Her2基因检测与癌症PPT参考幻灯片

1、 李丽丽李丽丽病理应用顾问病理应用顾问上海罗氏制药有限公司上海罗氏制药有限公司2设备、试剂技术支持罗氏诊断罗氏诊断医学部医学部销售部销售部市场部市场部病理科病理科学术支持销售产品市场推广李丽丽Biomarker teamRoche制药制药自我介绍自我介绍一、一、HER2HER2检测的概述检测的概述二、二、HER2HER2检测前的最佳实验检测前的最佳实验组织处理及固定组织处理及固定三、三、HER2HER2检测中的最佳实践检测中的最佳实践方法及流程方法及流程四、四、HER2HER2检测后的最佳实践检测后的最佳实践结果判读结果判读五、读片五、读片六、六、HER2HER2检测的质控及质保检测的质控及质

2、保HER2检测系列内容检测系列内容3一、一、HER2HER2检测的概述检测的概述二、二、HER2HER2检测前的最佳实验检测前的最佳实验组织处理及固定组织处理及固定三、三、HER2HER2检测中的最佳实践检测中的最佳实践方法及流程方法及流程四、四、HER2HER2检测后的最佳实践检测后的最佳实践结果判读结果判读五、读片五、读片六、六、HER2HER2检测的质控及质保检测的质控及质保HER2检测系列内容检测系列内容内容提要内容提要什么是HER2及其作用HER2检测的意义-乳腺癌&胃癌HER2检测的方法相关指南及检测现状5什么是什么是HER2？6HER2HER2基因基因人类人类表皮生长因子受体表皮

3、生长因子受体-2-2基因基因 Human Epidermalgrowth Factor Receptor-2(HER2) Gene定位于染色体定位于染色体17q2117q21编码跨膜受体样蛋白（编码跨膜受体样蛋白（HER2HER2蛋白）蛋白）, ,具有酪氨酸激酶活性具有酪氨酸激酶活性HER2HER2蛋白蛋白 分子量分子量185 kDa的糖蛋白的糖蛋白: 细胞外区（配体结合区）细胞外区（配体结合区） 跨膜区（传导信号）跨膜区（传导信号） 细胞内区（激酶活性）细胞内区（激酶活性）HER2细胞内细胞外细胞膜HER27 HER2状态状态HER2 基因基因HER2信使信使RNAHER2蛋白蛋白HER2

4、基因基因HER2信使信使RNAHER2蛋白蛋白HER2正常表达正常表达 细胞细胞(HER2) (2万个受体）万个受体）HER2过表达的细胞过表达的细胞(HER2+)(100200万个受体）万个受体）8HER2阳性的定义阳性的定义l 蛋白水平蛋白水平( (过表达过表达): ): 细胞表面细胞表面HER2HER2蛋白受体表达大量增加蛋白受体表达大量增加l 基因水平基因水平( (扩增扩增): ): HER2HER2编码基因于细胞核内拷贝增加编码基因于细胞核内拷贝增加IHCFISH910IHC0IHC3+IHC1+IHC2+正常HER2基因于DNA复制时若发生分子转换可能会转变成癌基因 正常细胞：无基

5、因扩增 HER2阳性细胞：基因扩增FISHFISH11HER家族家族HER二聚体触发信号传导二聚体触发信号传导Cell membrane基因转录基因转录提高细胞运动提高细胞运动抑制凋亡抑制凋亡细胞生长和增殖细胞生长和增殖转移转移化疗耐药化疗耐药肿瘤生长肿瘤生长EGFEGFREGFRTGF TGF EGFRHER2HER2HER3 NRGNRGHER2HER4HER2 HER2信号级联放大信号级联放大核膜核膜IntracellularYarden Y and Sliwkowsk MX. Nat Rev Mol Cell Biol 2001;2:127137.12HER2过表达的结果过表达的结果正

6、常正常HER2 HER2 表达表达HER2 HER2 基因扩增导致基因扩增导致HER2HER2过表达过表达HER2 HER2 过表达导致肿瘤增殖过表达导致肿瘤增殖u 促进细胞的生长和增殖促进细胞的生长和增殖-肿瘤发生肿瘤发生u 抑制细胞的凋亡抑制细胞的凋亡u 诱导血管新生诱导血管新生u 提高细胞运动能力提高细胞运动能力,增强肿瘤的浸润转移作用增强肿瘤的浸润转移作用(1) Moasser MM.Oncogene,2007.26(46):6577(2) Freudenbery JA, Wang Q, Katsumata, et al. Exp Mol Pathol.2009.87(1):11314

7、HER2检测的临床意义检测的临床意义15HER2对乳腺癌的临床意义对乳腺癌的临床意义16肿瘤流行病调查肿瘤流行病调查 中国中国Incidence The number of new cases of a specific disease (per year) Mortality The number of deaths of a specific disease (per year)早期乳腺癌患者早期乳腺癌患者*HER2阴性阴性 (n=771)HER2阳性阳性 (n=189)HER2过表达对早期乳腺癌预后不利过表达对早期乳腺癌预后不利存活率存活率 (%)01260961201009080706

8、050402436487284108时间时间等等级检验级检验 p=0.0004Wilcoxon检验检验 p=0.0009*未未经选择经选择的的I, II和和III期乳腺癌患者期乳腺癌患者时间时间 (月月)Pauletti G et al. J Clin Oncol. 2000;18:36513664. Reprinted with permission. 2008 American Society of Clinical Oncology. All rights reserved.17HER2过表达会降低乳腺癌转移过表达会降低乳腺癌转移/复发患者的存活率复发患者的存活率Dawood S et

9、al. J Clin Oncol 2010 28: 9298.Reprinted with permission. 2008 American Society of Clinical Oncology. All rights reserved.0.80.60.40.20.001224364860整体存活率整体存活率确确诊诊后后时间时间 (月月)HER2阴性阴性 (n=1,782)HER2阳性阳性 (n=118)1.018HER2阳性与含蒽环类药物的化疗疗效相关阳性与含蒽环类药物的化疗疗效相关FISH:乳腺癌HER2阳性 (n=160)FISH:乳腺癌HER2阴性(n=460)CEFCMF整体存

10、活率(%)p=0.681008060402000510p=0.061008060402000510时间（年）时间(年)CEF, 环磷酰胺、表阿霉素和氟尿嘧啶; CMF, 环磷酰胺、甲氨蝶呤和氟尿嘧啶 CEFCMFPritchard KI et al. N Engl J Med 2006; 354:21032107.整体存活率(%)19 HER2过表达和（或）扩增与紫杉醇临床获益有关过表达和（或）扩增与紫杉醇临床获益有关乳腺癌HER2-阳性乳腺癌HER2-阴性紫杉醇无紫杉醇 无病存活率1008060402000510 无病存活率1.00.80.60.40.200510时间 (年)时间 (年)紫杉

11、醇无紫杉醇Hayes DF et al. ASCO Annual Meeting 2006; Abstract 510.HER2 / 紫杉醇相关性（紫杉醇相关性（ p= 0.0093）20 曲妥珠单抗有效改善曲妥珠单抗有效改善HER2阳性转移性乳腺癌患者预后阳性转移性乳腺癌患者预后10080604020001224364860确诊后时间确诊后时间 (月月)存活率存活率 (%)Dawood S et al. J Clin Oncol 2010;28:9298.Reprinted with permission. 2008 American Society of Clinical Oncology

12、. All rights reserved.HER2阳性状态与患者存活率无关HER2阳性阳性, 曲妥珠单抗曲妥珠单抗 (n=191)HER2阴性阴性 (n=1782)HER2阳性阳性, 无无曲妥珠单抗曲妥珠单抗 (n=118)一项回顾性研究数据显示，与HER2阴性乳腺癌相比，HER2阳性乳腺癌患者接受曲妥珠单抗治疗后的死亡率下降44% 多变量分析后危险比（HR）为0.56; 95% CI 0.45 0.69; p0.000121 HER2状态状态对乳腺癌的临床重要性对乳腺癌的临床重要性 乳腺癌的HER2阳性率约为1520% 对于乳腺癌患者，HER2状态与无病生存期无病生存期（DFS）及总体存活

13、总体存活（OS）密切相关，是患者预后的重要预测因子预测因子 HER2状态也可预测乳腺癌的药物治疗效果，包括 对曲妥珠单抗治疗的反应 对紫杉醇及蒽环类药物治疗的反应 对三苯氧胺的耐药性Carlson RW, et al. JNCCN 2006:4(Suppl.3):S1S22. HER2状态评估对于确定患者是否接受抗状态评估对于确定患者是否接受抗HER2靶向治疗至关重要靶向治疗至关重要22HER2对胃癌的临床意义对胃癌的临床意义23胃癌胃癌 世界第二致死癌症，中国为高发区 早期诊断，较困难预后差，绝大多数患者直到晚期才出现相应症状 约16%转移性胃癌或胃-食管肿瘤患者为HER2阳性(ToGA实验

14、)24HER2对对胃癌胃癌患者患者预后的影响预后的影响Song Y et al. Chin J Cancer 2010;29:7681.中国研究中国研究：晚期胃癌患者的生存率晚期胃癌患者的生存率平均生存率平均生存率 (月月)p有HER2过表达5.90.021没有 HER2 过表达12.6平均生存率平均生存率(月月)p有 HER2 扩增5.50.028没有 HER2 扩增12.6有或没有有或没有HER2过表达过表达(n=83)有或没有有或没有HER2扩增扩增 (n=83)100806040200061218总体生存率总体生存率 (%)*时间时间 (月月)100806040200061218总体生

15、存率总体生存率 (%)*没有没有HER2 过表达过表达有有 HER2 过表达过表达没有没有 HER2扩增扩增有有HER2扩增扩增时间时间 (月月)25 应用应用HER2靶向治疗药物进行化疗能突破进展型胃癌靶向治疗药物进行化疗能突破进展型胃癌12个月平均总体存活时间个月平均总体存活时间EOX6XP7ECX6ECF6DCF4EOF6IF5FP4FAMTX2BSC1SP3BSC, 最佳支持治疗; F, 5氟尿嘧啶; A, 阿霉素; MTX, 甲氨蝶呤; S, S-1; C/P,顺铂; I, 喜树碱; X, 顺铂; E, 表柔比星; O, 奥沙利铂; D, 多西紫杉醇FP/XP + T8FP/XP +

16、 T(探索性探索性)81. Murad A.M, et al. Cancer 1993;72:3741; 2. Vanhoefer U, et al. J Clin Oncol 2000;18:26482657; 3. Ajani JA, et al. ASCO Gastrointestinal Cancers Symposium 2009; Abstract 8; 4. Van Cutsem E, et al. J Clin Oncol 2006;24:49914997; 5. Dank M, et al. Ann Oncol 2008;19:14501457; 6. Cunningham

17、D, et al. NEJM 2008;358:3646; 7. Kang Y.K, et al. Ann Oncol 2009;20:666673; 8. Bang YJ, et al. Lancet 2010;376:687697.061218时间时间 (月月)FP/XP + T : IHC 3+ 或或FISH阳性的患者阳性的患者FP/XP + T (探索性探索性): IHC2+/FISH阳性或阳性或IHC3+的的患者患者26 ToGA研究提供研究提供的的HER2阳性率的数据阳性率的数据目标目标人群人群(IHC 2+/FISH+ 或或 IHC 3+)探索性分析探索性分析ToGA 人群人群符

18、合符合 ToGA 资格资格(IHC 3+ 和和/或或 FISH+)78%22%78%16%不符合不符合 ToGA 资格资格不符合不符合 ToGA 资格资格IHC 0/FISH+ 或或IHC 1+/FISH+6%27 主要研究终点主要研究终点: OS（总生存）（总生存）IHC3+ or FISH+IHC3+ or FISH+28 29主要研究终点主要研究终点: OS（总生存）（总生存）IHC3+ or IHC2+/FISH+IHC3+ or IHC2+/FISH+ HER2状态状态对对胃癌的临床意义胃癌的临床意义 所有的胃或胃食管结合部癌患者都应在初次诊断时检测肿瘤的HER2状态。 HER2在胃

19、癌中过表达预示更差的疾病结局以及进展性更强的疾病类型 准确的胃癌HER2表达和基因扩增检测结果是进展期胃癌HER2靶向治疗患者筛选和疗效预测的前提 2010年，欧洲和美国先后批准化疗联合使用曲妥珠单抗治疗HER2阳性胃及胃食管交界癌患者Kelley JR and Duggan JM. J Clin Epidemiol 2003;56:19.Bang YJ, et al. Lancet 2010;376:687697.Bang YJ, et al. J Clin Oncol 2008;26:Abstract 4526.Gravalos C and Jimeno A. Ann Oncol 2008

20、;19:15231529.30uHER2检测对乳腺癌检测对乳腺癌及及胃癌患者得到正确胃癌患者得到正确诊疗诊疗有很重要的意义有很重要的意义HER2检测的意义检测的意义31HER2常用常用检测检测方法方法32 HER2常用常用检测检测方法方法 免疫组织化学免疫组织化学 (IHC): 应用抗体检测蛋白过表达是乳腺及胃组织检测HER2状态的首要方式1 原位杂交原位杂交 技术技术(ISH): 利用核酸探针检测HER2基因扩增，可用于复检经IHC检测难以确定结果的病例及疑难病例11. Wolff AC et al. J Clin Oncol 2007;25:118145.IHC：显示：显示组织组织细胞细胞

21、蛋白质蛋白质表达状态表达状态ISH：显示组织细胞基因的扩增状态：显示组织细胞基因的扩增状态33实验室实验室HER2检测检测方法方法总结总结IHC通过抗体检测HER2蛋白表达FISH通过荧光标记的DNA探针检测HER2基因扩增SISH通过DNP标记之DNA探针并通过后续显色反应 (银染)来检测HER2基因扩增通过地高辛标记之DNA探针并通过后续显色反应 (DAB信号)来检测HER2基因扩增CISH通过DNP标记之DNA和染色体着丝粒探针并通过后续显色反应(HER2银染及17号染色体碱性磷酸酶红染)检测HER2Dual SISH34HER2检测方法之优缺点检测方法之优缺点检测方法检测方法优点优点缺

22、点缺点IHC大多病理实验室均采用，相对较易，较快，较便大多病理实验室均采用，相对较易，较快，较便宜，可自动化操作，免疫组化切片保存较久并可宜，可自动化操作，免疫组化切片保存较久并可反复检评反复检评可同时观察细胞形态可同时观察细胞形态检测结果易受检测步骤影响产生偏倚检测结果易受检测步骤影响产生偏倚检测结果较主观，半定量检测结果较主观，半定量FISH检测结果相对免疫组化更加定量化检测结果相对免疫组化更加定量化稳定性好稳定性好可自动化操作可自动化操作检测价格昂贵，信号强度随时间衰减检测价格昂贵，信号强度随时间衰减较难鉴定乳腺癌侵较难鉴定乳腺癌侵微小浸润灶微小浸润灶不能同时观察细胞形态不能同时观察细胞

23、形态病理医生及技术员接受相关技术操作及检测病理医生及技术员接受相关技术操作及检测结果分析结果分析的的训练训练较少较少CISH与原位杂交相比较少受实验前分析及处理步骤影与原位杂交相比较少受实验前分析及处理步骤影响响操作较快，普通光镜观察即可操作较快，普通光镜观察即可染色长期稳定染色长期稳定可同时观察细胞形态可同时观察细胞形态与荧光原位杂交相比技术较新，操作欠相关与荧光原位杂交相比技术较新，操作欠相关经验经验缺乏经验之人员较难分析检测结果缺乏经验之人员较难分析检测结果检测检测HER2HER2及及CEP17CEP17拷贝数需制备不同切片拷贝数需制备不同切片SISH全自动显色原位杂交全自动显色原位杂交

24、( (自动图像分析自动图像分析) )其他优点与显色原其他优点与显色原位位杂交相同杂交相同可检测可检测HER2HER2过表达之微小肿瘤灶过表达之微小肿瘤灶( (胃癌胃癌) )可观察可观察HER2HER2异质性染色结果异质性染色结果 ( (胃癌）胃癌）检测检测HER2HER2基因及基因及CEP17CEP17拷贝数需制备不同切拷贝数需制备不同切片片DSISH全自动显色原位杂交全自动显色原位杂交( (自动图像分析自动图像分析) )HER2HER2及及CEP17CEP17可可于于亮视野显微镜观察亮视野显微镜观察其他优点与显色原位杂交其他优点与显色原位杂交/ /银染原位杂交相同银染原位杂交相同缺乏经验之人

25、员较难分析检测结果缺乏经验之人员较难分析检测结果多体性时较难分析多体性时较难分析35国内外相关指南国内外相关指南 国外指南：ASCO/CAP乳腺癌HER2检测指南（2007）NCCN 乳腺癌临床实践指南（2012）NCCN胃癌临床实践指南（2011）欧洲胃癌HER2检测指南（2011） 国内指南：乳腺癌HER2检测指南（2009版）胃癌HER2检测指南(2011)3636NCCN乳腺癌及胃癌临床实践指南乳腺癌及胃癌临床实践指南37 乳腺癌乳腺癌HER2检测指南（检测指南（2009版）版）38 胃癌胃癌HER2检测指南（检测指南（2011版）版）39 Bilous M et al. Mod Pa

26、thol 2003;16:173182.Wolff AC, et al. J Clin Oncol 2007;25:118145.Albarello L, et al. Adv Anat Pathol 2011;18(1):535940我国我国HER2检测目前仍面临哪些问题？检测目前仍面临哪些问题？ 41* IHC3+或IHC2+/FISH阳性05101520253035HER2阳性率阳性率 (%)1234567891011121314151617181920212223242526272829303132333435363738394041424344454647484950515253545556575859606162636465666768697071727374757677787980avmaxmin检测中心检测中心 (匿名匿名)HER2阳性率阳性率: 15%范围范围: 9%35%英国各检测中心英国各检测中心的的HER2检测阳性率检测阳性率*不尽相同不尽相同