洗脱剂进行柱层析。 （三）水溶性维生素的测

15、定 水溶性维生素B1、B2和C，广泛存在于动植物组织中，饮食来源充 足。但是由于它们本身的水溶性质，除满足人体生理、生化作用外，任 何多余量都会从小便中排出。为避免耗尽，需要经常地由饮食来提供。 水溶性维生素都易溶于水，而不溶于苯、乙醚、氯仿等大多数有机溶 剂。在酸性介质中很稳定，既使加热也不破坏；但在碱性介质中不稳定， 易于分解，持别在碱性条件下加热，可大部或全部破坏。它们易受空气、 光、热、酶、金属离子等的影响； 维生素B2对光，特别是紫外线敏感，易被光线破坏； 维生素C对氧、铜离子敏感，易被氧化。 （三）水溶性维生素的测定 根据上述性质，测定水溶性维生素时，一般都在酸性溶液 中进行前处理

16、。 维生素Bl、B2 盐酸水解 酶解 提取 纯化 维生素C通常采用草酸、草酸醋酸、偏磷酸醋酸溶 液直接提取。在一定浓度的酸性介质中，可以消除某些还 原性杂质对维生素C的破坏作用。草酸价廉，使用方便，对 维生素C有很好保护作用。 淀粉酶、淀粉酶、 木瓜蛋白酶木瓜蛋白酶 活性人造浮石、活性人造浮石、 硅镁吸附剂硅镁吸附剂 （三）水溶性维生素的测定 维生素C是一种己糖醛基酸，有抗坏血病的作用，所以 又称作抗坏血酸。维生素C广泛存在于植物组织中，新鲜的 水果、蔬菜，特别是枣、辣椒、苦瓜、柿子叶、猕猴桃、 柑桔等食品中含量尤丰富。 维生素C具有较强的还原性，对光敏感，氧化后的产物 称为脱氢抗坏血酸，仍然

17、具有生理活性。进一步水解则生 成2，3 -二酮古乐糖酸，失去生理作用。 1.维生素C的测定 （三）水溶性维生素的测定 维生素C具有烯二醇结构，具有较强的还原性，可发生氧化还原反应； 对光敏感，氧化后的产物称为脱氢抗坏血酸，仍然具有生理活性。 进一步水解则生成2，3 -二酮古乐糖酸，失去生理作用。 与糖类似的结构：具有糖类似的性质和反应，可用于鉴别。 1.维生素C的测定 O HO H OH OHOH O （三）水溶性维生素的测定 总维生素C包括：还原型、脱氢型及二酮古乐糖酸。 维生素C常 用的测定方法有 1.维生素C的测定 测测 定定 方方 法法 二氯靛酚法（还原型二氯靛酚法（还原型V VC C

18、） 荧光法荧光法 2 2，4-4-二硝基苯肼法二硝基苯肼法 （总（总V VC C） 碘酸法碘酸法 碘量法碘量法 （三）水溶性维生素的测定 （一）二氯靛酚法（测定还原型抗坏血酸， GB/T 619586 ） 原理 1.维生素C的测定 还原型还原型 抗坏血酸抗坏血酸 还原型还原型2，6-二二 氯靛酚氯靛酚（无色）（无色） H H+ + 2，6-二氯靛二氯靛 酚（粉红色）酚（粉红色） + 脱氢型脱氢型 抗坏血酸抗坏血酸 + 还原型抗坏血酸可以还原染料2，6-二氯靛酚。该染料在酸性溶液 中呈粉红色(在中性或碱性溶液中呈蓝色)，被还原后颜色消失。 还原型抗坏血酸还原染料后，本身被氧化成脱氢抗坏血酸。在没

19、有 杂质干扰时，一定量的样品提取液还原标准染料液的量，与样品中抗杯 血酸含量成正比。 （三）水溶性维生素的测定 试剂 1.维生素C的测定 （1）2%草酸溶液 （2）0.000167mol/L KIO3标液 （3）1%淀粉溶液； （4）6%KI溶液； 088. 0= 2 1 V V T C6H8O6I2= C6H6O62HI 3(-)+5 I(-)+6 H(+)=3 I2+3 H2O （5）抗坏血酸标准溶液(1mg/ml)需标定 标定：吸标液（VC）5ml于三角瓶加6%KI溶液0.5ml加1%淀粉3 滴用0.00167mol/L KIO3标液滴定到淡兰色。 二氯靛酚法 （三）水溶性维生素的测定

20、试剂 1.维生素C的测定 （6）0.02%2，6二氯靛酚溶液 标定：吸5ml已知浓度V C标液 加5ml 1%草酸 用染料2， 6-二氯靛酚滴定至溶液呈粉红色，在15秒不褪色为终点。 计算：每毫升2，6-二氯靛酚相当于维生素C的毫克数等于滴定 度（T） 2 1 = V VC T 二氯靛酚法 （三）水溶性维生素的测定 测定步骤 1.维生素C的测定 样品样品还原型还原型VcVc的提取的提取还原型还原型VcVc的测定的测定 （1）提取 鲜样的提取：称100g鲜样加等量1%草酸溶液，倒入捣碎机中打成 匀浆，取10-40g匀浆（含1-2 mg抗坏血酸）倒入100ml容量瓶中，用 1%草酸溶液稀释定容，混

21、匀。 干样的制备：称1-4g （含1-2 mg抗坏血酸）放入研钵内，加入 1%草酸溶液磨成匀浆，用草酸溶液定容到100ml。 上述溶液若颜色深，可加入白陶土，将上述溶液过滤，滤液备用 。 二氯靛酚法 （三）水溶性维生素的测定 测定步骤 1.维生素C的测定 （2）滴定 吸取5-10ml滤液，置于50ml三角瓶，快速加入2,6 二氯靛酚溶液滴定，直到红色不能立即消失，而后再尽 快，逐滴加入，以呈现的粉红色在15秒内不消失为终点 。 二氯靛酚法 （三）水溶性维生素的测定 计算 1.维生素C的测定 V -消耗染料体积（ml） V0-滴定空白时所消耗的燃料的体积（ml） T -1ml染料所能氧化维生素C

22、的毫克数 含有样品的克数 M-滴定时所取滤液中含样品重量，g 100 )-( =)100/ 0 M TVV gmgC（维生素 二氯靛酚法 （三）水溶性维生素的测定 说明及注意事项 1.维生素C的测定 （1）样品采取后，应浸泡在已知量的2%草酸溶液中，以防止维生素C氧 化损失，测定过程要迅速。 （2）若样品滤液颜色较深，可加入白陶土再过滤。不能使用活性碳进行 脱色处理，因为活性碳会氧化维生素C，同时还会吸附维生素C。 （3）贮存过久的罐头食品，可能含大量的Fe2+，要用8%的醋酸代替2%草 酸。 （4）本法适用于果品、蔬菜及其加工制品中还原型抗坏血酸的测定（不 含二价铁、二价锡、一价铜、二氧化硫

23、、亚硫酸盐和硫代硫酸盐）。 （5）若样品中含有Fe2+、Cu2+、Sn2+、亚硫酸盐、硫代硫酸盐等还原性 杂质时，会使结果偏高。 二氯靛酚法 （三）水溶性维生素的测定 （二） 2，4-二硝基苯肼法（GB/T 5009.86-2003） 原理 1.维生素C的测定 还原型抗坏血酸脱氢型抗坏血酸 氧化氧化 二酮古乐糖酸 氧化氧化 二酮古乐糖酸 2，4-二硝基苯肼脎 浓硫酸浓硫酸 双-2，4-二硝基苯 500nm比色 （三）水溶性维生素的测定 试剂 1.维生素C的测定 4.5mol/L硫酸 （9:1）硫酸:H2O 2% 2，4-二硝基苯肼 2%草酸 抗坏血酸标准溶液1mg/ml 2%硫尿 1%硫尿 1

24、mol/ml盐酸 1%草酸 活性炭 2，4-二硝基苯肼法 （三）水溶性维生素的测定 标准曲线绘制 1.维生素C的测定 加2g活性碳 于50ml 1mg/ml抗坏血酸标准溶液中，振 摇1min，过滤。取10ml滤液置于500ml容量瓶中，加5.0g硫 尿，用1%草酸溶液稀释至刻度，抗坏血酸浓度为20ug/ml。 2，4-二硝基苯肼法 （三）水溶性维生素的测定 测定步骤 1.维生素C的测定 样品的制备显色硫酸处理比色氧化 称一定样（100g)鲜样 加等量2%草酸 于高 速捣碎机捣碎 取匀浆140g 用1%草酸定容 100ml 过滤滤液待用 取滤液25ml 加2g活性炭 摇1分钟 静置过滤 弃去初滤

25、液，取滤液10ml 加入2%硫脲溶液 混匀 得样品氧化液 取上述氧化液各4ml于三支试管中向其中两支管 加入2%2，4-二硝基苯肼1.0ml,另一管作空白 将 三支管加盖 于37保温箱3小时 取出后样品 管放入冰水中 样品空白管取出后冷至室温 在 样品空白管加入2，4-二硝基苯肼 1ml 置于室温 下放置10-15min 样品管和空白管都于冰浴中 向上述已放入冰水中的三支试管各加入（9:1）H2SO4 5ml于各管中（边加边摇） 将试管从冰浴中取出 室温下放置30分钟后 立即比色，在520nm 测吸光度，从标准曲线 上查出相应的含量 2，4-二硝基苯肼法 （三）水溶性维生素的测定 测定步骤 1

26、.维生素C的测定 取7个100ml容量瓶编号 1 2 3 4 5 6 7 加VC标液20ug/ml 5 10 20 25 40 50 60ml 加硫脲溶液（ml） 95 90 80 75 60 50 40ml 2，4-二硝基苯肼（ml） 1 1 1 1 1 1 1ml 按样品测定步骤进行显色反应，形成脎并比色。以抗坏血酸为纵坐标 ，吸光度为横坐标绘制标准曲线。 2，4-二硝基苯肼法 （三）水溶性维生素的测定 结果计算 1.维生素C的测定 式中：X-样品中总抗坏血酸含量，mg/100g c- 从标准曲线查得“样品氧化液”中总Vc的浓度，ug/ml V-试样用1%草酸定容的体积，ml m-样品质量

27、，g F-样品氧化处理过程中的稀释倍数 1000 100 =F m VC X 2，4-二硝基苯肼法 （三）水溶性维生素的测定 注意事项 1.维生素C的测定 活性炭对抗坏血酸的氧化作用，是基于其表面吸附的氧进 行界面反应，加入量过低，氧化不充分，过高则导致对抗坏血 酸的吸附作用，使测定结果偏低。 操作过程应避光。 试管从冰水中取出后，由于糖类的影响造成显色不稳定， 颜色会逐渐加深，30min后影响将减小，故加入硫酸后30min准 时比色。 检出限：112ug/mL，所测结果为总量 2，4-二硝基苯肼法 （三）水溶性维生素的测定 注意事项 1.维生素C的测定 活性炭对抗坏血酸的氧化作用，是基于其表

28、面吸附的氧进 行界面反应，加入量过低，氧化不充分，过高则导致对抗坏血 酸的吸附作用，使测定结果偏低。 操作过程应避光。 试管从冰水中取出后，由于糖类的影响造成显色不稳定， 颜色会逐渐加深，30min后影响将减小，故加入硫酸后30min准 时比色。 检出限：112ug/mL，所测结果为总量 2，4-二硝基苯肼法 （三）水溶性维生素的测定 VB2在440500nm波长下光照产生绿色荧光，稀溶液中 其荧光强度与浓度呈正比。 一般在525nm下测定荧光强度。再在试液中加入低亚硫酸钠 （Na2S2O4）还原VB2，使其荧光消失，再次测量试液中残 余荧光，两者相减极为VB2荧光强度，进一步查标准曲线测 算

29、。 3.维生素B2的荧光测定法 (GB 5413.92010 ) 高效液相色谱法测定维生素是近几年发展起来的方法， 此法能快速分离和测定维生素和它的同分异构体、酯及其 衍生物。 高效液相色谱法（HPLC）是20世纪60年代末70年代初 发展起来的一种新型分离分析技术，随着不断改进与发展 ，目前已成为应用极为广泛的化学分离分析的重要手段。 它是在经典液相色谱基础上，在技术上采用了高压泵、高 效固定相和高灵敏度检测器，因而具备速度快、效率高、 灵敏度高、操作自动化的特点。 （一）高效液相色谱法概述 (High Performance Liquid Chromatography，HPLC) (GB

30、5413.92010 ) 原理 （一）高效液相色谱法概述 (High Performance Liquid Chromatography，HPLC) 储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器 进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相) 内, 由于样品溶 液中的各组分在两相中具有不同的分配系数, 在两相中作相 对运动时, 经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程, 各组分 在移动速度上产生较大的差别, 被分离成单个组分依次从柱 内流出, 通过检测器时, 样品浓度被转换成电信号传送到记 录仪,数据以图谱形式打印出来。 (GB 5413.92010 ) 原理 （一）高效液相色谱法概述 (High

31、 Performance Liquid Chromatography，HPLC) 储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器 进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相) 内, 由于样品溶 液中的各组分在两相中具有不同的分配系数, 在两相中作相 对运动时, 经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程, 各组分 在移动速度上产生较大的差别, 被分离成单个组分依次从柱 内流出, 通过检测器时, 样品浓度被转换成电信号传送到记 录仪,数据以图谱形式打印出来。 (GB 5413.92010 ) 原理 （一）高效液相色谱法概述 (High Performance Liquid Chromatography

32、，HPLC) 高效液相色谱仪的结构示如下图，一般可分为4个主要部分： 高压输液系统，进样系统，分离系统和检测系统。此外还配 有辅助装置：如梯度淋洗，自动进样及数据处理等。其工作 过程如下：注入欲分离的样品时，流动相将样品带入色谱柱 进行分离，然后依先后顺序进入检测器，记录仪将检测器送 出的信号记录下来，由此得到液相色谱图。 (GB 5413.92010 ) 原理 （一）高效液相色谱法概述 (High Performance Liquid Chromatography，HPLC) (GB 5413.92010 ) （一）高效液相色谱法概述 (High Performance Liquid Chr

33、omatography，HPLC) u高压输液系统 由于高效液相色谱所用固定相颗粒极细，因此对流动相阻力很大，为使 流动相较快流动，必须配备有高压输液系统。它是高效液相色谱仪 最重要的部件，一般由储液罐、高压输液泵、过滤器、压力脉动阻 力器等组成，其中高压输液泵是核心部件。对于一个好的高压输液 泵应符合密封性好，输出流量恒定，压力平稳，可调范围宽，便于 迅速更换溶剂及耐腐蚀等要求。常用的输液泵分为恒流泵和恒压泵 两种。恒流泵特点是在一定操作条件下，输出流量保持恒定而与色 谱柱引起阻力变化无关；恒压泵是指能保持输出压力恒定，但其流 量则随色谱系统阻力而变化，故保留时间的重现性差，它们各有优 缺点。目前恒流泵正逐渐取代恒压泵。 (GB 5413.92010 ) （一）高效液相色谱法概述 (High Performance Liquid Chromatography，HPLC) u高压输液系统 优点：泵容积小，易于清洗及更换流动相，泵压较高，可达400MPa。 缺点：脉冲较大，需要有阻尼器或采用双泵系统来克服脉冲，达到恒 定的流速。双泵系统根据连接方式的不同分为串联式和并联式双柱塞 往复泵。 (GB