免疫组化染色中防脱片的技术改进

1、免疫组化染色中防脱片的技术改进沈阳医学院journalofshenyangmedicalcohege第9卷第2期2007年6月免疫组化染色中防脱片的技术改进吴瑶,吴鹏(沈阳医学院基础医学院病理解剖学教研室,辽宁沈阳110034)关键词免疫组织化学;抗原修复;防脱片中图分类号r446.6文献标识码b文章编号10082344(2007)020113一o1应用抗原修复技术暴露被封闭的组织抗原决定簇,是免疫组织化学技术中的关键步骤.微波抗原修复技术是一种有效的抗原修复方法1j,目前该技术已广泛应用于病理切片的免疫组织化学染色操作中.它利用高温效应和微波的直接作用,打开蛋白问的交联键,暴露组织固定时被封

2、闭的抗原决定簇.但是在微波加热处理组织切片的过程中,常发生脱片现象而导致实验失败.为了克服这个缺点,我们经反复实践摸索,使用简单的材料设计了一种可行的方法,较好地防止了脱片现象的发生.1材料与方法1.1材料手术取得的肺癌组织标本15例,来自于沈阳医学院奉天医院.显微镜擦镜纸,微波炉(中国海尔,720w),多聚赖氨酸(福州迈新生物技术开发公司提供),其他试剂均为国产.1.2方法载玻片经多聚赖氨酸防脱片处理后,每例组织块切2张,切片厚度为5tma,切片面积约1.5cm1.2cm.将切片分常规处理组和改进方法组,每组15张切片.常规处理组将组织切片直接放人装有柠檬酸盐缓冲液(ph6.0)的保鲜盒中,

3、以720w的微波炉中中火进行抗原修复18rain;改进方法组于抗原修复前在切片组织处铺置已被上述缓冲液浸湿的显微镜擦镜纸,纸的大小应盖过组织,长度延长至载玻片的背面,然后放在耐高温的切片架上置于柠檬酸盐缓冲液中,最后将切片于微波炉做间断修复.即微波中火加热3次(jjh热至沸腾95100),每次5min,中途间歇2min,用镊子把擦镜纸拿掉后,再加热1min,待降至常温后常规s-p法染色.1.3统计学处理采用卡方检验.规组切片有不同程度脱片13张,未脱片2张,改进组脱片1张,未脱片14张,结果经统计学分析p<0.01.观察两组的免疫组化染色情况,常规组和改进组染色效果基本一致.3讨论免疫组

4、化染色技术作为常规的检测手段之一,目前已广泛应用于临床病理诊断和鉴别诊断等形态学研究中.免疫组化染色的关键步骤是抗原修复,其目的在于充分暴露抗原决定簇,抗体与抗原结合充分,使组化染色有一个满意的结果.但目前抗原修复的常规方法是采用微波加热方法,此方法既方便又有效,但由于加热过程中破坏了赖氨酸与切片的粘附性3,常常造成切片部分或全部从载玻片上脱落现象(特别是当切片面积大于1.5cmx1.2cm时),影响染色结果的观察而造成人力和物力的损失.本文介绍的方法,既可以使样品与修复液充分接触,同时又能防止加热状态下离子对切片的冲击,缓解了液体的流动波,进而达到防止脱片的目的.在抗原修复完成剥掉擦镜纸之后,应采用微火处理切片lmin,目的是使切片上粘附的纸纤维去掉,防止影响染色的效果.事实上采用本方法防止脱片操作简单,经济可行,不需添加任何试剂和设备,同时又能保证抗原的修复而达到染色目的.本文同时比较常规组和改进组的免疫组化染色效果,结果基本一致.综上所述,间歇性微波抗原修复方法,既可达到抗原决定簇完整修复,又不影响组化染色效果,同时能防止切片的脱落.参考文献:1王晓秋.免疫组化染色前抗原修复方法的合理选择j.临床与实验病理学杂志,2006,22(3):367.2结果2杨军,杨元华.临床实验诊断中抗原修复的生化机制j.中国医师杂志,2oo4,6(2):286287.常