色谱常见问题摘选及故障排除：3-色谱问题摘选分享（一）

1、色谱问题摘选分享色谱问题摘选分享 （一）（一） 1 1、请问怎么测量有机流动相的、请问怎么测量有机流动相的pHpH值值? ? 流动相的pH值一般指不含有机溶剂的pH值，因为在实际 过程中，由于色谱柱的不同，最佳分析流动相中有机溶剂 的比例也不同，不同溶剂混合后pH值会有一定的变化。 在有机溶剂中甲醇偏酸性，乙腈偏碱性。 一般表示流动相的pH值是采用流动相中水相的pH值。在 文献中也有混合有机溶剂流动相的pH值，但严格讲，此 时不能简单地叫pH值，而叫做表观pH值。其测定也是用 普通pH计。 2 2、三乙胺在液相色谱流动相中有什么作用、三乙胺在液相色谱流动相中有什么作用? ? 三乙胺是改性剂，通

2、常加在反相或离子对流动相中，主 要的作用是减少样品中碱性组分的拖尾。因为C18键合相 上残留的硅羟基容易与碱性化合物结合而造成峰拖尾， 所以，在流动相中加入碱性的三乙胺后可以首先与硅羟 基结合，从而阻碍了样品中碱性化合物与硅羟基的作用， 减少了峰拖尾。一般用量在1020mmol/L或流动相体积的 0.1%3%。在实际使用过程中，一般不单独使用碱性三乙 胺，而是与其他试剂组成缓冲体系。 3 3、长时间分析中如何保证保留时间不漂移？、长时间分析中如何保证保留时间不漂移？ 仪器的稳定性：泵流量、渗漏、堵塞、比例阀等 温度恒定：柱温设置不宜过高，且与外面的温差要小； 流动相：密封性、恒温、比例高； 平

3、衡时间：需要平衡足够的时间； 方法的稳定性：流动相的pH与样品的等电点相差2个单位 以上； 色谱柱：质量好、冲洗干净、对流动相稳定； 样品：溶解在适当的溶剂中、样品的所有组分在下一次运 行前全部洗脱出色谱柱。 4 4、标准溶液和样品中的同一物质的出峰时间并不、标准溶液和样品中的同一物质的出峰时间并不 一致？一致？ 通常保留时间应该是一致的； 但是样品中有很多杂质的话也会有影响； 物质在样品中的存在形式同标准溶液中或许有不同，或者 是样品溶剂与流动相和对照样溶剂差别较大； 为了确证这种情况，可以将两种溶液混合，看看出峰时间 是否一致，如果不一致，就要设法解决。 5 5、保护柱和预柱的区别？、保护

4、柱和预柱的区别？ 保护柱叫Guard Column，装在分析柱前，进样器后，填料 性质应与分析柱相同或相近，只是颗粒的直径大一些，主 要是保护分析柱不被样品中的强保留杂质或颗粒物污染。 预柱叫Pre-Column，应该装在泵后，进样器前，起到饱和 流动相和过滤杂质的作用（过去的硅胶填料对流动相要求 较高，超出28的pH范围后填料会溶于流动相中，预柱就 是牺牲其中的填料来饱和流动相，以保护分析柱）。 6 6、怎样选择固相萃取柱的大小？、怎样选择固相萃取柱的大小？ 根据样品量的多少来确定，见下表： 样品量萃取柱的大小 1ml1ml 1250ml，且不要求萃取速度3ml 1250ml，要求快萃取速度

5、6ml 10250ml，要求高样品容量12ml、20ml或60ml 1L，且不要求萃取速度12ml、20ml或60ml 100ml1L47ml 1L，且要求高样品容量90ml 7 7、流动相中可以加什么酸？、流动相中可以加什么酸？ 三氟乙酸：酸性强，用于对流动相挥发性、紫外吸收和酸度有较高要 求的体系中，如因为三氟乙酸的挥发性好，在用ELSD检测等情况时常 必需；三氟乙酸与醋酸的紫外吸收不同。三氟乙酸的透光性较好，但 腐蚀性较大，用于蛋白质、核酸类分析较多； 高氯酸：调节酸性能力较强，可作为离子对试剂使用； 醋酸：很多情况下使用，调节酸性能力平缓，酸性较弱，对色谱柱的 影响比较小； 磷酸：可以

6、抑制酸性物质的水解，紫外吸收小，用紫外检测时，有助 于提高信噪比。容易长霉； 硫酸：实际效果相当于磷酸，不能用于LC-MS； 甲酸：酸性比醋酸强，比其他酸弱，常用于LC-MS流动相的添加剂。 8 8、甲醇水作梯度分析时为何比乙腈水漂移大？、甲醇水作梯度分析时为何比乙腈水漂移大？ 甲醇的紫外截至波长为205nm，水为200nm，乙腈为 190nm，因此一般情况下作梯度分析时甲醇水比乙腈水造 成的基线漂移大。随着检测波长的提高，飘移会变小，尤 其是甲醇水系统。因此，在梯度分析时，如果在较低的波 长，用乙腈比较好，如果用甲醇，那么变化范围不易过大， 同时要注意水的纯度和色谱试剂的可靠性。 9 9、毛细管柱进样口石英衬管中的硅烷化玻璃棉的、毛细管柱进样口石英衬管中的硅烷化玻璃棉的 作用是什么？作用是什么？ 填充硅烷化石英玻璃棉可增大进样口内接触样品的表面积， 加速样品汽化，且使样品汽化更均匀；可以防止注射器针 尖的歧视现象，还可以避免颗粒物质堵塞色谱柱。对极性 样品的分析特别有效。 1010、程序升温达到最高温度时总是出现一个很大的、程序升温达到最高温度时总是出现一个很大的 峰，为什么？峰，为什么？ 有两种可能：一种是色谱柱流失；二是样品中的高沸点组分； 处理的方法：不进样，空走程序升温次，如果现象消失， 则多为样品问题，如果现象依旧则多为系统问题。 另外，进样