人体疟原虫镜检技术

1、人体疟原虫镜检技术 一、概述一、概述 疟原虫属原生动物亚界的真核单细胞动物。在疟原虫属原生动物亚界的真核单细胞动物。在 生物界的位置：疟原虫为原生动物门、孢子纲、生物界的位置：疟原虫为原生动物门、孢子纲、 血孢子目、疟原虫科、疟原虫属。疟原虫有血孢子目、疟原虫科、疟原虫属。疟原虫有 149149种，目前公认的自然界感染人体的疟原虫种，目前公认的自然界感染人体的疟原虫 只有四种：即间日疟（只有四种：即间日疟（PvPv）、恶性疟（）、恶性疟（PfPf）、）、 三日疟（三日疟（PmPm）、蛋形疟（）、蛋形疟（POPO）四种。）四种。 二、疟原虫生活史二、疟原虫生活史 1、红细胞外期、红细胞外期 2

2、2、红细胞内期、红细胞内期 3 3、子孢子增殖期、子孢子增殖期 周围血液中各种血细胞的形态周围血液中各种血细胞的形态 三、人体疟原虫形态特征三、人体疟原虫形态特征 1 1、薄血膜上疟原虫的形薄血膜上疟原虫的形 态鉴别态鉴别 1.11.1间日疟形态特征间日疟形态特征 1.1.11.1.1环状体环状体(R(R） . . .滋养体（滋养体（T)T) . . .裂埴体（裂埴体（S S） . . .配子体（配子体（G G） 间日疟原虫环状体（小滋养体）间日疟原虫环状体（小滋养体） （示意图）（示意图） PV环状体（示意图）环状体（示意图） 间日疟：大滋养体（示意图）间日疟：大滋养体（示意图） 间日疟间日

3、疟v滋养体（示意图）滋养体（示意图） 间日疟原虫裂殖前期（示意图）间日疟原虫裂殖前期（示意图） 间日疟原虫裂殖体（示意图）间日疟原虫裂殖体（示意图） 有裂殖子有裂殖子8个，呈花瓣状排列，色素聚于虫个，呈花瓣状排列，色素聚于虫 体中部体中部 有核有核12个，虫体小于正常红细胞。所寄生个，虫体小于正常红细胞。所寄生 的红细胞稍胀大，有伞状边缘，薛氏粗大的红细胞稍胀大，有伞状边缘，薛氏粗大 裂裂 殖殖 体体() 间日疟裂埴体间日疟裂埴体 图注：左图注：左.间日疟裂殖体；右间日疟裂殖体；右.间日疟配子体间日疟配子体 间日疟大配子体（示意图间日疟大配子体（示意图） 大配子体大配子体 核核1个，致密，虫体

4、小于正常红细胞。色素颗粒状，散于虫体内。所寄生红细胞稍胀个，致密，虫体小于正常红细胞。色素颗粒状，散于虫体内。所寄生红细胞稍胀 大，有粗大的薛氏点大，有粗大的薛氏点 间日疟雄配子体间日疟雌配子体间日疟雄配子体间日疟雌配子体 . .恶性疟原虫的形态恶性疟原虫的形态 . . .环状体（环状体（R R） 1.2.21.2.2滋养体（滋养体（T T） . . .裂埴体（裂埴体（S S） 1.2.41.2.4配子体（配子体（G G） 恶性疟原虫小滋养体（示意图）恶性疟原虫小滋养体（示意图） 虫体大小已超过红细胞直径的确虫体大小已超过红细胞直径的确1/2，环较厚，空泡大，但无阿米巴样伪足。被寄生，环较厚，

5、空泡大，但无阿米巴样伪足。被寄生 红细胞形状正常，不胀大，未见茂氏点红细胞形状正常，不胀大，未见茂氏点 恶性疟原虫大滋养体（示意图）恶性疟原虫大滋养体（示意图） 恶性疟原虫裂殖前期（示意图）恶性疟原虫裂殖前期（示意图） 恶性疟原虫裂殖体（示意图）恶性疟原虫裂殖体（示意图） 恶性疟原虫小配子体（示意图恶性疟原虫小配子体（示意图） 恶性疟原虫大配子体（示意图）恶性疟原虫大配子体（示意图） 2 2、厚血膜上疟原虫形态特征、厚血膜上疟原虫形态特征 . .环状体（环状体（R R） . . .间日疟环状体间日疟环状体 . . .恶性疟环状体恶性疟环状体 . .滋养体（滋养体（T T） . . .间日疟滋养

6、体间日疟滋养体 . . .恶性疟滋养恶性疟滋养 . .早期裂埴体（早早期裂埴体（早S S） . . .间日疟裂埴体间日疟裂埴体 . . .恶性疟裂埴体恶性疟裂埴体 . .晚期裂埴体晚期裂埴体 . . .间日疟晚期裂埴体间日疟晚期裂埴体 . . .恶性疟恶性疟晚期裂埴体晚期裂埴体 . .配子体（配子体（G G） 2.5.12.5.1间日疟配子体间日疟配子体 . . . .完整的配子体完整的配子体 . . . .浆裂断收缩，核与色素如常浆裂断收缩，核与色素如常 2.5.1.32.5.1.3浆已腐蚀消失，仅有核与色素浆已腐蚀消失，仅有核与色素 2.5.1.42.5.1.4核消失，仅有浆与色素核消失，

7、仅有浆与色素 2.5.l.52.5.l.5核浆均已消失。仅有色素颗粒，以其沿边分布核浆均已消失。仅有色素颗粒，以其沿边分布 的特点即可确认的特点即可确认 . . .恶性疟配子体恶性疟配子体 . . . .正常配子体正常配子体 . . . .圆形配子体圆形配子体 . . . .梭形（枪形）配子体梭形（枪形）配子体 . . . .腐蚀的配子体腐蚀的配子体 图注：本片上、下、左、右各有一个疟原虫。上、右、图注：本片上、下、左、右各有一个疟原虫。上、右、 左均为大小不同的环状体；下为大滋养体，虫体已断左均为大小不同的环状体；下为大滋养体，虫体已断 裂成数块，但可见有薛氏点的红细胞残骸裂成数块，但可见有

8、薛氏点的红细胞残骸 间日疟间日疟 间日疟环状体间日疟环状体 本片中部有两个白细胞，在其左上方、左下方各有一个大滋养体；其右上方有两个大滋本片中部有两个白细胞，在其左上方、左下方各有一个大滋养体；其右上方有两个大滋 养体，胞浆皆已绉缩成数块，但皆有红细胞残骸可见养体，胞浆皆已绉缩成数块，但皆有红细胞残骸可见间日疟间日疟 虫体位于本片中部，胞浆皱缩为多块，色素聚集于虫体右上方；本虫上方为一个大滋养体虫体位于本片中部，胞浆皱缩为多块，色素聚集于虫体右上方；本虫上方为一个大滋养体 滋养体滋养体 裂殖体裂殖体 间日疟间日疟 7个环状体散在于个环状体散在于5个白细胞之间，每个虫体可见一个红色的核和蓝色断裂

9、的或皱缩的原个白细胞之间，每个虫体可见一个红色的核和蓝色断裂的或皱缩的原 浆浆 恶性疟恶性疟 四、疟原虫与其它物体的鉴别四、疟原虫与其它物体的鉴别 1 1、疑似疟色素、疑似疟色素 2 2、疑似疟原虫核、疑似疟原虫核 3 3、疑似原虫胞浆、疑似原虫胞浆 4 4、白细胞的破碎残骸、白细胞的破碎残骸 5 5、幼红细胞残骸、幼红细胞残骸 五、镜检工作所需注意的事项五、镜检工作所需注意的事项 1 1、在镜检中显微镜的使用：油镜、凹镜、视野需按一宝顺序逐、在镜检中显微镜的使用：油镜、凹镜、视野需按一宝顺序逐 个检查。个检查。 2 2、疟原虫镜检工作中，凡是发热病人。疟疾、疑似疟疾、及不、疟原虫镜检工作中，

10、凡是发热病人。疟疾、疑似疟疾、及不 明原因的发热病人均需进行疟原虫镜检。明原因的发热病人均需进行疟原虫镜检。 3 3、做好镜检登记：凡是镜检疟原虫的均需如实登记，阴、阳性、做好镜检登记：凡是镜检疟原虫的均需如实登记，阴、阳性 片保存待考核。片保存待考核。 4 4、每一个月上报一次镜检数。包括镜检人数、阳性、阴性。、每一个月上报一次镜检数。包括镜检人数、阳性、阴性。 5 5、如发现恶性疟以嘴快的通信方法，在、如发现恶性疟以嘴快的通信方法，在2424小时内报县、市、省小时内报县、市、省 疾病预防控制机构，阳性血片留待上级复核。疾病预防控制机构，阳性血片留待上级复核。 六、血片制作与染色六、血片制作

11、与染色 1 1、血片的清洁、血片的清洁 新的载皮片必须洗洁净后才可直接浸于新的载皮片必须洗洁净后才可直接浸于 9 5%9 5%的酒精的酒精 中，然后一一取出，用软而洁净并没有棉花毛的细布中，然后一一取出，用软而洁净并没有棉花毛的细布 擦干，擦亮，妥善放置，勿使灰尘沾污。擦干，擦亮，妥善放置，勿使灰尘沾污。 用过的载玻片可用用过的载玻片可用5 5之煮沸肥皂水洗涤，将玻片一之煮沸肥皂水洗涤，将玻片一 张一张的放入其中待肥皂水稍冷后，用毛刷或纱布细张一张的放入其中待肥皂水稍冷后，用毛刷或纱布细 心拭擦。再用清水漂洗干净并以纱布擦干，然后浸于心拭擦。再用清水漂洗干净并以纱布擦干，然后浸于 9595酒精

12、内脱脂，照上述法处理，酒精内脱脂，照上述法处理， 亦可用洗涤液清洗，在整个擦洗过程中，应注意避免亦可用洗涤液清洗，在整个擦洗过程中，应注意避免 玻片互相磨擦，而使玻片面磨毛，以致不堪使用。玻片互相磨擦，而使玻片面磨毛，以致不堪使用。 采血的部位和方法采血的部位和方法 l以耳垂采血为主。以耳垂采血为主。 l以以75%75%酒精棉球消毒耳垂待酒精干后，左酒精棉球消毒耳垂待酒精干后，左 手拇指和食指紧捏耳垂，右手持一次性手拇指和食指紧捏耳垂，右手持一次性 采血针迅速刺入，适可而止第一滴血不采血针迅速刺入，适可而止第一滴血不 必擦掉，即可应用。（若由指头取血则必擦掉，即可应用。（若由指头取血则 受检者

13、痛楚较大，且易引起创口感染，受检者痛楚较大，且易引起创口感染， 一投不宜采用。）一投不宜采用。） 采血的血量采血的血量 l厚血膜血量约为厚血膜血量约为5 5立方毫米左右立方毫米左右( (即一小即一小 滴滴) )，涂成边缘光滑之园形，直径约，涂成边缘光滑之园形，直径约 0.80.81.01.0厘米左右。厘米左右。 l薄血膜血量只需薄血膜血量只需0.5-1.00.5-1.0立方毫米左右立方毫米左右, , 过多则血膜过厚过大。薄膜宜涂成舌状过多则血膜过厚过大。薄膜宜涂成舌状 长约长约2.52.5厘米，宽约厘米，宽约2 2厘米厘米 采血的时间采血的时间 l进行疟疾普查时，在同一时间内常常需进行疟疾普查

14、时，在同一时间内常常需 要检查很多居民，故一般无法考虑取血要检查很多居民，故一般无法考虑取血 的时间。的时间。 l但在诊断临床的疟疾患者时，就应当考但在诊断临床的疟疾患者时，就应当考 虑在什么时候取血较为适宜，尤在确定虑在什么时候取血较为适宜，尤在确定 不下虫种和查不到疟原虫的疑似疟疾患不下虫种和查不到疟原虫的疑似疟疾患 者的情况下。者的情况下。 采血的时间采血的时间-间日疟间日疟 l间日疟原虫及三日疟原虫，在患者刚发冷发热间日疟原虫及三日疟原虫，在患者刚发冷发热 以后，大部是在环状滋养体期，故这一时期区以后，大部是在环状滋养体期，故这一时期区 别疟原虫种类是不容易的。虽在别疟原虫种类是不容易

15、的。虽在般情况下，般情况下， 随便什么时间检查感染者的末稍血液随便什么时间检查感染者的末稍血液, ,多少能多少能 查到各个时期的原虫，但查到各个时期的原虫，但适当的取血时间适当的取血时间，一，一 般是在患者般是在患者发作数小时至十余小时发作数小时至十余小时，即已滋养，即已滋养 发育至具有易于鉴别的晚期滋养体期发育至具有易于鉴别的晚期滋养体期 采血的时间采血的时间-恶性疟恶性疟 l恶性疟原虫，从理论上说，因为恶性原虫的裂体生殖恶性疟原虫，从理论上说，因为恶性原虫的裂体生殖 是在内脏的毛细血管内进行的，所以在发作之前，患是在内脏的毛细血管内进行的，所以在发作之前，患 者的末稍血液中不易查到。但实际

16、情况不尽如此，一者的末稍血液中不易查到。但实际情况不尽如此，一 般在受染者的末稍血液中，随时能见到少数恶性疟原般在受染者的末稍血液中，随时能见到少数恶性疟原 虫的环状滋养体，虫的环状滋养体， l虽然如此，较理想的取血时间，是在发作后的虽然如此，较理想的取血时间，是在发作后的2020小时小时 左右，因为这个时候，环状滋养体虽已滋长发育至最左右，因为这个时候，环状滋养体虽已滋长发育至最 高峰，但尚未回至内脏的毛细血管中去进行裂体生殖。高峰，但尚未回至内脏的毛细血管中去进行裂体生殖。 l环状滋养体的数量与构造，有助于疟原虫种类的鉴别。环状滋养体的数量与构造，有助于疟原虫种类的鉴别。 恶性疟原虫的配子

17、体很易识别，但在初发时，一般需恶性疟原虫的配子体很易识别，但在初发时，一般需 要在发作八日后才能在末稍血液中出现，应当注意要在发作八日后才能在末稍血液中出现，应当注意 厚、薄血膜的形状和位置厚、薄血膜的形状和位置 l薄血膜宽薄血膜宽2cm2cm，长，长2.5cm2.5cm l厚血膜直径厚血膜直径0.8-1cm0.8-1cm l假定将玻片划成三格等分，则厚血膜应位于中格靠右侧线处，薄假定将玻片划成三格等分，则厚血膜应位于中格靠右侧线处，薄 血膜则从玻片中央起至左格中部止，右端空格供记录姓名，编号血膜则从玻片中央起至左格中部止，右端空格供记录姓名，编号 或贴标签之用或贴标签之用( (如图如图) )

18、 血片的制作血片的制作1 1 l玻片的执持方法：玻片的执持方法： 无论在拭擦玻片，制作血片或染无论在拭擦玻片，制作血片或染 色血片时，手指仅可夹持玻片两侧色血片时，手指仅可夹持玻片两侧 缘，切匆触及玻片之上下面以免手缘，切匆触及玻片之上下面以免手 上油脂污及玻片面，使薄血涂布不上油脂污及玻片面，使薄血涂布不 匀，厚血膜易于脱落匀，厚血膜易于脱落 血片的制作血片的制作- -厚血膜涂制厚血膜涂制 l取洁净的载玻片和推片各一张载玻片放桌上，取洁净的载玻片和推片各一张载玻片放桌上， 推片以右手拇指和食指持其二侧，以左端下角推片以右手拇指和食指持其二侧，以左端下角 从受检者之耳垂沾取血滴，在载玻片之适当

19、位从受检者之耳垂沾取血滴，在载玻片之适当位 置，置， 自内向外回转扩大，涂成厚血膜，使厚自内向外回转扩大，涂成厚血膜，使厚 薄均匀。涂毕后用干棉球拭掉推片上和耳垂上薄均匀。涂毕后用干棉球拭掉推片上和耳垂上 之残留小量血液。之残留小量血液。 血片的制作血片的制作-薄血膜涂制薄血膜涂制 l以推片左端中央沾取薄血膜所需之血，与载玻以推片左端中央沾取薄血膜所需之血，与载玻 片约成片约成2525一一4545度角，使血滴向二旁扩展至一定度角，使血滴向二旁扩展至一定 宽度时，立即向左边轻轻迅速推出即成薄血膜。宽度时，立即向左边轻轻迅速推出即成薄血膜。 推时速度之快慢和角度均影响血膜的厚薄程度，推时速度之快慢

20、和角度均影响血膜的厚薄程度， 最理想的薄血膜是一层血细胞，血细胞的分布最理想的薄血膜是一层血细胞，血细胞的分布 排列比较均匀。无裂缝，无空隙。排列比较均匀。无裂缝，无空隙。 血片的编号血片的编号 l血片编号可根据实际操作进行。血片编号可根据实际操作进行。 l号码必须不易脱落，建议用铅笔在薄血膜上编号码必须不易脱落，建议用铅笔在薄血膜上编 号。号。 血片的固定和脱膜血片的固定和脱膜 l薄血膜用甲醇固定薄血膜用甲醇固定 l现场检查的血片厚血膜可以不脱血膜，直接染现场检查的血片厚血膜可以不脱血膜，直接染 色。色。 l保存时间较长的标本片厚血膜要脱血膜后保存。保存时间较长的标本片厚血膜要脱血膜后保存。

21、 血片制作的注意事项血片制作的注意事项 l平放、平放、 有盖、有盖、 防止灰、尘和植物孢子污染。防止灰、尘和植物孢子污染。 l防止苍蝇、蟑螂等昆虫吮吸防止苍蝇、蟑螂等昆虫吮吸 l自然干燥，不能太阳晒和火烤自然干燥，不能太阳晒和火烤 制作血片的注意事项制作血片的注意事项 l制成的血片切勿用火烤、日晒或放在新购置之标本盒制成的血片切勿用火烤、日晒或放在新购置之标本盒 内，以免血红蛋白凝固无法脱除。血片放置待干时不内，以免血红蛋白凝固无法脱除。血片放置待干时不 可倾斜，否则厚血膜中血细可倾斜，否则厚血膜中血细 胞沉在一边，可使厚薄胞沉在一边，可使厚薄 不匀。此外还要防止苍蝇吮吸血膜和灰尘污染血片。不匀。此外还要防止苍蝇吮吸血膜和灰尘污染血片。 l 制成的血膜须完全干燥后制成的血膜须完全干燥后( (自然情况下约自然情况下约4