第八章 4 杂环类药物的分析

1、 杂环类药物的分析杂环类药物的分析第四节第四节 喹诺酮类药物的分析喹诺酮类药物的分析 喹诺酮类药物是一类化学合成抗菌药，喹诺酮类药物是一类化学合成抗菌药，由于具有抗菌谱广、抗菌作用强、使用安全由于具有抗菌谱广、抗菌作用强、使用安全及易于制造等优点，发展迅速。及易于制造等优点，发展迅速。基本母核结构：基本母核结构：4-4-喹诺酮喹诺酮-3-3-羧酸羧酸NOFCOOHR3R1R2一、几种常用药物的化学结构及理化性质一、几种常用药物的化学结构及理化性质NOC2H5COOHFNHNNOCOOHFNH3CNOCH3 盐酸环丙沙星盐酸环丙沙星 氧氟沙星氧氟沙星诺氟沙星诺氟沙星吡哌酸吡哌酸NNNOOOHFH

2、,HCl,H2O碱性碱性还原性还原性酸性酸性理理 化化 性性 质质 酸碱两性酸碱两性 结构分子中都含有结构分子中都含有羧基羧基及及碱性哌嗪基碱性哌嗪基， 溶解性溶解性 易溶于碱和酸，在水和乙醇中极微溶解。易溶于碱和酸，在水和乙醇中极微溶解。 还原性还原性 哌嗪基哌嗪基 遇光被氧化，颜色变深遇光被氧化，颜色变深 紫外区有特征吸收紫外区有特征吸收 具有共轭系统具有共轭系统 氟元素反应氟元素反应 氯化物反应氯化物反应二、鉴别二、鉴别（一）丙二酸反应（一）丙二酸反应 本类药物分子中因有本类药物分子中因有叔胺基团叔胺基团，可与，可与丙二酸在醋酐中共热，生成丙二酸在醋酐中共热，生成有色化合物有色化合物（棕

3、、红、紫、蓝）（棕、红、紫、蓝）。此反应是。此反应是叔胺基团叔胺基团的特殊反应的特殊反应。吡哌酸的鉴别 取本品约取本品约10mg，置干燥试管中，置干燥试管中，加丙二酸少许与醋酐加丙二酸少许与醋酐3滴，置水浴中加热滴，置水浴中加热5分钟，即显分钟，即显深棕色深棕色。（二）氟元素反应（二）氟元素反应 本类药物结构中大多含有本类药物结构中大多含有氟原子氟原子，与母核以共价键连接，不能直接鉴别，与母核以共价键连接，不能直接鉴别，需经需经氧瓶燃烧法氧瓶燃烧法进行有机破坏后，使有进行有机破坏后，使有机结合的氟转化游离的机结合的氟转化游离的F-，用，用稀氢氧化稀氢氧化钠钠溶液吸收，吸收液中的氟离子在醋酸溶液

4、吸收，吸收液中的氟离子在醋酸钠的稀醋酸缓冲液中，与钠的稀醋酸缓冲液中，与茜素氟蓝及硝茜素氟蓝及硝酸亚铈酸亚铈试液作用即显试液作用即显蓝紫色蓝紫色（三）紫外分光光度法（三）紫外分光光度法 利用本类药物分子结构中有利用本类药物分子结构中有共轭体共轭体系系，在一定的紫外光区有特征吸收，进，在一定的紫外光区有特征吸收，进行鉴别行鉴别吡哌酸的鉴别吡哌酸的鉴别 取本品，加取本品，加0.04%氢氧化钠溶液制氢氧化钠溶液制成每成每1ml中含中含4ug的溶液，照紫外的溶液，照紫外-可见可见分光光度法测定，在分光光度法测定，在273nm与与333nm的波长处有最大吸收的波长处有最大吸收（四）薄层色谱法（四）薄层色

5、谱法 中国药典中国药典2010年版采用薄层色谱法年版采用薄层色谱法鉴别若氟沙星、盐酸环丙沙星鉴别若氟沙星、盐酸环丙沙星P185P185三三 检查检查 一般杂质检查一般杂质检查 溶液的澄清度：检查碱中不溶性杂质：哌嗪溶液的澄清度：检查碱中不溶性杂质：哌嗪等碱性化合物及中间体；操作要迅速等碱性化合物及中间体；操作要迅速 干燥失重：吡哌酸干燥失重：吡哌酸 15.0%16.0%15.0%16.0% 特殊杂质检查特殊杂质检查 色谱法色谱法 HPLCHPLC、TLCTLC四四 含量测定含量测定 非水溶液滴定法非水溶液滴定法 原料药原料药 哌嗪基因，显碱性，哌嗪基因，显碱性， 诺氟沙星诺氟沙星 紫外紫外-

6、-可见分光光度法可见分光光度法 制剂制剂 吡哌酸片吡哌酸片 HPLC HPLC法法 P187 P187 本类药物在水中易解离，多采用离子抑制色谱本类药物在水中易解离，多采用离子抑制色谱 诺氟沙星的分析诺氟沙星：临床常用消炎药诺氟沙星：临床常用消炎药化学名：化学名：1-乙基乙基-6-氟氟-4-氧代氧代-l,4-二氢二氢-7-(1-哌嗪基哌嗪基)-3-喹啉羧酸喹啉羧酸结构：结构：NOC2H5COOHFNHN性质：性质：结构中有羧基显酸性，有哌结构中有羧基显酸性，有哌嗪基显碱性，是两性化合物。嗪基显碱性，是两性化合物。1鉴别试验显显红红棕棕色色本本品品与与丙丙二二酸酸、醋醋酐酐共共热热（1） N1为

7、叔氨基为叔氨基 （2）F6显有机氟化物的性质显有机氟化物的性质 （3） 紫外吸收特征：紫外吸收特征：5 g/mL本品的本品的0.4NaOH溶液，溶液，max273nm（4）采用红外光谱、薄层色谱、）采用红外光谱、薄层色谱、HPLC鉴别鉴别蓝蓝紫紫色色茜茜素素氟氟蓝蓝 pH4.33CeF 2检查试验（1）溶液的澄清度：）溶液的澄清度：目的目的：控制碱不溶性杂质的限量：控制碱不溶性杂质的限量检查方法检查方法：比浊法：比浊法指标要求指标要求：5份均应澄清；如显浑浊，与份均应澄清；如显浑浊，与2号浊度标准液比较，均不得更浓。号浊度标准液比较，均不得更浓。（2）氟：）氟：限度限度：含氟量：含氟量 5.4

8、（理论（理论5.95） 偏低原因偏低原因：原料制备、副反应：原料制备、副反应（3）有关物质：）有关物质：HPLC法法 限度限度：杂质：杂质A0.2%。其他单个杂质。其他单个杂质 0.5%。其他各杂质的和。其他各杂质的和1.0%。（4）干燥失重：本品易吸收水分。）干燥失重：本品易吸收水分。 限度限度：105，减失重量不得过，减失重量不得过1.0%（5）炽灼残渣）炽灼残渣 铂坩埚铂坩埚 限度限度：遗留残渣不得过：遗留残渣不得过0.1%。（6）重金属）重金属 限度限度： 15ppm。 3含量测定 原理原理：利用分子中有哌嗪基团显碱性。利用分子中有哌嗪基团显碱性。 测定方法测定方法：取本品约取本品约0

9、.25g，精密称定，加，精密称定，加冰醋酸冰醋酸20mL溶解后，加橙黄溶解后，加橙黄指示剂，用高指示剂，用高氯酸标准滴定溶液氯酸标准滴定溶液(0.1mol/L)滴定至溶液显紫滴定至溶液显紫红色，并将滴定结果用空白校正。红色，并将滴定结果用空白校正。 注意事项注意事项：严格控制醋酐用量严格控制醋酐用量 诺氟沙星分子中哌嗪基为仲胺，容易发生诺氟沙星分子中哌嗪基为仲胺，容易发生乙酰化反应。乙酰化反应。非水碱量法非水碱量法色谱条件色谱条件：色谱柱：色谱柱：C18柱柱流动相：流动相：0.025mol/L磷酸溶液（用三乙磷酸溶液（用三乙胺调节胺调节pH值至值至3.00.1）-乙腈（乙腈（8713）检测波长

10、：检测波长：278nm系统适用性系统适用性： 诺氟沙星峰与与环丙沙诺氟沙星峰与与环丙沙星峰和依诺沙星峰的分离度均应不小于星峰和依诺沙星峰的分离度均应不小于2.0定量方法定量方法：外标法外标法 高效液相色谱法高效液相色谱法 环丙沙星的分析 化学名化学名：1- 1-环丙基环丙基-6-6-氟氟-l,4-l,4-二氢二氢-4-4-氧氧-7-(1-7-(1-哌嗪基哌嗪基)-3-)-3-喹啉羧基喹啉羧基结构结构：NOCOOHFNHN与诺氟沙星的结构区别是与诺氟沙星的结构区别是N N1 1上的取代基不同上的取代基不同 1鉴别试验红外光谱法红外光谱法：与对照的图谱一致。与对照的图谱一致。 TLC法法：供试品所

11、显主斑点的颜色位置与供试品所显主斑点的颜色位置与对照品的主斑点相同。对照品的主斑点相同。 水溶液显氟化物的鉴别反应水溶液显氟化物的鉴别反应。 HPLC法法：供试品溶液主峰的保留时间应供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。与对照品溶液主峰的保留时间一致。 2检查试验检查试验（1）结晶性）结晶性：应符合规定。应符合规定。（2）水分）水分：卡尔卡尔-费休法费休法 含水量应在含水量应在4.76.7。（3）有关物质）有关物质：高效液相色谱法：高效液相色谱法 杂质杂质A0.3%，杂质，杂质B,C,D,E均均0.2%，其他单个杂质，其他单个杂质0.2%，各杂质，各杂质的和的和0.5%。（

12、4）溶液的澄清度与颜色）溶液的澄清度与颜色 ：比色法比色法 应澄清无色；如显色，与黄色或黄绿色应澄清无色；如显色，与黄色或黄绿色4号标准比色液比较，不得更深。号标准比色液比较，不得更深。（5）干燥失重：）干燥失重：五氧化二磷干燥法五氧化二磷干燥法 120减压干燥减压干燥6hr，减失重量，减失重量1.0%（6）)炽灼残渣：炽灼残渣：铂坩埚铂坩埚 遗留残渣不得过遗留残渣不得过0.1%。（7）重金属：）重金属： 含重金属含重金属20ppm。色谱条件色谱条件：色谱柱：色谱柱：C18柱柱流动相：流动相：0.025mol/L磷酸溶液（用三乙磷酸溶液（用三乙胺调节胺调节pH值至值至3.00.1）-乙腈（乙腈

13、（8713）检测波长：检测波长：278nm系统适用性系统适用性：环丙沙星峰与氧氟沙星峰环丙沙星峰与氧氟沙星峰和杂质和杂质I峰的分离度均应符合要求。峰的分离度均应符合要求。定量方法定量方法：外标法外标法 高效液相色谱法高效液相色谱法3含量测定含量测定（2）间接原子吸收法：）间接原子吸收法：根据环丙沙星在弱酸性介质中与雷氏盐根据环丙沙星在弱酸性介质中与雷氏盐定量生成缔合物，用原子吸收法测定沉淀中定量生成缔合物，用原子吸收法测定沉淀中的的Cr含量，间接测定环丙沙星含量。含量，间接测定环丙沙星含量。（3）紫外分光光度法：）紫外分光光度法：环丙沙星在稀盐酸中有紫外吸收的特点，环丙沙星在稀盐酸中有紫外吸收

14、的特点，用紫外分光光度法测定含量。用紫外分光光度法测定含量。 第五节第五节 吩噻嗪类药物吩噻嗪类药物一、基本结构与化学性质一、基本结构与化学性质（一）结构特点与典型药物（一）结构特点与典型药物NSRR12345678910硫氮杂蒽母核硫氮杂蒽母核NSCH2CH2CH2N(CH3)2ClHCl盐酸氯丙嗪二价二价碱性碱性NSCH2CHN(CH3)2CH3HCl盐酸异丙嗪NSClCH2CH2CH2NN CH2CH2OH奋乃静奋乃静NSCH2CH2CH2CF3NN(CH2)2OCO(CH2)8CH3癸氟奋乃静癸氟奋乃静（二）主要化学性质（二）主要化学性质 1. 1.紫外和红外吸收光谱特征紫外和红外吸收

15、光谱特征 硫氮杂蒽母核为共轭三环硫氮杂蒽母核为共轭三环系统系统 三个最大吸收峰别在：三个最大吸收峰别在：205205nmnm、254nm254nm、300nm300nm 由于由于2 2位、位、1010位上的取代基不同，可引起最大吸收峰的位移。位上的取代基不同，可引起最大吸收峰的位移。 硫氮杂蒽母核的硫氮杂蒽母核的硫硫为为二价二价，易氧化为砜和亚砜，其紫外吸，易氧化为砜和亚砜，其紫外吸 收光谱有明显不同，它们具有四个峰值。收光谱有明显不同，它们具有四个峰值。 另外，另外，取代基取代基R R和和RR的不同，则可产生不同的红外光谱的不同，则可产生不同的红外光谱2.2.易氧化呈色易氧化呈色 二价硫易氧

16、化，遇不同氧化剂如硫酸、硝酸、二价硫易氧化，遇不同氧化剂如硫酸、硝酸、 三氯化铁试液及过氧化氢等，随着取代基的不同，而呈不同三氯化铁试液及过氧化氢等，随着取代基的不同，而呈不同 的颜色。的颜色。 3.3.与金属离子络合呈色与金属离子络合呈色 本类药物中未被氧化的硫，可与本类药物中未被氧化的硫，可与钯离钯离 子子形成配位化合物，其氧化产物则无此反应。此性质可用于形成配位化合物，其氧化产物则无此反应。此性质可用于 鉴别和含量测定，并具有专属性，可消除氧化产物的干扰。鉴别和含量测定，并具有专属性，可消除氧化产物的干扰。 （一）化学法一）化学法 1. 与氧化剂的显色反应与氧化剂的显色反应 药物名称药物

17、名称 硫硫 酸酸 硝硝 酸酸 过氧化氢过氧化氢 盐酸氯丙嗪盐酸氯丙嗪 显红色显红色, , 渐变淡黄色渐变淡黄色 盐酸异丙嗪盐酸异丙嗪 显樱桃红色显樱桃红色, ,放置放置 生成红色沉淀生成红色沉淀, ,加热即溶解加热即溶解, , 后颜色渐变深后颜色渐变深 溶液由红色转变为橙黄色溶液由红色转变为橙黄色 奋乃静奋乃静 显深红色显深红色; ;放置后放置后 红色渐褪去红色渐褪去 二、鉴别试验二、鉴别试验NSRR12345678910 2. 与钯离子络合显色反应与钯离子络合显色反应 利用分子结构中未被氧化的利用分子结构中未被氧化的二价硫二价硫与金属钯离子与金属钯离子络合形成有色络合物，如与癸氟奋乃静形成红

18、色络合络合形成有色络合物，如与癸氟奋乃静形成红色络合物。物。 专属性强专属性强（二）紫外特征吸收和红外吸收光谱二）紫外特征吸收和红外吸收光谱 本类药物可用本类药物可用UV和和IR鉴别，鉴别，Ch.P中中UV鉴别实例如下：鉴别实例如下： 药物名称药物名称 溶溶 剂剂 浓度（浓度（g/mlg/ml） maxmax（nmnm） A E A E1%1%1cm1cm盐酸氯丙嗪盐酸氯丙嗪 盐酸（盐酸（9 10009 1000） 5 254 0.46 915 5 254 0.46 915 306 306 盐酸异丙嗪盐酸异丙嗪 盐酸（盐酸（0.010.01mol/Lmol/L） 6 249 883937 6

19、249 883937奋乃静奋乃静 无水乙醇无水乙醇 7 258 0.65 7 258 0.65 癸氟奋乃静癸氟奋乃静 乙醇乙醇 10 260 10 260 盐酸氟奋乃静盐酸氟奋乃静 盐酸（盐酸（9 10009 1000） 10 255 553593 10 255 553593 盐酸三氟拉嗪盐酸三氟拉嗪 盐酸（盐酸（1 201 20） 10 256 630 10 256 630盐酸硫利达嗪盐酸硫利达嗪 乙醇乙醇 8 264 8 264与与315 315 三三 检查检查n特殊杂质的检查特殊杂质的检查 二价硫易被氧化，遇光易分解二价硫易被氧化，遇光易分解 盐酸异丙嗪盐酸异丙嗪 n方法：方法：TLC法

20、法四四 含量测定含量测定 非水溶液滴定法非水溶液滴定法 原料药原料药 1010位侧链上的氮原子，显碱性，位侧链上的氮原子，显碱性， 盐酸氯丙嗪盐酸氯丙嗪 P192 P192 紫外紫外- -可见分光光度法可见分光光度法 原料药、制剂原料药、制剂 盐酸氯丙嗪片盐酸氯丙嗪片 254nm254nm最大吸收最大吸收 盐酸氯丙嗪注射液盐酸氯丙嗪注射液 306nm306nm次最大吸收次最大吸收 抗氧剂抗氧剂Vit C 254nmVit C 254nm有吸收有吸收为什么加为什么加醋酸汞？醋酸汞？一、非水溶液滴定法一、非水溶液滴定法( (一一) ) 基本原理基本原理第六节第六节 含量测定含量测定当当HAHA酸性

21、较强时，反应不能定量酸性较强时，反应不能定量完成，必须除去或降低完成，必须除去或降低HAHA的酸性，的酸性，使反应顺利地完成。使反应顺利地完成。BH+ A-+HClO4BH+ ClO4+HA游离碱类盐游离碱类盐被置换出的弱酸被置换出的弱酸因此，要根据不同情况采用相应测定条件。因此，要根据不同情况采用相应测定条件。( (二二) ) 一般方法一般方法供供试试品品+ +冰冰醋醋酸酸10ml30ml若供试品为氢卤酸盐再若供试品为氢卤酸盐再加加5%5%醋酸汞的冰醋酸液醋酸汞的冰醋酸液3ml5ml结结果果高氯酸滴定液滴定高氯酸滴定液滴定以空白以空白试验校试验校正正 ( (三三) ) 问题讨论问题讨论1.1

22、.适用范围适用范围 主要用于主要用于K Kb b1010-8-8的有机碱盐的含量测定。对碱性较弱的有机碱盐的含量测定。对碱性较弱 的杂环类药物，只要选择合适的溶剂、滴定剂和终点指示的方法，的杂环类药物，只要选择合适的溶剂、滴定剂和终点指示的方法， 可使可使pKpKb b为为8 81313的弱碱性药物采用本法滴定。的弱碱性药物采用本法滴定。 一般来说：一般来说： K Kb b为为1010-8-81010-10-10时，宜选冰醋酸作为溶剂；时，宜选冰醋酸作为溶剂；药物的药物的 K Kb b为为1010-10-101010-12-12时，宜选冰醋酸与醋酐的混合溶液；时，宜选冰醋酸与醋酐的混合溶液；

23、K Kb b1010-12-12时，应用醋酐作为溶剂。时，应用醋酐作为溶剂。 另外，另外，在冰醋酸中加入不同量的在冰醋酸中加入不同量的甲酸甲酸，也能使滴定突跃显著增，也能使滴定突跃显著增 大，使一些碱性极弱的杂环类药物获得满意测定结果大，使一些碱性极弱的杂环类药物获得满意测定结果。 2.2.酸根的影响：酸根的影响：无机酸类，在醋酸介质中的酸性以下列排序递减：无机酸类，在醋酸介质中的酸性以下列排序递减： 高氯酸氢溴酸硫酸盐酸硝酸高氯酸氢溴酸硫酸盐酸硝酸 消除消除HXHX干扰的方法：干扰的方法：加加Hg(Ac)Hg(Ac)2 2 量不足终点不明显，结果偏低。量不足终点不明显，结果偏低。 2 2BH

24、X + Hg(Ac)BHX + Hg(Ac)2 2 2BHAc + HgX 2BHAc + HgX2 2 过量过量(1(13 3倍倍) )不影响测定结果不影响测定结果3.3.滴定剂的稳定性滴定剂的稳定性 非水溶液滴定法所用的溶剂为醋酸，具有非水溶液滴定法所用的溶剂为醋酸，具有挥发性，膨胀系数较大，温度和贮存条件都影响滴定剂的浓度。挥发性，膨胀系数较大，温度和贮存条件都影响滴定剂的浓度。若滴定样品与标定若滴定样品与标定HClOHClO4 4溶液时的温度不一致，温差未超过溶液时的温度不一致，温差未超过1010时，应将高氯酸滴定液的浓度用下列公式加以校正：时，应将高氯酸滴定液的浓度用下列公式加以校正

25、： 4.4.终点指示方法终点指示方法 常用电位法和指示剂法。常用电位法和指示剂法。Ch.PCh.P收载的本类药收载的本类药物大多采用结晶紫指示剂指示终点，少数采用电位法指示终点物大多采用结晶紫指示剂指示终点，少数采用电位法指示终点。( (四四) ) 应用实例应用实例 1.1.游离弱碱性药物测定游离弱碱性药物测定 异烟肼、尼可刹米、地西泮及氯氮卓等。基于这些药物分子结异烟肼、尼可刹米、地西泮及氯氮卓等。基于这些药物分子结构中氮原子的弱碱性，可用非水溶液滴定法直接测定其含量。构中氮原子的弱碱性，可用非水溶液滴定法直接测定其含量。由于由于这些药物的碱性强弱不同，测定时所采用溶剂、指示剂及其指示终这些

26、药物的碱性强弱不同，测定时所采用溶剂、指示剂及其指示终点的方法也不尽相同。点的方法也不尽相同。 药物名称药物名称 取样量取样量( (g) g) 溶溶 剂剂 指示剂指示剂 终点颜色终点颜色 尼可刹米尼可刹米 0.15 0.15 冰醋酸冰醋酸1010ml ml 结晶紫结晶紫 蓝绿色蓝绿色 地西泮地西泮 0.2 0.2 冰醋酸、酸酐冰醋酸、酸酐1010ml ml 结晶紫结晶紫 绿色绿色 氯氮卓氯氮卓 0.3 0.3 冰醋酸冰醋酸1010ml ml 结晶紫结晶紫 蓝色蓝色 2.2.氢卤酸盐类药物测定氢卤酸盐类药物测定 当这些药物溶于冰醋酸时，由于氢卤酸在冰醋酸中酸性较强，当这些药物溶于冰醋酸时，由于氢

27、卤酸在冰醋酸中酸性较强，对测定有干扰，必须先加入过量的对测定有干扰，必须先加入过量的醋酸汞冰醋酸汞冰醋酸醋酸溶液，使其形成难溶液，使其形成难以电离的卤化汞，而氢卤酸盐药物，则转变成可测定的醋酸盐。然以电离的卤化汞，而氢卤酸盐药物，则转变成可测定的醋酸盐。然后再用高氯酸滴定液滴定，并可获得满意的结果。应用示例如下：后再用高氯酸滴定液滴定，并可获得满意的结果。应用示例如下： 药物名称药物名称 取样量取样量( (g) g) 溶溶 剂剂 加入醋酸汞试液加入醋酸汞试液( (ml) ml) 指示剂指示剂 终点颜色终点颜色 盐酸氯丙嗪盐酸氯丙嗪 0.2 0.2 醋酐醋酐1010ml 5 ml 5 橙黄橙黄

28、玫瑰红色玫瑰红色 盐酸异丙嗪盐酸异丙嗪 0.3 0.3 冰醋酸冰醋酸1010ml 4 ml 4 结晶紫结晶紫 蓝色蓝色 盐酸氟奋乃静盐酸氟奋乃静 0.3 0.3 冰醋酸冰醋酸2020ml 5 ml 5 结晶紫结晶紫 蓝绿色蓝绿色 盐酸环丙沙星盐酸环丙沙星 0.2 0.2 冰醋酸冰醋酸2525ml 5 ml 5 橙黄橙黄 粉红色粉红色 氢溴酸东莨菪碱氢溴酸东莨菪碱 0.3 0.3 冰醋酸冰醋酸2020ml 5 ml 5 结晶紫结晶紫 纯蓝色纯蓝色 盐酸硫利达嗪盐酸硫利达嗪 0.3 0.3 丙酮丙酮100100ml 5 ml 5 电位滴定法电位滴定法 3.3.硫酸盐类药物测定硫酸盐类药物测定 硫酸

29、是二元酸，在水溶液中能完成二级解离，生硫酸是二元酸，在水溶液中能完成二级解离，生成成SOSO4 42-2-，但在但在非水介质中非水介质中，只显示一元酸解离为，只显示一元酸解离为HSOHSO4 4- -，即只供给一个即只供给一个H H+ +，所以硫酸盐类药物在冰醋酸中，只所以硫酸盐类药物在冰醋酸中，只能滴定至硫酸氢盐，因此可以用高氯酸滴定液直接滴能滴定至硫酸氢盐，因此可以用高氯酸滴定液直接滴定。定。（1 1）硫酸阿托品测定：）硫酸阿托品测定：阿托品为碱性较强的阿托品为碱性较强的 一元碱一元碱药物，因而硫酸阿托品的化学结构式可以药物，因而硫酸阿托品的化学结构式可以 简写为简写为( (BHBH+ +

30、) )2 2SOSO4 42 -2 -，用高氯酸直接滴定时的反用高氯酸直接滴定时的反 应式为：应式为：( (BHBH+ +) )2 2SOSO4 42-2- + HClO + HClO4 4 (BH (BH+ +)ClO)ClO4 4- - + (BH + (BH+ +)HSO)HSO4 4- - 可根据可根据1 1molmol的硫酸阿托品消耗的硫酸阿托品消耗1 1molmol高氯酸的高氯酸的关系计算其含量关系计算其含量。（2 2）硫酸奎宁测定：）硫酸奎宁测定：奎宁为奎宁为二元碱二元碱，其中喹核碱的碱性较强，其中喹核碱的碱性较强， 可与硫酸生成盐；而喹啉环的碱性极弱，不能与硫酸成盐，而可与硫酸

31、生成盐；而喹啉环的碱性极弱，不能与硫酸成盐，而 保持游离状态。当用高氯酸直接滴定硫酸奎宁时，保持游离状态。当用高氯酸直接滴定硫酸奎宁时，1 1molmol的硫酸的硫酸 奎宁消耗奎宁消耗3 3molmol的高氯酸的高氯酸。其反应式如下：。其反应式如下： ( (C C2020H H2424N N2 2 H H+ +) )2 2SOSO4 4 + 3HClO + 3HClO4 4 (C (C2020H H2424N N2 2 2H 2H+ +)2ClO)2ClO4 4- - + (C + (C2020H H2424N N2 2 2H 2H+ +)HSO)HSO4 4- -ClOClO4 4- - C

32、h.PCh.P和和USP(24)USP(24)都采用此法测定硫酸奎宁和硫酸奎尼丁的含量。都采用此法测定硫酸奎宁和硫酸奎尼丁的含量。(3) (3) 硫酸奎宁片的测定：硫酸奎宁片的测定： 硫酸奎宁片剂碱化处理，生成奎宁游离碱，然后再用高硫酸奎宁片剂碱化处理，生成奎宁游离碱，然后再用高氯酸标准溶液直接滴定。此时氯酸标准溶液直接滴定。此时1 1摩尔的硫酸奎宁摩尔的硫酸奎宁可可消耗消耗4 4摩尔摩尔的的高氯酸高氯酸，因此片剂分析的滴定度与原料药分析的滴定度不，因此片剂分析的滴定度与原料药分析的滴定度不同。同。 4.4.硝酸盐的测定硝酸盐的测定 硝酸在冰醋酸介质中酸性不强，滴定反应可以进行完全。硝酸在冰醋

33、酸介质中酸性不强，滴定反应可以进行完全。但是硝酸具有氧化性可以破坏指示剂使其变色，使指示剂无但是硝酸具有氧化性可以破坏指示剂使其变色，使指示剂无法指示终点。因此采用非水溶液滴定法测定硝酸盐时，一般法指示终点。因此采用非水溶液滴定法测定硝酸盐时，一般不用指示剂法而不用指示剂法而用电位法指示终点用电位法指示终点。5.5.磷酸盐与有机酸盐磷酸盐与有机酸盐 磷酸与有机酸在冰醋酸介质中酸性极弱，不磷酸与有机酸在冰醋酸介质中酸性极弱，不影响滴定反应的定量完成，可以按常规方法直接影响滴定反应的定量完成，可以按常规方法直接滴定滴定。（一）硝苯地平的测定（一）硝苯地平的测定 基本原理基本原理 硝苯地平的测定原理

34、，可用下列反应式表示：硝苯地平的测定原理，可用下列反应式表示： 终点时终点时: :微过量的微过量的CeCe4+4+将指示剂中的将指示剂中的FeFe2+2+氧化成氧化成FeFe3+3+，使使 橙红色配合物离子呈淡蓝色或无色，以指示终橙红色配合物离子呈淡蓝色或无色，以指示终 点的到达。点的到达。+ 2Ce(SO4)2OCH3CH3H3COCO2CH3NO2NHNNO2CO2CH3H3COCH3CH3O+ 6HClO4+ 2Ce(ClO4)3 + 4H2SO4二、铈量法二、铈量法二氢吡啶类二氢吡啶类（二）吩噻嗪类药物的测定（二）吩噻嗪类药物的测定药物药物Ce(SO4), -e红色红色Ce(SO4),

35、 -2e红色消退红色消退自身指示终点或电位法、永停法指示终点自身指示终点或电位法、永停法指示终点二、铈量法二、铈量法(一）酸性染料比色法一）酸性染料比色法 1.1.基本原理基本原理 三、比色法三、比色法有机相(BH+ In-)水相(BH+ In-)+HIn H+ In-+B H+ BH+ 2. 2. 影响因素影响因素 (1) (1) 水相最佳水相最佳pHpH值的选择：值的选择：本法中水相的本法中水相的pHpH应使有机碱性药应使有机碱性药物均成阳离子物均成阳离子( (BHBH+)+)，而酸性染料应电离足够的阴离子而酸性染料应电离足够的阴离子( (InIn - -),),阴阳阴阳离子才能定量生成离

36、子对，并完全溶于有机溶剂中，而过量的染料离子才能定量生成离子对，并完全溶于有机溶剂中，而过量的染料完全保留在水相中，才能保证定量的测定。完全保留在水相中，才能保证定量的测定。 (2) (2) 酸性染料及其浓度：酸性染料及其浓度：常用酸性染料有溴麝香草酚蓝、甲常用酸性染料有溴麝香草酚蓝、甲基橙、溴甲酚绿等。酸性染料浓度，对测定影响不大，有足够量即基橙、溴甲酚绿等。酸性染料浓度，对测定影响不大，有足够量即可。可。 (3) (3) 有机溶剂的选择有机溶剂的选择 有机碱药物应对离子对提取率高，不与有机碱药物应对离子对提取率高，不与 水混溶，或能与离子对形成氢键的有机溶剂。常用的有机溶水混溶，或能与离子

37、对形成氢键的有机溶剂。常用的有机溶 剂有氯仿、二氯甲烷、二氯乙烯、苯、甲苯、四氯化碳等。剂有氯仿、二氯甲烷、二氯乙烯、苯、甲苯、四氯化碳等。(4)(4)水分的影响：水分的影响：严防水分混入有机溶剂中，水相中过量有色严防水分混入有机溶剂中，水相中过量有色 酸性染料，而影响测定结果；水分的混入使氯仿混浊，而影酸性染料，而影响测定结果；水分的混入使氯仿混浊，而影 响比色测定。一般加入脱水剂，或滤纸过滤的方法，除去混响比色测定。一般加入脱水剂，或滤纸过滤的方法，除去混 入的水分。入的水分。 3. 3. 应用示例应用示例 Ch.PCh.P中硫酸阿托品片、氢溴酸东莨菪中硫酸阿托品片、氢溴酸东莨菪碱片和氢溴

38、酸山莨菪碱片等，采用本法测碱片和氢溴酸山莨菪碱片等，采用本法测定含量测定。定含量测定。（二）钯离子比色法（二）钯离子比色法优点：优点： 钯离子比色法可选择性地用于未被氧化的钯离子比色法可选择性地用于未被氧化的吩噻嗪类药物的测定。吩噻嗪类药物的测定。 max500nm吩噻嗪类药物吩噻嗪类药物 + + PdPd2+2+pH20.1红色络合物红色络合物在在 max处测定处测定A A，以对照法定量以对照法定量（一）直接分光光度法（一）直接分光光度法 供试品不需提取分离，溶于适当的溶剂中即可进行含量测定。供试品不需提取分离，溶于适当的溶剂中即可进行含量测定。 1.1.奥沙西泮原料的测定奥沙西泮原料的测定

39、 在在229229nmnm，采用标准对照法测定。采用标准对照法测定。 2.2.盐酸异丙嗪片的测定盐酸异丙嗪片的测定 在在249249nmnm，采用采用E E1cm1cm1%1%910910测定。测定。 3.3.盐酸异丙嗪注射液的测定盐酸异丙嗪注射液的测定 测定波长的选择：测定波长的选择：注射液处方加注射液处方加V VC C作抗氧剂，可还原异丙嗪红作抗氧剂，可还原异丙嗪红 色氧化产物，从而防止异丙嗪氧化变色。色氧化产物，从而防止异丙嗪氧化变色。V VC C在盐酸异丙嗪最大在盐酸异丙嗪最大 吸收波长吸收波长249249nmnm处有吸收，干扰注测定。因此选用处有吸收，干扰注测定。因此选用299299

40、nmnm波长测波长测 定盐酸异丙嗪注射液的含量时，维生素定盐酸异丙嗪注射液的含量时，维生素C C在此波长处则不产生干在此波长处则不产生干 扰扰, ,但但E E1cm1cm1%1% 108108 。四、紫外分光光度法四、紫外分光光度法( (二二) )萃取后分光光度法萃取后分光光度法盐酸氯丙嗪注射液盐酸氯丙嗪注射液盐酸氯丙嗪盐酸氯丙嗪氨水碱化氨水碱化氯丙嗪氯丙嗪乙醚提取乙醚提取乙醚层乙醚层盐酸提取盐酸提取盐酸氯丙嗪盐酸氯丙嗪 maxmax2542541nm1nm处测定处测定A A， E E1cm1cm1%1% 915915（三）萃取（三）萃取- -双波长分光光度法双波长分光光度法 本法是本法是US

41、PUSP（2424）收载的方法，用于盐酸氯丙嗪注射液的收载的方法，用于盐酸氯丙嗪注射液的含量测定，主要用来校正样品中氧化物对测定的干扰。含量测定，主要用来校正样品中氧化物对测定的干扰。测定原理测定原理 利用氯丙嗪的最利用氯丙嗪的最maxmax为为254254nmnm，其氧化物在此波长也其氧化物在此波长也有吸收，同时在有吸收，同时在277277nmnm氧化物也有吸收，且其氧化物也有吸收，且其A A254254=A=A277277. .而氯丙嗪而氯丙嗪在此波长无吸收。因此，可由两波长处测得在此波长无吸收。因此，可由两波长处测得A A计算氯丙嗪含量。计算氯丙嗪含量。abbaaababababaCAA

42、AlCAAAAAAAAA )()()(212121221121（四）二阶导数分光光度法（四）二阶导数分光光度法 盐酸氯丙嗪注射液盐酸氯丙嗪注射液 抗氧剂维生素抗氧剂维生素C的二阶导数光谱近似为接近基线的一的二阶导数光谱近似为接近基线的一条直线，不干扰盐酸氯丙嗪的测定。因此盐酸氯丙嗪可从条直线，不干扰盐酸氯丙嗪的测定。因此盐酸氯丙嗪可从其二阶导数光谱量取峰其二阶导数光谱量取峰266nm谷谷254nm距离，标准曲线法定距离，标准曲线法定量量 其测定方法如下：其测定方法如下： 1.1.光谱绘制光谱绘制 测绘条件：测绘条件： 波长范围为波长范围为200200nmnm320nm320nm；狭缝为狭缝为1

43、212nmnm；纸速为纸速为120120mm/minmm/min。2.2.线性关系线性关系 精取盐酸氯丙嗪对照液精取盐酸氯丙嗪对照液(50(50g/ml)g/ml)制得标准系列，以制得标准系列，以 HCI(0.1mol/L) HCI(0.1mol/L)为空白，按光谱绘制项下分别测定。用尺量取不为空白，按光谱绘制项下分别测定。用尺量取不 同浓度系列溶液光谱同浓度系列溶液光谱266266nmnm- -谷谷254254nmnm距离（距离（D DL L），），并以峰谷距离为纵并以峰谷距离为纵 坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。3.3.供试品测定供试品测定 精密量取盐酸

44、氯丙嗪注射液精密量取盐酸氯丙嗪注射液2.02.0mlml，按光谱绘制项按光谱绘制项 下的方法，测得二阶导数光谱，量取光谱峰下的方法，测得二阶导数光谱，量取光谱峰- -谷谷(266(266nmnm254nm)254nm) 距离，从标准曲线上求出浓度，计算百分含量。距离，从标准曲线上求出浓度，计算百分含量。五、气相色谱法五、气相色谱法（一）硫酸阿托品片的含量测定（一）硫酸阿托品片的含量测定 USP(24)USP(24)采用的方法。采用的方法。以后马托品作为内标以后马托品作为内标, 采用标准对照采用标准对照法。法。 测定方法测定方法 (1)(1)内标溶液的制备：内标溶液的制备： (2) (2)供试品

45、溶液与对照品溶液的制备：供试品溶液与对照品溶液的制备： (3) (3)色谱系统：色谱系统：色谱柱为色谱柱为1.81.8m m2mm2mm的玻璃柱；担体为与碳酸的玻璃柱；担体为与碳酸 钠混合于钠混合于900900熔融后，经酸和碱处理的硅烷化藻土；固定熔融后，经酸和碱处理的硅烷化藻土；固定 相为相为3%3%的的OV-17OV-17（即即50%50%甲基，甲基，50%50%苯基的聚硅氧烷）；载气苯基的聚硅氧烷）；载气 为氮气，流速为为氮气，流速为2525ml/minml/min；检测器为氢火焰离子化检测器。检测器为氢火焰离子化检测器。 (4)(4)系统适用性试验：系统适用性试验：取对照品溶液取对照品

46、溶液1 1ll，进样进样6 6次，所得的对次，所得的对 照品和内标峰面积之比的照品和内标峰面积之比的RSDRSD不大于不大于2.0%2.0%；对照品峰和内标峰的；对照品峰和内标峰的 分辨率分辨率R Rs s4.04.0；T T2.02.0。 (5)(5)测定方法：测定方法：取供试液和对照液各进样取供试液和对照液各进样1l1l，记录各峰面积，记录各峰面积， 用下式计算所取片粉中硫酸阿托品用下式计算所取片粉中硫酸阿托品(C C1717H H2323NONO3 3) )2 2HH2 2SOSO4 4HH2 2OO的的 重量重量: :(C C1717H H2323NONO3 3) )2 2HH2 2S

47、OSO4 4HH2 2OO的重的重( (mg)=(694.85/676.83)(mg)=(694.85/676.83)(W W/10)(/10)(R Ru u/ /R Rs s) )（二）人血浆中硝苯地平的气相色谱法测定及药代动力（二）人血浆中硝苯地平的气相色谱法测定及药代动力 学研究学研究 (一一) 反相高效液相色谱法反相高效液相色谱法 1.1.地西泮注射液的反相地西泮注射液的反相HPLCHPLC法法 地西泮注射液曾用萃取后分光光地西泮注射液曾用萃取后分光光 度法测定含量，因萃取不完全，及有关物质和分解产物等对测度法测定含量，因萃取不完全，及有关物质和分解产物等对测 定有干扰，故中国药典自定

48、有干扰，故中国药典自19951995版改用版改用HPLCHPLC法。此法操作简便，法。此法操作简便， 可消除干扰。注射液中地西泮的平均回收率为可消除干扰。注射液中地西泮的平均回收率为99.4%99.4%，相对标，相对标 准偏差为准偏差为0.8%0.8%。(1)(1)色谱条件与系统适用性试验：色谱条件与系统适用性试验：ODSCODSC1818；流动相为甲醇流动相为甲醇- -水水(70:30) (70:30) ；检测波长为；检测波长为254254nm nm 。n n15001500，R R1.51.5。 (2)(2)内标溶液的制备：内标溶液的制备：取萘取萘5050mgmg，置置2525mlml量瓶

49、中，加甲醇溶解量瓶中，加甲醇溶解 并稀释至刻度，摇匀，即得。并稀释至刻度，摇匀，即得。六、高效液相色谱法六、高效液相色谱法 (3)(3)测定方法：测定方法：取地西泮对照品约取地西泮对照品约2525mgmg，精密称定，置精密称定，置2525mlml量量 瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取该溶液与瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取该溶液与 内标溶液各内标溶液各5 5mlml，置置2525mlml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。 吸取吸取5 5ll10l10l进样，记录色谱图；另取本品适量进样，记录色谱图；另取本品适量( (约相当约相当 于地西泮于地西泮5 5mgmg），），同法测定，按内标法以峰面积计算，即得。同法测定，按内标法以峰面积计算，即得。2.2.高效液相色谱法测定硫酸阿托品片的含量高效液相色谱法测定硫酸阿托品片的含量 色谱条件色谱条件: :色谱柱为色谱柱为SpherisorbCSpherisorbC1818 5m 5m 流动相为流动相为0.0250.025mol/Lmol/L 磷酸磷酸( (三乙胺调三乙胺调pHpH为为3.0)-3.0)-乙腈乙腈(80:20)(80:20)；柱温为；柱温为3030；检测波；检测波 长为长为215215nmnm；n=n=588058