BPG层析柱标准装柱流程规范

1、操作标准口得:为了使BPG3 0 0层析柱装柱过程可重复，并能够得到较好得柱效，故建立此操 作规范。范围:配合AKTA process系统进行有效得蛋白质纯化操作。责任人:层析工序操作人员标准操作程序：1基本术语概念填料因子(Pack i n g F a c tor, PF):指在在装柱过程中，用低流速(如6 0c m/h)对填料进行沉降压缩得到得调料高度与最后装柱完成时填料高度(柱高)得 比值，G E H. 30010 0 0 columnsUse r Manu a 1 2&93 6 Z 89 Edit ion AA ;线性流速(11 near flow rat e ):单位时间内液体流经得

2、直线距离，常用cm / h 表示；体积流速(volume flow rat e ):单位时间内液体流经得空间容积，常用ml/m in表示；换算：2准备工作2. 1检查层析柱得完整性，所带配件，就是否水平(用水平仪矫正)，就是否清洁(如有污染应进行清洗)、2、2确定所用填料及其特性、浓度等以DEAE S e p h aro s e Fast Flow填料为例，其填料因子(PF)为1. 1 5 ,新填 料u r ry)浓度为75%(保存于2 0 %乙醇中)，耐压3b a r。2。3确定放大后得工艺参数以XX生化制药股份有限公司得放大工艺为例，中试工艺参数：柱高h= 10 c m：体积流速vl=3m

3、 1 /min;柱内径d二1、6 cm、即，线性流速 v 2 =vl/s 柱=3/（3、14x0o 82） cm/mi n =1. 5 cm / min;样品与填料接触时间t=h / v2= 1 0 /I 5min=6。67mi n ;在工艺得线性放大中h、v 2与t均不变，则可保证样品出峰得位置（洗脱时间）与形状不 变、使用BPG 3 0 0层析柱进行放大得工艺参数：装柱体积 V End_ T imer,选择 A cc Volumn, Timeout 设上样量为 70mL(l %柱体积);P ump F low,设定上样 流速60 L / h,点击e xec u te得同时将柱顶端四路二通阀

4、调至管路与柱头相连， 完成上样；5o 3洗脱5.3o 1将柱顶端四路二通阀调至管路与大气相连状态，在system control窗口 点击manualf v a 1 v esIn 1 etA,选择 i nletAl,inser t ;In 1 etB,选择 c 1 osed, i n s ert;C o lumn,选择 downf 1 owjns e rt;P u m p -F 1 ow,设定高流速(150L / h) 点击exec ute运行,排气泡，同时将管路充满0。4M NaC 1溶液，调流速至2 lL/h(30 c m/h);Column packing检测装柱效杲一般用0.5% (3

5、0um介质)或 1% (90um介质)柱体积的1%丙酮测柱效和 峰形 The linear flow rate should be 30 cm/h for 34 pirn and 50 pm media and 20 cm/h for 90 um media5 .3、2 待流速稳定后，在 s ystem control 窗 口点击 m a nual-*- v alv e s I nject i on Mark, i n s e门,点击exe c ute得同时将柱顶端四路.通阀调至管路与 柱头相连，开始洗脱，在一个柱体积左右，电导检测下将产生目得峰。5.4测柱效在Evalu a t ion窗口中

6、，选择实验保存得结果，在结果图中点击鼠标右键，选择 Pro p cities,点击 Clear,并选中 Cond_102,点击 OK。回到 Eva 1 ua t ion 窗口，选 择积分按钮,在弹出窗口中，选择Cond_ 1 0 2,pe a k wi n d ow中调整积分得范 围，并在 R e j e ct Peaks 中，填 Peak must be one of 11 a r g e st;确定后,在积分结果窗口，点击右键，选择P roper t ies,在peak table选项中，勾选Pl a te He i ght(HETP)与A s ymmetryo确定后即可计算得到计算理论塔板高度HE TP与对称因子As。1 Wh e n calc u la t ing the amoun t of m e dia t o be pa c ke d us e the p r e