常用抗凝剂的配制和使用.doc

1、常用抗凝剂的配制及用法在医学实验中常需动物的全身抗凝，采出的全血或血浆有的也需加入适当的抗凝剂抗凝。对 抗凝剂的要求是：用量少、溶解度大、不带进干扰实验的杂质。一、肝素（1）肝素抗凝作用原理肝素的抗凝作用很强 ,作死亡复苏等实验时 , 常用它作动物全身抗凝剂 ，肝素的抗凝作用主要 是抑制凝血致活酶的活力，阻止血小板凝聚以及抑制抗凝血酶等作用，从而使血液不发生凝固。注意事项：做全血DNA提取的时候抗凝剂不能采用肝素！因为肝素是聚合酶链式反应的抑制 剂！（2）配制和用量纯的肝素10mg能抗凝65125 ml血液（按Img等于125U, 1020U能抗1 ml血液计）。但由 于肝素制剂的纯度高低以及

2、其保存时间长短不等，因而其抗凝效果也不相同。一般可配成1肝素生理盐溶液，用时取0. 1毫升于试管内，100C烘干，每管能抗凝510ml血液。也可将抽血 注射器用配好肝素湿润一下管壁,直接抽血至注射器内而使血液不凝。在动物实验作全身抗凝时，一般剂量为：大白鼠 2. 53. 0mg/200300g体质量，兔10mg/kg体质量，狗510mg/ kg 体质量。肝素可改变蛋白质等电点，因此当用盐析法分离蛋白质作蛋白质各部分的测定时，不可采用肝素。市售的肝素钠溶液每毫升含肝素12500U,相当于100mg二、草酸盐合剂（1 ）原理草酸胺能使血细胞略为膨大，而草酸钾能使血细胞微缩小，因此草酸铵与草酸钾按3

3、： 2比例配置，可使血细胞体积保持不变；加福尔马林则能防止微生物在血中繁殖。此抗凝剂最适于作 红细胞比积测定。（2）配制方法及用量草酸铵1. 2g、草酸钾0. 8g、福尔马林1. 0ml、蒸馏水加至100ml每毫升血加草酸盐合剂 0. 1ml（即相当草酸铵1. 2mg草酸钾0. 8mg）。根据取血量将计算好的草酸盐剂量加入玻璃容 器内烤干备用。如取0. 5ml于试管，烘干后每管可使5ml血不凝固。（3）注意事项 草酸的作用在于能够沉淀血凝过程中所必需的钙离子，而达到抗凝目的。用时注意加的量应适中，不能过多，以免妨碍去蛋白质血滤液的制取。不适用于血液内钙或钾的测定，也不能用于 血液非蛋白氮测定。

4、三、枸櫞酸钠常配成35%水溶液。也可直接加粉剂，每毫升血加 35mg即可达到抗凝目的。枸櫞酸钠可使钙失去活性 ，防止凝血。但其抗凝作用较差 ，碱性较强，不宜作化学检验之用。 仅可用于红细胞沉降速度测定。急性血压测定实验所用枸櫞酸钠为5 6溶液。四、草酸钾（一）原理和注意事项草酸钾为最常用的抗凝剂。其与血液混合后可迅速与血液中的钙离子结合，形成不溶解的草 酸钙，使血液不凝固。常用于非蛋白氮测定，但不适用于测定钾和钙。草酸盐能抑制乳酸脱氢酶、 酸性磷酸酶和淀粉酶的活性，故应注意。（二）配制及使用方法取草酸钾10g,加蒸馏水少许使溶解，再加蒸馏水至 100ml。配制成10%水溶液，如每管加0.1ml

5、则可使510ml血不凝。一般如作微量检验，用血量较少，可配制成2%溶液，如每管加0. 1ml可使12ml血液不凝。五、乙二胺四乙酸二钠盐（EDTAEDTA寸血液中钙离子有很大的亲和力，能与钙离子络合而使血液抗凝。每0.8mg可抗凝1ml血液。除不能用于血浆中钙、钠及含氮物质之测定外，适用于多种抗凝。六、（酸性）柠檬酸葡萄糖溶液 B （ACD （用于新鲜抽提或者是冻存的血样品，实验室常 用）柠檬酸钠：1.32% （M/V）柠檬酸：0.48% ( M/V)葡萄糖：1.47% ( M/V)ACD抗凝剂为：柠檬酸0.48g、柠檬酸钠1.32g、葡萄糖1.47g，加水至100ml，灭菌后备用一般20ML

6、新鲜血液中加入3.5ML ACD抗凝剂。比例依次类推！血液可以在0度条件下保存数天，或者是零下 70度条件下无限期保存！注意事项：做全血DNA提取的时候抗凝剂不能采用肝素！因为肝素是聚合酶链式反应的抑制 剂！从全血中制备基因组DNA ACD做为抗凝剂要优于EDTA因为他更加能保存高分子质量的 DNA然而，血样常常被收集于用定量 EDTA乍为抗凝剂的小管中。在大多数美国的医院中，收集血样的小管均用颜色标明是否含有抗凝剂，紫色顶管盖的小管 一般含有抗凝剂，通常是EDTA勺干粉。黄色顶盖的小管不含抗凝剂。在分子克隆实验中，前者一般用于收集血样用于制备基因组的DNA后者用于收集血样作为用EB病毒的永生化淋巴细胞的来源。