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会计学1 PCR扩增目的基因扩增目的基因 第1页/共14页 第2页/共14页 物的5端3 端延伸，合成与模 板互补的DNA链。 第3页/共14页 第4页/共14页 第5页/共14页 第6页/共14页 第7页/共14页 1.准备PCR反应溶液 （1）按序将如下成分混合置 于Eppendorf管内 a.10扩增缓冲液 10L b.4dNTPs 8L c.引物11L d.引物2L e.模板DNA 1L（10ng） f.TaqDNA聚合酶L （2.5U） 加水至终100L 第8页/共14页 （2）手指轻弹 Eppendorf管底部 离心2s （3）加石蜡油50L 封住溶液表面 第9页/共14页 2.PCR扩增反应 加好样的Eppendorf管置于PCR扩 增仪内 变性：95 5min 951min 退火：55 45s 延伸：72 1min 重复循环30次 循环结束后72 延伸8min 反应完毕，取样置-4 待用 第10页/共14页 3.结果观察 取样进行琼脂糖凝胶电泳 溴化乙锭（EB）染色 观察DNA条带 高度灵敏的荧光染色剂 染色效果好 操作方便 稳定性差 强致癌剂 中度毒性 第11页/共14页 Thank you !

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