最终灭菌无菌药品生产管理与质量控制

1、最终灭菌无菌药品生最终灭菌无菌药品生产管理与质量控制产管理与质量控制 蚌埠市食品药品监督管理局蚌埠市食品药品监督管理局宫文武宫文武v一、微生物知识一、微生物知识-什么是微生物什么是微生物v二、无菌的基本概念二、无菌的基本概念-什么是无菌什么是无菌v三、无菌保证要素三、无菌保证要素-如何实现产品无菌如何实现产品无菌 微生物知识微生物知识-什么是细菌什么是细菌微生物知识微生物知识v什么是微生物什么是微生物v微生物（微生物（microorganism, microbemicroorganism, microbe）是一些肉眼看）是一些肉眼看不见的微小生物的总称。包括属于原核类的不见的微小生物的总称。包

2、括属于原核类的细菌细菌、放线菌、支原体、立克次氏体、衣原体和蓝细菌放线菌、支原体、立克次氏体、衣原体和蓝细菌（过去称蓝藻或蓝绿藻），属于真核类的（过去称蓝藻或蓝绿藻），属于真核类的真菌真菌（酵（酵母菌和霉菌）、原生动物和显微藻类，以及属于非母菌和霉菌）、原生动物和显微藻类，以及属于非细胞类的病毒、类病毒和朊病毒等。细胞类的病毒、类病毒和朊病毒等。微生物知识微生物知识v 微生物在地球上几乎无处不有，无孔不入，人微生物在地球上几乎无处不有，无孔不入，人的皮肤上，口腔，肠道里都有许多微生物。任意取的皮肤上，口腔，肠道里都有许多微生物。任意取一把土或一粒土，就是一个微生物世界，在肥沃的一把土或一粒土，

3、就是一个微生物世界，在肥沃的土壤中，每克土含有土壤中，每克土含有2020亿个微生物，即使是贫瘠的亿个微生物，即使是贫瘠的土壤，每克土中也含有土壤，每克土中也含有3 35 5亿个微生物。空气里悬亿个微生物。空气里悬浮着无数细小的尘埃和水滴，它们是微生物在空气浮着无数细小的尘埃和水滴，它们是微生物在空气中的藏身之地。哪里尘埃多，哪里的微生物就多。中的藏身之地。哪里尘埃多，哪里的微生物就多。微生物知识微生物知识v微生物按其结构、化学组成及生活习性等分为三大微生物按其结构、化学组成及生活习性等分为三大类：类：v原核细胞型：细菌、放线菌、支原体、衣原体、立原核细胞型：细菌、放线菌、支原体、衣原体、立克次

4、氏体、螺旋体等克次氏体、螺旋体等v真核细胞型：真菌真核细胞型：真菌v非细胞型：病毒非细胞型：病毒 噬菌体噬菌体真菌和细菌真菌和细菌大小大小真菌真菌 5 m 50 m细菌细菌 0.5 5 m主要成员主要成员酵母、霉菌酵母、霉菌细菌细菌细胞组成细胞组成酵母是单细胞，其它为多细胞酵母是单细胞，其它为多细胞均为单细胞均为单细胞细胞质细胞质成份成份遗传物质遗传物质(dna)被双层核膜包裹被双层核膜包裹(真真核核)，并且还有如线粒体、叶绿体及，并且还有如线粒体、叶绿体及高卡基体等被膜包裹的细胞器。高卡基体等被膜包裹的细胞器。遗传物质遗传物质(dna)祼露并游离于细胞质祼露并游离于细胞质内内(原核原核)，并

5、且不含有其它有膜细胞，并且不含有其它有膜细胞器。器。繁殖方式繁殖方式有性（如大型真菌或无性如酵母），有性（如大型真菌或无性如酵母），霉菌则二者兼有霉菌则二者兼有无性（裂殖）无性（裂殖）孢子孢子霉菌产生分生孢子（生长繁殖，类似霉菌产生分生孢子（生长繁殖，类似于植物的种子于植物的种子)，虽不耐热，但会飘，虽不耐热，但会飘浮于空气中而难以消除。浮于空气中而难以消除。酵母不会产生孢子。酵母不会产生孢子。主要只有两个属产生孢子（内生孢主要只有两个属产生孢子（内生孢子），又名芽孢：子），又名芽孢：bacillus-芽孢杆菌属和芽孢杆菌属和clostridium-梭菌属梭菌属 ，细菌芽孢属于，细菌芽孢属于休

6、眠体，一个细菌细胞产生一个芽孢休眠体，一个细菌细胞产生一个芽孢生长条件生长条件20-25oc, 3-5天天30-35 oc, 1-2天天杀灭程度杀灭程度不耐热，但难用消毒剂消毒（因孢子不耐热，但难用消毒剂消毒（因孢子处于漂浮状态）处于漂浮状态）生长态菌不耐热（极个别除外），但生长态菌不耐热（极个别除外），但形成芽孢后耐热。形成芽孢后耐热。 芽孢杆菌（细菌）蜡样芽孢杆菌（细菌）根霉（rhizopus)是种真菌，属于接合菌。能产生无性孢子菌丝体的直径约12 um黑的是孢子囊 青霉是种真菌，属于子囊菌。有的能产生青霉素，救了无数人的命。产生无性孢子。 粘质沙雷氏菌的菌落特征 沙门氏菌的菌落特征 铜绿

7、假单孢菌的菌落特征 弗氏志贺氏菌的菌落特征 粘质沙雷氏菌的菌落特征 微生物生存的环境微生物生存的环境g+g-微生物无处不在微生物无处不在气源性微生物气源性微生物革兰氏阳性菌革兰氏阳性菌较多较多它们可形成芽孢，难以杀灭它们可形成芽孢，难以杀灭因此，药品生产需要因此，药品生产需要hvachvac水源性则水源性则革兰氏阴性菌革兰氏阴性菌居多居多不会生成孢子不会生成孢子但会形成细菌内毒素但会形成细菌内毒素耐热性差耐热性差微生物知识微生物知识v将植物比喻微生物，不恰当而直观将植物比喻微生物，不恰当而直观v如玉米，发芽如玉米，发芽 生长生长 种子，前二种相当于微生物的生长种子，前二种相当于微生物的生长状态

8、，到了种子，对环境的（水分、温度等）耐受性大大增状态，到了种子，对环境的（水分、温度等）耐受性大大增强强v然而，微生物的芽孢，并不是繁殖的手段，而是休眠体，植然而，微生物的芽孢，并不是繁殖的手段，而是休眠体，植物没有这种相对应的东西物没有这种相对应的东西v革兰氏阳性菌：气源性，身体上部，呼吸道革兰氏阳性菌：气源性，身体上部，呼吸道v革兰氏阴性菌：则是水源性的，细胞结构不同革兰氏阴性菌：则是水源性的，细胞结构不同v生物指示剂均为革兰氏阳性菌，灭菌用生物指示剂均为革兰氏阳性菌，灭菌用bibi为非致病菌。为非致病菌。成熟芽孢孢子壁母细胞孢子壁的形成生长态细胞内生孢子内生孢子产生于产生于 gram+

9、细菌细菌: 芽孢杆菌属芽孢杆菌属bacillus 梭菌属梭菌属clostridium仅含核酸及少量萌发必需物仅含核酸及少量萌发必需物皮层含皮层含dpa和和ca2+复合物复合物能抵御各种恶劣环境能抵御各种恶劣环境可休眠上百万年可休眠上百万年真菌孢子因不具上述特性真菌孢子因不具上述特性而不耐热而不耐热dpa：吡啶二羧酸：吡啶二羧酸细菌芽胞（孢）的形成及其特性细菌芽胞（孢）的形成及其特性芽孢的特点芽孢的特点v耐热耐热u80 80 下长期存活下长期存活u100 100 下有相当高的存活率下有相当高的存活率u100 100 以上死亡过程符合一级动力学方程以上死亡过程符合一级动力学方程v影响芽孢耐热性的因

10、素影响芽孢耐热性的因素芽孢存在的介质芽孢存在的介质受热时的湿度受热时的湿度无菌的基本概念无菌的基本概念-什么是无菌什么是无菌最终灭菌方法生产的无菌药品概述最终灭菌方法生产的无菌药品概述什么是无菌什么是无菌? ?“无菌无菌”的理论定义的理论定义v完全无生物存在完全无生物存在v绝对条件绝对条件“无菌无菌”的实际定义的实际定义v经生长和繁殖证明无生物经生长和繁殖证明无生物v普遍接受的标准是，灭菌后，最终灭菌注射剂或其它关普遍接受的标准是，灭菌后，最终灭菌注射剂或其它关键设备微生物存活的概率达到键设备微生物存活的概率达到1010-6-6，即保证一百万个已灭菌，即保证一百万个已灭菌物品或制剂中存活的微生

11、物数低于一。物品或制剂中存活的微生物数低于一。灭菌和消毒v 灭菌灭菌使达到无菌状态的方法（使达到无菌状态的方法（gmpgmp指南）。用物理或指南）。用物理或化学方法杀灭传播媒介上所有的微生物，使其达到无菌化学方法杀灭传播媒介上所有的微生物，使其达到无菌（gbgb）。通常是指杀灭或除去全部活的微生物（包括繁殖体）。通常是指杀灭或除去全部活的微生物（包括繁殖体和芽孢）。和芽孢）。v 消毒消毒用物理或化学方法杀灭或清除传播媒介上的病原用物理或化学方法杀灭或清除传播媒介上的病原微生物，使其达到无害化（微生物，使其达到无害化（gbgb）。通常是指杀死病原微生物）。通常是指杀死病原微生物的繁殖体，但不能破

12、坏其芽孢。所以消毒是不彻底的，不能的繁殖体，但不能破坏其芽孢。所以消毒是不彻底的，不能代替灭菌。代替灭菌。最终灭菌产品的无菌标准最终灭菌产品的无菌标准vfdafda在在“最终灭菌产品参数放行最终灭菌产品参数放行”文件中要求文件中要求v将产品中的污染菌降至一个菌以下，并在此基础上使产将产品中的污染菌降至一个菌以下，并在此基础上使产品的无菌安全系数再增加六个对数单位品的无菌安全系数再增加六个对数单位vuspusp、欧洲药典、欧洲药典、bpbp及中国药典现行版：及中国药典现行版：v最终湿热灭菌水针剂的标准灭菌条件是最终湿热灭菌水针剂的标准灭菌条件是1211512115分钟。分钟。也可用采用其它温度及

13、时间参数，只要能有效地证明也可用采用其它温度及时间参数，只要能有效地证明所所采用的工艺和监控措施应能确保无菌保证水平小于采用的工艺和监控措施应能确保无菌保证水平小于1010-6-6。最终灭菌无菌药品灭菌方式的选择最终灭菌无菌药品灭菌方式的选择湿热灭菌是首选的灭菌方法湿热灭菌是首选的灭菌方法v按产品热稳定性差分为二种：按产品热稳定性差分为二种： 过度杀灭法；过度杀灭法； 存活概率法。存活概率法。v合格标准合格标准 灭菌后产品均应至少达到百万分之一的无菌保证水平。灭菌后产品均应至少达到百万分之一的无菌保证水平。v不能在不能在100100以上灭菌时，注意：以上灭菌时，注意： 强化环境控制，可能时灌装

14、环境达到（）；强化环境控制，可能时灌装环境达到（）； 对设备容器具灭菌；对设备容器具灭菌； 药液除菌过滤；药液除菌过滤； 可能条件下采用巴氏消毒。可能条件下采用巴氏消毒。不同灭菌工艺的无菌保证能力不同灭菌工艺的无菌保证能力重点关注水溶液产品灭菌工艺的符合性重点关注水溶液产品灭菌工艺的符合性最终灭菌产品最终灭菌产品“无菌无菌”标准及概念标准及概念无菌的量化标准应当可以用试验来证明的，无菌的量化标准应当可以用试验来证明的，“每每批产品中，污染品的数量不得超过一百万分之一批产品中，污染品的数量不得超过一百万分之一”，因此，不可能用那么多产品进行无菌检查来证明是因此，不可能用那么多产品进行无菌检查来证

15、明是否达到标准。否达到标准。v然而，每瓶产品微生物存活的概率可通过计算然而，每瓶产品微生物存活的概率可通过计算获得。获得。v这就需要测试微生物耐热参数这就需要测试微生物耐热参数d d值，使用对值，使用对数规则，并用生物指示剂试验来证实。数规则，并用生物指示剂试验来证实。v量化指标量化指标+ + 计算计算+ + 试验，使技术无菌标准成为试验，使技术无菌标准成为工业界可执行的标准工业界可执行的标准无菌概念的理解无菌概念的理解v某产品批量为某产品批量为1 1万瓶，万瓶，10ml10ml安瓿，每瓶安瓿，每瓶10001000个孢子，个孢子，d121=1d121=1分钟，不同灭菌时间下的结果？分钟，不同灭

16、菌时间下的结果？v 灭菌灭菌3 3分钟，分钟，从批看，所有产品有菌，从批看，所有产品有菌，100%100%污染。从每一瓶看，有污染。从每一瓶看，有1 1个个菌，二者等同；菌，二者等同；v灭菌灭菌4 4分钟，分钟，从批看，批产品孢子总数为从批看，批产品孢子总数为10001000个，有一瓶应是无菌个，有一瓶应是无菌的，污染概率的，污染概率10-110-1。从每瓶看，也是。从每瓶看，也是10-110-1。v灭菌灭菌6 6分钟时，分钟时，从整批看，还有从整批看，还有1010个菌，分布在个菌，分布在1010瓶中，污染品为瓶中，污染品为1010，因批量为一万，污染概率为千分之一。从每瓶看，二者等同；，因批

17、量为一万，污染概率为千分之一。从每瓶看，二者等同；v灭菌灭菌8 8分钟时，分钟时，从整批看，根据计算还有十分之一个菌，分布在一从整批看，根据计算还有十分之一个菌，分布在一万瓶中，污染概率为十万分之一。从每瓶看，二者等同；万瓶中，污染概率为十万分之一。从每瓶看，二者等同；v“每批产品中，污染品的数量不得超过一百万分之一每批产品中，污染品的数量不得超过一百万分之一”或或“一瓶产一瓶产品中微生物存活的概率低于百万分之一品中微生物存活的概率低于百万分之一”，v这二种提法只是无菌合格标准的不同表述方式。这二种提法只是无菌合格标准的不同表述方式。无菌概念的理解无菌概念的理解无菌保证值与无菌保证值与fo、d

18、值及带菌量的关系值及带菌量的关系sal f0/d lgn0假定假定d121为为1lgn2345-2-3-41-5-6-10生产中生产中fo=8示意示意过度杀灭示意过度杀灭示意芽孢的耐热参数：芽孢的耐热参数：d值值lgnlgnt t1 12 23 34 4t t1 1t t2 2d dv指一定温度下将微指一定温度下将微生物杀灭生物杀灭9090 或下或下降一个对数单位所降一个对数单位所需要的时间。需要的时间。灭菌温度对灭菌温度对d值的影响值的影响115121125lgntlgn=1d125d121d115灭菌温度低时，达到同一灭菌效果的时间就长灭菌温度低时，达到同一灭菌效果的时间就长f0值：达到同

19、一灭菌效果的概念值：达到同一灭菌效果的概念lgntlgnolgnt121117lgnftfof0值即标准灭菌时间值即标准灭菌时间指产品在灭菌过程中获得的与标准参照条指产品在灭菌过程中获得的与标准参照条件（件（121）相同灭菌效果的曝热时间）相同灭菌效果的曝热时间菌温度系数-z值v使d d值变更一个对数单位灭菌温度需升高或下降的度数；v实测细菌孢子的z z值在8-128-12之间，但计算灭菌率时，z z通常取1010；在干热灭菌计算中，z z通常取2020；v物理意义：z z大时，用升高温度的办法来改善灭菌效果时，收效不明显。不同灭菌温度下的灭菌率不同灭菌温度下的灭菌率灭菌温度灭菌温度 灭菌率灭

20、菌率l1000.0081050.0251120.1261150.2511160.3161180.5011200.7941211.0001221.251231.59n灭菌率：为达到与某一温灭菌率：为达到与某一温度下灭菌度下灭菌1分钟相同的灭菌分钟相同的灭菌效果，在效果，在121下灭菌所需下灭菌所需要的灭菌时间要的灭菌时间 n100灭菌时灭菌时1分钟，相当分钟，相当于于121 灭菌灭菌0.008分钟，分钟，即即fo值为值为0.008分钟。分钟。n105灭菌灭菌40分钟时，分钟时，fo约为约为 1分钟，能使分钟，能使d值为值为1分钟的芽孢数量下降分钟的芽孢数量下降1个对个对数单位数单位无菌检查的局限

21、性无菌检查的局限性v历史的教训历史的教训：19621962年，美国年，美国fdafda颁布第一部颁布第一部gmpgmp1970-19751970-1975年，美国输液污染至败血症年，美国输液污染至败血症400400多起多起 -有问题的产品全部通过了无菌检查有问题的产品全部通过了无菌检查v19731973年的英国药典和年的英国药典和19801980年年uspusp增补版提到了无菌增补版提到了无菌的量化标准的量化标准 vfofo不小于不小于8 8分钟分钟, ,经灭菌后，产品中污染菌存活的概经灭菌后，产品中污染菌存活的概率不大于百万分之一。率不大于百万分之一。v中国药典在中国药典在20002000版

22、起，收载了此标准。版起，收载了此标准。无菌检查的局限性无菌检查的局限性v无菌的定义理论上：无菌没有任何活的微生物实际上：我们无法证明产品中没有活微生物存在v无法对整批产品进行100%检验无菌检验的结果只是一个基于“可能性”的判断v无菌检验用培养基有其局限性只进行细菌和真菌的检验对实验结果的判定是基于“是否在培养基中生长”培养条件（如温度和时间）是有限的v我们的工作环境及操作是在相对无菌的状态无菌检查的局限性无菌检查的局限性v试验目的：不合格的可能性试验目的：不合格的可能性(%)(%)v试验批量：试验批量：60,00060,000支支v试验方法：按无菌测试方法试验方法：按无菌测试方法真实的不合格

23、率测试20支样品不合格的可能性测试40支样品不合格的可能性118.2%33.1%564.2%87.2%1596.1%99.8%3099.9%100.0%灭菌工艺与灭菌前微生物控制的关系灭菌工艺与灭菌前微生物控制的关系无菌保证要素无菌保证要素-如何实现产品无菌如何实现产品无菌最终灭菌药品生产中微生物污染控制工艺生产中微生物污染控制重点关注内容药品生产管理和质量控制的主要内容药品生产管理和质量控制的主要内容v人员管理人员管理; ; v 生产工艺管理（技术、流程、设备）；生产工艺管理（技术、流程、设备）；v空气净化、环境管理；空气净化、环境管理；v 制药工艺用水管理。制药工艺用水管理。一、人员的管理

24、v人是洁净室最大的污染源，占90%左右。一般男性每人每分钟向周围排放1000个以上的含菌粒子，女性为750个以上。穿无菌服时，静止时的发菌量为10300个/min，一般活动时发菌量为1501000个/min，行走时发菌量为9002500个/min。咳嗽一次发菌量为70700个/min，喷嚏一次为400060000个/min。所以在洁净室中，人的数量和活动应有特别严格的限制。人员的管理v人是最大的污染源v坐着不动能产生坐着不动能产生v100,000个颗粒个颗粒人员的管理走能产生走能产生5,000,000个颗粒个颗粒人员的管理跑能产生跑能产生15,000,00015,000,000个颗粒个颗粒人员

25、的管理人体携带的微生物人体携带的微生物根据卫生情况不同根据卫生情况不同因人而异因人而异人员的管理人体内外表面人体内外表面广泛存在微生物广泛存在微生物人员的管理难以觉察的难以觉察的口腔微滴口腔微滴人员的管理和培训v 为降低微生物、微粒和热原污染的风险，无菌药品的生产为降低微生物、微粒和热原污染的风险，无菌药品的生产应有各种特殊要求。这在很大程度上取决于生产人员的技能、应有各种特殊要求。这在很大程度上取决于生产人员的技能、所接受的培训及其工作态度。所接受的培训及其工作态度。v人员除必要的着装、清洁和消毒措施以外，还应特别注意，人员除必要的着装、清洁和消毒措施以外，还应特别注意，不应裸手接触任何已清

26、洁的产品容器，或已灭菌的过滤器、不应裸手接触任何已清洁的产品容器，或已灭菌的过滤器、灌装器具等与产品接触的部位。灌装器具等与产品接触的部位。洁净区更衣头发应完全包在帽子内头发应完全包在帽子内洁净区更衣工作服的纽扣应完全扣上工作服的纽扣应完全扣上洁净区更衣鞋套不能有破损鞋套不能有破损洁净区更衣不能配戴手表、首饰不能配戴手表、首饰无菌工作服的穿着v穿着的顺序由上而下v穿着要领尽可能不要直接接触无菌服的外表面无菌工作服的穿着面罩敞开面罩敞开无菌工作服的穿着手套尺寸不对戴法不正确手套尺寸不对戴法不正确无菌工作服的穿着手套破损手套破损无菌工作服的穿着鞋套穿戴不正确10,000 级洁净区更衣参考程序工作服

27、管理清洗、整理与灭菌无菌工作服的微生物控制污染产品风险大处需取样污染产品风险大处需取样衣服袖管取样示意衣服袖管取样示意衣服胸部取样示意衣服胸部取样示意背部不需要取样背部不需要取样无菌工作服的微生物控制手指接触碟试验手指接触碟试验无菌操作不要在更衣室交谈不要在更衣室交谈无菌操作不操作时，应将前臂和双手放在前面，不操作时，应将前臂和双手放在前面，身体不能斜靠身体不能斜靠无菌操作无菌操作定时或在任何关键操作前，应消毒手套无菌操作填写批记录后，手套应消毒无菌操作关键操作过程中关键操作过程中不要拣地上的东西不要拣地上的东西无菌操作层流下的操作台应始终保持干净整洁二、生产工艺管理（技术、流程、设备）v湿热

28、灭菌的基本要求v了解药品灭菌柜容量计算，理论批次量和实际的生产批量，考虑一天生产多个批号或一批需多次灭菌时，如何处理？灭菌柜应有自动监测和记录装置。自动监测记录应纳入批生产记录；v灭菌设备升温、降温速度符合生产工艺要求。能够适应于生产工艺的不同功能要求；湿热灭菌程序的验证v湿热灭菌设备应具有进行热均匀性验证并符合要求的必要条件；v灭菌程序验证应有热分布(灭菌设备空载无负荷热分布试验)、热穿透(负载热分布试验)和细菌挑战的三个必要的试验，且试验结果符合工艺生产要求；v对灭菌设备构造、其组成部分功能、辅助系统的概述( (包括生产商和型号) )。设备运行控制系统、记录系统的功能等v所使用的灭菌方式(

29、 (如饱和蒸汽、水浴、水喷淋式等) )；v灭菌的工艺参数和运行标准( (如温度、压力、时间、最大及最小f0f0值等) )；湿热灭菌程序的验证v待灭菌物的装载情况( (如装载方式、产品处方、容器大小、灌装体积、最大及最小装载量等) )；v灭菌程序的监控方法( (如热电偶、监控温度用产品模拟瓶、生物指示剂的数量、位置以及合格/ /不合格标准) )；v关键参数允许的变化范围( (最大及最小值) )；v产品所能承受的f0f0值限度；v对灭菌工艺波动情况所作统计分析的评估报告；v再验证计划( (如常规和非常规情况下再验证方案的详细说明、频率等) )；湿热灭菌重点关注的内容和方法v 灭菌介质是什么？v蒸汽

30、（锅炉蒸汽、纯蒸汽）？v过热水？v灭菌设备的过滤器v灭菌机使用什么类型的过滤器？v多长时间对过滤器进行一次完整性测试？v灭菌周期控制是手动的还是程序自动控制的？v应了解具体产品的高压蒸汽灭菌机的灭菌参数情况？v时间；温度；压力；压力下降速度。v设备灭菌周期控制用传感器安装的位置？v上述参数是如何监测的？如未监测，应要求说明：v灭菌机在每个灭菌周期内均监测验证确定的冷点温度吗？湿热灭菌重点关注的内容和方法v高压蒸汽灭菌的验证文件是否包括下述项目： 空载热分布情况，是否已确定冷点温度并针对冷点温度对灭菌温度进行了校正？ 负载热穿透情况，是否对待灭菌物的每一种装载形式和使用的每一种体积的装载容器都进

31、行了验证？ 微生物挑战试验？v验证确定的冷点温度偏差是否反映到批生产记录bpr中？v蒸汽灭菌机使用的热电偶校正情况 湿热灭菌重点关注的内容和方法v如果在蒸汽灭菌验证时使用了生物指示剂，应确认：v生物指示剂的类型？v生物指示剂来源？v是哪种微生物？v浓度是多少？v生物指示剂的d值是多少？v生物指示剂以全部灭活方式还是对数减少方式使用的？干热灭菌工艺及验证v干热灭菌是使微生物氧化而不是象湿热灭菌使蛋白质变性；v干热灭菌时，以强制方式将空气对流，高温空气将水分逐渐带走，被灭菌物品及芽孢跟着失水，灭菌率也发生相应的变化。v去热原的工艺条件比孢子杀灭程序要苛刻得多，通常相当于标准干热灭菌时间fh 的数十

32、倍。170 下灭菌时间用fh表示；v干热灭菌空气应经过hepa过滤器过滤，并要控制层流方向。检查生产中的时间，压力是否与验证一致；v最终灭菌无菌药品生产中，干热灭菌工艺主要用于生产过程中器具的灭菌与除热原处理。干热灭菌重点关注的内容和方法v灭菌设备通过风机空气循环还是仅靠热空气对流热分布？v灭菌后物品冷却使用的空气经过高效过滤器过滤处理吗？v有没有进行高效过滤器的完整性测试？多长时间测定一次高效过滤器的完整性？v了解干热灭菌周期采用人工控制还是自动控制？评估灭菌控制的可靠性。v了解干热灭菌参数是如何监测的？如未监测，要求予以说明。v干热设备使用的是那类监测和控制传感器v了解干热灭菌的周期参数和

33、确定依据（将验证记录和sop中规定的参数与所抽取的产品的生产记录进行比较）？v干热灭菌时间和温度的规定指标和实际观察到的参数有无偏差？偏差的处理？干热灭菌重点关注的内容和方法v了解干热灭菌的验证文件，文件是否包括：v(1)空载热分布试验；v设备运转次数；v测定到冷点温度了吗；v根据冷点温度确定允许的偏差和实际发现的偏差；v(2)热穿透试验：v对每种装载方式/和所用的不同大小容器分别进行试验吗？v每种装载方式的运转次数？v每种装载方式均检测测了冷点了吗？v(3)每次使用前后均对热电偶校正了吗？校正时用了冰点参照标准了吗？v(4)高温参照标准是否均有nbs可追溯性？v在验证时，如发现了热分布或热穿

34、透研究不一致，应了解偏差是如何纠正的，是否未纠正就接受了？v干热灭菌是否根据容器大小，产品粘性，等确定了延滞时间？是否分别调整了灭菌周期？除菌过滤工艺v过滤系统要求： 过滤系统无泄漏； 压力、流速、温度； 化学性质、ph值； 溶剂溶出物； 通过起泡点试验，判断确认过滤孔径与工艺要求相适应。 与其它灭菌方法相比，过滤灭菌法的风险更大，建议在紧挨“灌装”的位置安装第二只灭过菌的除菌过滤器，再过滤一次。此最终除菌过滤器应尽可能接近灌装点。 为防止因时间过长导致微生物生长或穿透滤膜而污染滤液，应在既定最大时间限度内完成产品的过滤和灌装。该时限还应当防止过滤器上游微生物数量的过份增加，微生物增多将导致热

35、原的产生。除菌过滤工艺重点关注的内容和方法v了解除菌过滤器的类型，筒式或盘式？疏水性或亲水性？v工艺过程中是使用单个除菌滤器还是多个滤器？v过滤装置采用何种方法灭菌？v过滤装置采用何种方法灭菌？v灭菌工艺经过充分验证吗？要求了解过滤器验证操作的sop。v在同一批产品生产期间更换滤器吗？过滤器更换的频次经过验证测试吗？v过滤器采用重新清洗灭菌和重新使用方式吗？这种方法经过验证吗？要求了解过滤器重新清洗灭菌和重新使用方式验证操作的sopv该滤器供应商是否对每批滤器介质做过细菌挑战性试验？v企业对过滤器的供应审计是如何进行的？v生产中的产品组合都进行了物理和化学挑战性试验吗？除菌过滤工艺重点关注的内

36、容和方法v过滤器的验证测试v过滤器装置在使用前后均测试起泡点压力吗？v测试压力与生产中使用的压力有何关系？v当过滤器使用后测试压力不符合要求时采取了什么措施？v过滤器在测试不符合后有无进行相应的原因调查？v生产中会遇到的产品组合都进行了物理和化学挑战性试验吗？v该测试的条件与实际使用条件相同吗？v跟踪对一种用于给定的工艺和产品的专用滤器的验证，了解该验证的详细情况，是否延伸至有着相似的性质和工艺条件的相关产品，如果是，是否已将这种延伸的理由文件化？丁基胶塞清洗工艺胶塞清洗原理胶塞清洗、硅化、灭菌、干燥机示意重点关注胶塞密封性-通过验证试验吗？胶塞清洗工艺重点关注的内容和方法v洗涤后最终淋洗水应

37、达到如下标准：v菌落 10 cfu/100 ml;v热原5.0m0.5-5.0m5.0ma3 500035000b3 5000350 0002 000c350 0002 0003 500 00020 000d3 500 00020 000不作规定不作规定中国 gmp（1998 修订）洁 净 级 别尘粒数 / 立方米微生物最大允许数 0.5m 5m浮游菌cfu /立方米沉降菌cfu/皿 ( 90 mm 半 小 时 )100 3 50005110 000 350 0002 0001003100 000 3 500 00020 00050010300 000 10 500 00060 0001000

38、15关键操作区空气流向控制要求比较洁净度级别who美国欧盟中国a100a100空气流向单向流单向流单向流无要求风速0.45m/s20%0.45m/s20%产粉尘的操作区风速应更高 0.36-0.54m/s 无要求洁净区压差控制要求比较who美国欧盟中国不同级别相邻房间的压差10-15pa10-15pa10-15pa 5pa其它压差洁净区过滤空气的送风应能确保在任何运行状态下对周围低级别区保持正压及气流方向，并有足够的自净能力 无菌操作间对相邻非洁净区操作间应始终保持正压（如至少12.5pa）洁净区过滤空气的送风应能确保在任何运行状态下对周围低级别区保持正压及气流方向，并有足够的自净能力 洁净区

39、与室外大气的静压差 10pa洁净区环境监控要求比较who美国欧盟中国关键操作区的尘粒为控制各级别的洁净区操作时的尘粒数，应对尘粒进行监测每一生产班次应定期进行监控；粒子计数探头的安放位置应能取到有代表性的样品 应对a级区的空气粒子进行连续测定，并建议对b级区也连续进行测定 洁净室(区)内空气的微生物数和尘粒数应定期监测，监测结果应记录存档。洁净室(区)在静态条件下检测的尘埃粒子数、浮游菌数或沉降菌数必须符合规定，应定期监控动态条件下的洁净状况。关键操作区的微生物无菌操作时，应频繁对微生物进行动态监测；关键操作结束后，应对表面和人员的微生物进行监测；应制定微生物监控的警戒和纠偏标准，以监控空气质

40、量的趋势关键区出现微生物污染时，要进行必要的调查无菌操作时，应频繁对微生物进行动态监测；除在生产过程中需进行微生物监控外，系统验证、清洁和消毒等操作后，也应进行微生物监控；应对尘粒和微生物监控制定适当的警戒和纠偏标准关键操作区的压差应设送风故障报警系统；压差十分重要的毗邻级别区之间应安装压差表并定期记录压差每一班操作过程中，房间的压差应连续监控并经常记录。所有报警应有记录，超过设定限度的各种偏差应进行调查。可列入批记录中应设送风故障报警系统；压差十分重要的毗邻级别区之间应安装压差表；压差数据应定期记录或者归入有关文档中无要求关键操作区气流方向示例一mmscip灭菌直接包材接触部100级1000

41、0级关键操作区气流方向示例二mmscip灭菌灭菌直接包材直接包材接触部接触部0.4520% m/sgrade”a”grade”b”关键点关键点重点关注洁净厂房压差梯度控制hvac系统重点关注的内容和方法v向产品暴露和灌装区域输送的空气是否经过高效空气过滤器过滤，并对其他区域保持空气正压？v输送至关键控制点的空气是单向流(层流)状态吗？单向空气流的速度是多少？v关键区域或过滤器表面风速是否经过测定？v输送至洁净区域和无菌区域的空气是如何过滤的？v下列区域的空气质量等级是怎样区分的：v产品暴露区域；v灌装区域；v周围区域。hvac系统重点关注的内容和方法v高效空气过滤器的效率及完整性经过测定吗？v多长时间测定一次