重医免疫学思考题

1、临床检验免疫学-思考题答案抗原抗体反应一、抗原抗体反应的原理1. ） Ag、Ab能特异性结合：（内因）Ag、Ab能特异性结合，是由于Ag表位（抗原决定簇）和Ab Fab段（V区）之间的特异性结 合，二者在空间结构上是严格互补的。1.）Ag、Ab结合的动力：（外因）静电引力（又称库仑引力）：它是指抗原和抗体分子上带有相反电荷-NH3+或-COCT之间的相互吸引力。例如Ab分子上赖氨酸离解层中含有 -NH3+ , Ag分子上天门冬氨酸离后含有-COO-，这两者之间就可相互吸引而产生静电引力。该力的大小与两个电荷间距离的平方成反比。距离越近，静电引力就越强。范得华力（又称电子云力）：该力是原子与原子

2、、分子与分子间所具有的一种吸引力。 当Ag、 Ab两分子外层轨道上的电子相互作用时， 电子云由于偶极摆动而产生吸引力， 从而促使Ag、 Ab的结合。 该力大小小于静电引力。氢键：该力是由于分子中的 H原子和电负性较大的 O、N、S原子间的相互吸引而形成的。 氢键对于维持生物大分子（AgAb ）的形态和结构有很大作用。它的大小大于范得华力。疏水作用力：Ab是蛋白质，Ag少数是多糖，多数也是蛋白质，那么它们就是胶体物质，在水溶液中就带有-NH3+或-COCT极性基团，从而带上正电或负电，成为亲水胶体。当Ag表位和Ab Fab段相互靠近时，亲水层消失，排斥掉两者间的H2O分子，促进Ag、Ab的结合。

3、疏水作用力在整个 Ag、Ab反应中提供的作用最大二、抗原抗体反应的特点1） .特异性：Ag、Ab的结合实质上是抗原表位和抗体可变区之间的结合。Ab可变区可形 成一个平穴槽，Ag则楔状嵌入，由于两者在化学结构和空间结构上的互补，使得它们的结合具有特异性。这种结合如同钥匙与锁的关系，一把钥匙只能开相应的一把锁2）.最适比例：Ag、Ab的结合并不是在任何比例下都进行得充分、完全的。要形成我们肉眼可见的反应（如沉淀、凝集现象等），就涉及到最适比例问题。3）.可逆性：Ag、Ab结合形成抗原抗体复合物，这一过程是一个动态平衡，在一定的条件下，反应是可逆的： Ag + Ab tAgAb，其主要原因为 Ag、

4、Ab结合是非共价键结合，不为 化学反应。三、影响抗原抗体反应的主要因素自身因素：1） Ag :与Ag的理化性质、抗原表位的数目及种类有关；2） Ab :与Ab的来源有关：是 R型抗体或H 型抗体；与Ab的特异性、亲合性有关；与Ab的浓度有关。外界环境条件：1） .电解质：一般实验室所用电解质都是生理盐水（0.9% NaCl）,浓度不能过高。浓度过高， 会使Ab蛋白质优先沉淀而出现盐析现象。2） . PH : 一般为PH 6-8,当PH 试血和放血 鉴定、保存试血和放血：试血：末次Ag注射后，测定血清中Ab的效价，叫试血。若Ab达到所需效价, 即可放血。若未达到，继续追加免疫 Ag 一次。试血：

5、可溶性Ag :用双扩（梅花孔型）；颗粒性Ag :用直接凝集试验（试管法） 放血：直接颈动脉放血或直接心脏穿刺抽血。然后分离出血清，即可得到 Ab二、佐剂概念、作用机理、福氏不完全/完全佐剂的组成。.佐剂（adjuvant）:同Ag 一起或预先注入机体，能增强机体对该Ag的免疫应答或改变免疫应答类型的物质。作用机理：组成：1福氏不完全佐剂（FIA）：组成：羊毛脂+石腊油，二者比例为4 ： 12福氏完全佐剂（FCA）：组成：羊毛脂+石腊油+卡介苗免疫效果更好，因为进一步提高、加强了免疫反应，并使免疫反应发生质的改变。免疫球蛋白的分离提纯分离提纯免疫球蛋白有哪些方法，其原理是什么？方法原理盐析法在不

6、同浓度的中性盐中蛋白质会脱水，降低带电电势，亲水性变为疏水性， 分子间相互凝聚而沉淀（盐析作用）。离子父换 层析法利用不冋的蛋白质在缓冲溶液中所带电荷不冋，与某一载体上的具有相反电 荷的离子基团进行吸附，然后进行解脱，达到纯化蛋白质目的。凝胶过滤法凝胶颗粒是网状结构， 当分子大小不同的混合物通过凝胶柱时，分子大的先下来，分子小的嵌入凝胶颗粒的网状结构中后下来，从而将分子大小不同的物质分离开来，即为分子筛的作用。亲和层析 法利用抗原抗体的结合具有特异性、可逆性，将纯化抗原先交联（吸附）到载体（琼脂糖珠）上，制成亲和层析柱，当Ab （Ig）通过时，与抗原特异性结合于柱上，Ab中杂质流出。然后通过改

7、变缓冲液pH、离子强度，使Ab解脱下来。单克隆抗体及应用一、单克隆抗体概念针对Ag分子表面某一抗原决定簇（又称表位）而产生的抗体分子，称McAb单克隆抗体一一由一个B细胞克隆产生的识别单一抗原表位的同源抗体。二、杂交瘤技术制备单抗的原理及简要步骤原理：1、B细胞（浆细胞）特点：1）能产生抗体 2）但不能在体外长期培养 3）细胞内含HGPRT酶（次黄嘌呤鸟 嘌呤磷酸核糖转化酶）和TK酶（胸腺嘧啶核苷激酶），可通过旁路途径合成DNA2、骨髓瘤细胞1）能在体外长期培养 2）不含HGPRT和TK酶3、杂交瘤细胞具有以上两种细胞的共性：既能产生抗体、在体外能长期培养；同时含有 HGPRT和TK酶，可通过

8、旁路途 径合成DNA4、HAT培养液筛选出杂交瘤细胞（次黄嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶）:氨基蝶呤是抗代谢的药物，能阻断内源性合成 DNA （合成DNA的主要途径）。 简要步骤：1制备能产生单抗的杂交瘤细胞2克隆化杂交瘤细胞3筛选杂交瘤细胞4.扩大培养单克隆杂交瘤细胞5收集单抗并鉴定6. 纯化单抗（具体的步骤可以参考 ppt）三、HAT培 养基 的作用筛选出杂交瘤细胞四、人源单克隆抗体概念：单克隆抗体为人IgG五、基因工程抗体、嵌合抗体概念，嵌合抗体优点基因工程抗体：在基因水平上对编码抗体的基因进行切割、拼接或修饰，甚至人工合成，然后导入受体细胞内表达而产生的抗体（单克隆抗体）。嵌合抗体概念：用D

9、NA重组技术将鼠源单抗基因的可变区（V区）基因与产生人lg的恒定区（C区）基因相连接，构成嵌合基因，导入受体细胞（骨髓瘤细胞），表达出嵌合抗体。嵌合抗体优点：a. 免疫原性低，有利于用于人体b. 在人体内半衰期较鼠单抗长c. 在人体内生物学作用（如 CDC、ADCC ）较鼠单抗强d. 与人/人杂交瘤比，体外传代更稳定补体的检测与应用一、补体的定义、组成及性质定义：补体是存在于人和动物血清中的一组具有酶活性的球蛋白，一般情况下处于未 激活状态。组成：1补体的固有成分：C1-C9,其中C1又包括C1q、C1r、C1s,共9种成分11种蛋白分子。其 中C9的分子量最小、C3的含量最高；2补体的调节蛋

10、白：如 C4调节蛋白、C1抑制物、S蛋白等；3补体受体；女口 C1qR、C3aR等；性质：稳定性差，各种理化因素都可使之失活：如酸、碱、紫外线照射、剧烈震荡等二、CH50实验的原理、正常值及意义原理：a组成和功能完整的补体系统能使致敏羊红细胞发生溶血；b. 羊红细胞的溶血程度与补体的活性成正比；（S型）c. 在50%溶血附近（30% 70%之间），稍微改变补体量，溶血程度变化明显，因此以50%溶血率来判定终点较 100%更为敏感，所以该试验称为50%溶血试验（CH50）。正常值：50 100U/ml意义：1补体量T :多见于急性炎症感染、组织损伤、癌肿；2补体量见于补体消耗f:体内有Ag、Ab

11、反应，如SLE、RA等；补体合成J：肝脏疾患； 补体先天性缺乏：具有遗传性和家族史三、补体结合实验的原理、结果判断及评价原理：补体可与任何一组 AgAb复合物结合；一旦与某一 AgAb复合物结合后，便不 再与另一复合物结合。结果判断：不溶血为阳性，即待测物中有相应的Ab或Ag ；溶血为阴性，即待测物中无相应的Ab或Ag.评价:优点缺点1、该试验既可测 Ag、又可测Ab ；2、Ag既可以是颗粒性Ag、也可是可溶性Ag、甚至可以是块状物，因此检测Ag的范围广；3、可以用于病毒、立克次氏体、细菌等多种病原体的检测（实际上是测Ag ）；4、比较敏感（0.05卩g/ml）、特异；5、结果判断明显：通过有

12、无溶血来观察，无 需特殊仪器检测。1、 参与反应的物质多，影响因素也多； （反 应体系中有Ag、Ab、C、羊红细胞、溶血素）2、在正式试验前需要找出几种物质间最恰当 的比例，比较复杂。机体免疫功能检测、人体免疫功能包括哪些组成部分?类型组成非特异性免疫1皮肤、黏膜的机械阻挡作用及局部分泌的抑菌、杀菌物质 2吞噬细胞的吞噬作用3.NK（nature killer）细胞对病毒感染靶细胞的杀伤作用4血液、体液中的抗菌分子：补体、溶菌酶特异性免疫细胞免疫：由TLC主导完成，其效应物质是致敏 TLc（CTL/Th1） 体液免疫：由BLC主导完成，其效应物质是 Ab二、实验室中检测人细胞免疫和体液免疫最常

13、用哪些试验，这些试验的原理如 何？正常值应为多少？一 .T细胞的计数（T细胞表面标志的检测）（一）特异性抗原的检测T细胞表面有一些特异的 CD抗原，根据这些不同的 CD抗原可鉴定不同的 T细胞群体 CD抗原：淋巴细胞群（簇）分化抗原：不同群淋巴细胞在分化成熟过程中，细胞表面 出现或消失的抗原分子 检测T淋巴细胞表面CD抗原中：CD3+的数量表示成熟的总 T淋巴细胞的数量，CD4+的数量表示是Th细胞的数量，CD8+的数量表示是CTL/Ts细胞的数量。CD4+/CD8+ 1.5。免疫功能差或者免疫功能紊乱，该比值小于1（二）T细胞特异性受体（E受体）的检测E 花环形成试验 （Erythrocyt

14、e Rosette forming test）原理：T淋巴细胞表面含有绵羊红细胞（SRBC）受体（CD2），当T淋巴细胞与绵羊红细胞相遇时，T细胞通过该受体吸附绵羊红细胞而形成花环。正常值：Et花环形成试验：60%80% （代表T细胞总数）Ea花环形成试验：20%30% （活性强的T细胞）二、T细胞功能的检测检测T细胞功能的试验有：（一）淋巴细胞转化试验1原理淋巴细胞在某些物质刺激下，细胞增殖、分化（如细胞变大、胞浆增多、出现空泡）DNA合成增加（核染色质疏松，核仁出现），转化成为淋巴母细胞。正常值60%80%（二）相关的细胞因子的检测（在细胞因子章节介绍）（三）淋巴细胞的细胞毒性检测细胞毒性

15、T细胞（CTL）具有杀伤靶细胞的功能，它是评价机体细胞免疫水平的指标。检测 这种杀伤作用的试验称为细胞毒试验。CD8+CTL与靶细胞表面相应抗原结合通过脱颗粒，释放穿孔素、颗粒酶，使靶细胞溶解、 凋亡。三、B细胞数量的检测（一）B细胞表面识别抗原受体（BCR ）（Smlg, Surface membrane lg）的检测I.Smlg 是B细胞表面膜免疫球蛋白，存在于成熟B淋巴细胞膜上，为 B细胞结构蛋白。类型为：IgM、IgD型。正常值：15%25%（二）B细胞表面抗原的检测B细胞表面特有的 CD抗原有：CD19、CD21，用抗CD21的单抗（免疫荧光法、酶免 疫组化法）检测外周血淋巴细胞，阳

16、性细胞为B淋巴细胞，约占总淋巴细胞的10%15%。四、B细胞功能的检测（一）血清中lg的测定人的体液免疫功能正常（B细胞功能正常），应反映在血清中有正常量的免疫球蛋白 检测人免疫球蛋白常用方法：单向琼脂扩散试验、免疫比浊法正常值：IgG12.0mg/ml（7.616.60）IgM1.3mg/ml （0.402.20）IgA2.0mg/ml（0.703.50）（二）血型抗体效价的测定反映体内IgM水平正常6月婴儿抗 A 1 : 8,或抗 B 1 : 4; 1岁后抗A1:16，或抗B 1 : 8如3岁以上抗A或抗B效价仍 1 : 4，表示IgM缺乏，提示先天性体液免疫功能缺陷。（三）抗原刺激机体后

17、抗体应答反应（体内试验）将抗原注射到体内，一段时间后检测相应抗体效价，如抗体效价低，说明机体体液免疫功能差如用三联伤寒菌苗 0.25ml注射，每周1次，连续3次，抗H应为1 : 160，若低，表 示体液免疫应答功能差。免疫复合物及检测一、免疫复合物的含义及免疫复合物病的致病原因含义：immune complex,IC 它主要指 AgAb复合物及 AgAbC复合物两种。致病原因：中等大小的IC沉积在体内，通过激活补体、激活血小板而致病。二、 免疫复合物检测使用的标准品、出现的问题及WHO推荐的检测方法 标准品：目前普遍应用的标准品是 AHG 热聚合人IgG （不是IC）。出现问题：到目前为止，所

18、有检测IC的试验，还没有另人满意的标准化措施；在体外制备的IC还很不稳定，因此用人工合成的复合物作为定量标准不适宜。WHO推荐的检测方法：C1q结合试验、胶固素试验、类风湿因子（RF）试验、Raji细胞试验自身免疫性疾病及检测、AID的基本特征及常见的AID有哪些?1诱因可有可无。2、有一定的遗传倾向。3、女性患者多见，发病率随年龄增长而增加。4、 患者血清中可检出高效价的自身抗体和（或）自身致敏T淋巴细胞。一些自身抗体在自 身免疫病中呈现交叉重叠现象 ：即在同一种自身免疫病患者体内可检测到多种自身抗体， 而不同的自身免疫病也可存在同一种自身抗体。5、IgG、IgA、IgM升高，尤其IgG升高

19、明显。6、病损局部可发现有淋巴细胞、浆细胞、嗜酸性粒细胞浸润及免疫复合物沉积。7、免疫抑制剂治疗可取得一定疗效。二、ANA的定义及ANAs的组成ANA原指抗细胞核抗原成分的自身抗体的总称。ANA广义地指抗细胞内所有抗原成分的自身抗体的总和。ANA所针对的靶抗原由细胞核扩展到整个细胞，包括细胞核、细胞浆、细胞骨架及细胞周期等。组成：抗DNA抗体：抗dsDNA、抗ssDNA抗体抗组蛋白抗体（AHA） :抗 H1、H2A、H2B、H3、H4 等抗ENA抗体：抗 Sm抗核糖核蛋白RNP丄、抗.S-A、抗一一SS-B.等.抗非组蛋白抗体：抗Scl-70、抗Jo-1、抗Ku、抗增殖细胞核抗原（PCNA ）

20、、抗PL-7、抗PL-12、 抗着丝点抗体等抗核仁抗体：抗 PM-Scl、抗NOR-90、抗U3nRNA抗细胞其它成分抗体：抗高尔基体、抗中心体、抗线粒体、抗肌动蛋白、抗核层蛋白等三、各种AID检测时的代表性自身抗体有哪些?为提高SLE的诊断准确率，可将抗Sm 抗体和抗dsDNA抗体同时检测。抗双链 DNA （ dsDNA）SLE抗组蛋白抗体（ANA）-药物性狼疮抗可提取性核抗原抗Sm抗体SLE抗可提取性核抗原ENA）抗SS-A、SS-B抗体-干燥综合症(MCTD).抗核糖核蛋白抗体-混合性结合性结缔抗Scl-70抗体 （抗非组蛋白抗体）全身性硬化症（PSS）抗Jo-1抗体肌炎和间质性肺纤维化

21、抗线粒体抗体（AMA）-原发性胆汁性肝硬化（PBC）免疫缺陷病及其检测（immunodeficiency disease, ID）一、在原发性免疫缺陷病中哪一种发生最多？原发性体液免疫缺陷病占原发性ID的5070%、怀疑体液免疫缺陷应作哪些过筛试验和确诊试验?过筛实验确诊实验(1) 血清蛋白电泳 丙球定量： 丙球应占 总蛋白的15%，大于9.0mg/ml为正常；右小 于2.5mg/ml，应考虑ID(2) 血型抗体效价测定 (反映IgM水平)正 常：抗A大于1:16，抗B大于1: 8,右3 岁以上，抗A或抗B仍小于1: 4，应考虑ID(3) 血清抗链球菌溶血素抗体的测定(抗0)的测定一反应IgG

22、水平3岁以上应大于100单位(4) 骨髓检查：查浆细胞正常浆细胞应大于 2%(1) 血清免疫球蛋白(G、M、A)测定：用单扩法或免疫比浊法：若IgG小于2.5mg/ml、IgA 缺乏、IgM 小于 0.20mg/ml，可 确诊为无丙球蛋白血症(2) 抗原刺激后抗体应答反应二联伤寒菌苗试验：正常人注射0.25ml，每周 1次，连续3次，抗H应为1 : 160,若低于1 : 40,表示体液免疫功能差(3) B细胞计数：(Smlg检测)正常15%左右(4) T 细胞亚群测定：CD4/CD8(Th/Ts)正常(1 3.5)/1,若小于0.5,可确诊为 AIDS三、怀疑细胞免疫缺陷应作哪些过筛试验和确诊

23、试验?过筛实验确诊实验(1)淋巴细胞绝对值测定正常大于(1)淋巴结活检：2.5 X 109/L， 若 小于 1.5 X 109/L 为缺乏注意深皮质区的淋巴 细胞数(2)迟发型超敏反应皮试:OT皮试等(2) T淋巴细胞计数：(3)胸腺X线检查：观察胸骨是否发育不E花环实验：正常Et 60 70%全CD3+TLC、CD4+TLC、CD8+ TLC 计数(3) T细胞功能试验淋巴细胞转化试验：正常60 70%附：0T实验：OT 1:2000 0.1ml皮内注射，48 72h观察结果，红肿硬结大于 0.5cm为阳性 该试验设计是基于人群中96%的人均感染过结核菌阳性(直径0.5cm):曾感染过结核菌

24、，细胞免疫功能好 阴性(直径 0.5cm):细胞免疫功能差(缺陷)或从未感染过结核菌 强阳性(直径2.5cm)：表明现处于结核的活动超敏反应的检测-、I、W型超敏反应皮试的原理 I型：I脱颂粒絆放吿勘舌性允團IJ.二刑备命介质I新合金的斧质I1型超敏反应的发生机制致馭阶段 激发和效应阶段b-nnuiiAaco当变应原再次进入致敏者皮肤，与吸附在肥大细胞或/和嗜碱性粒细胞上的特 异IgE高变区结合，导致肥大细胞或嗜碱性粒细胞脱颗粒，释放生物活性介质： 如组织胺、白三烯、激肽等。W型：用皮内注射、皮肤斑贴等方法使变应原进入已致敏机体，体内致敏的T细胞CD4+Th1再次遇到相应抗原后，释放出大量细胞

25、因子，如IL-2、IFN- 丫、TNF、IL-3、GM-CSF,（1）活化巨噬细胞及NK，增强吞噬细胞作用；2）吸引WBC到达Ag所在部位，促进吞噬；（3）促进T细胞增生和分泌细 胞因子，加重局部炎症反应，最后造成局部以单核细胞和淋巴细胞浸润为主的炎 症反应。、比较I、W型超敏反应皮试（抗原、时间、结果、意义）抗原时间结果意义I型鱼虾、牛奶、花粉、青霉素 等。20 - 30分钟 速发型（IgE）红晕、红斑、风 团以及搔痒感判断对所实验的 变应原是否过敏型包内寄生菌、微生物、寄生 虫、组织抗原、化学物质48-72小时 迟发型（Th1，CTL）红肿、硬结或水 泡反应或了解机体 的细胞免疫功能主要组

26、织相容性复合体及其编码分子重点：*HLA-I、II类分子的结构、分布及意义组成结构分布意义I类HLA-A、B、-C由一条a链和一条B链组成，a链的N端胞外区分为0（ 1、 a 2、a 3三个结构区，其中a 1、 a 2构成抗原结合槽，与处理后 的抗原肽结合形成 MHC-抗原 肽复合体。所有有核细胞膜上1、识别和提呈内 源性抗原肽2、对CTL的识别起限制性作用II类HLA-DR、 DP、 -DQ山一条讎和-条链组成，两 条肽旌的胞外区分别有1、2和仏2两个功能区，苗 1与 1共同形成抗原结合 槽。抗原提呈细胞（如 B细胞、巨噬细胞、 树突状细胞）及活 化的T细胞等1、识别和提呈 外源性抗原肽2、

27、对Th的识别起限制性作用移植免疫学及其检验技术一、移植排斥反应的类型及产生的原因和避免方法。排斥反应的临床分类分两大类：宿主抗移植物反应移植物抗宿主反应宿主抗移植物反慢性排斥反应*应*急性排斥反应、慢性排斥反应再次反应超急性排斥反应 加速性排斥反应类型原因避免方法超急性排斥反应受者体内预存有抗供者细胞的抗体（针对HLA），抗体与供体细胞（HLA Ag ）结合，激 活补体，细胞破坏；补体活化产物使血小板凝 聚，释放凝血因子 X n,产生血管内凝血移植前对受体血清与 供体细胞进行细胞毒 试验-CDC试验加速性排斥反应冋超级性，但抗体效价及亲和性要 低些。极少数也可能由致敏淋巴细胞引起。CDC试验急性排斥反应供、受者HLA Ag型别不完全一致造成。早期 以细胞免疫为主、晚期体液免疫为主尽可能选HLA Ag型别一致的供体慢性排斥反应二、移植物抗宿主反应的概念及产生原因。移植物抗宿主反应：多发生在骨髓移植中移植物中免疫活性细胞攻击宿主产生原因：（1）宿主免疫活性细胞处于反应无能状态（2）移植物中含有大量的免疫活性细胞三、移植前选择供体应做哪些检测？（一）交叉配合试验1. 检测受体血清中有无抗供体细胞的抗体(1)微量补体依赖的细胞毒试验( compleme nt depe ndent cytotox