肝愈胶囊的质量标准研究论文

1、肝愈胶囊的质量标准研究论文 【摘要】目的建立控制肝愈胶囊的质量标准。方法对肝愈胶囊中主要成分丹参、栀子、黄柏、黄芪、五味子进行了薄层色谱鉴别；采用高效液相色谱法测定黄芩苷的含量。结果薄层色谱法可以对该制剂中的丹参、栀子、黄柏、黄芪、五味子作出准确鉴别；黄芩苷的线性范围为0.120.58g，r=0.9997，平均加样回收率为99.06，RSD为1.40(n=5)。结论方法灵敏、简便、重现性好，可作为该制剂的质量标准。 【关键词】肝愈胶囊黄芩苷薄层色谱高效液相色谱 Abstract:ObjectiveToestablishthequalitystandardforGanyuCapsule.Meth

2、odsRadixSalviaeMiltiorrhiae,FructusGardeniae,CortexPhellodendri,RadixAstragaliandFructusSchisandraewereidentifiedbyTLC.BaicalinwasdeterminedbyHPLC.ResultsTLCspotsdevelopedwerefairlyclear,andtheblanktestshowednointerference.Baicalinshowedagoodlinearrelationshipintheconcentrationrangeof0.11680.5840g，a

3、ndtheaveragerecoverywasupto99.06%,RSDwas1.4%.ConclusionThemethodisaccurate,reproducibleandsimple.Itcanbeusedasthequalitycontrolofthispreparation. Keywords:GanyuCapsule;Baicalin;TLC;HPLC 肝愈胶囊由黄芩、丹参、栀子、黄柏、黄芪、五味子等中药组成，具有清热解毒、益气活血的功效。主治气阴两虚型肝炎。为控制本品的内在质量，本实验采用TLC，HPLC等方法对其进行质量标准研究。 1仪器与试药 Waters600E2487

4、型高效液相色谱仪美国；Millennium色谱工作站数据处理系统美国；BP211D电子天平德国。甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。黄芩苷7159908供含量测定用，纯度99.02%、丹参酮07669903、栀子苷07499806、盐酸小檗碱7139813、黄芪甲苷07819806、五味子乙素07659706，对照品均购自中国药品生物制品检定所。肝愈胶囊3批样品：040105，040108，040111自制。硅胶G青岛海洋化工厂。 2方法与结果 2.1薄层鉴别 2.1.1丹参的鉴别1 取本品内容物3g，研细，加乙醚20ml，超声处理20min，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯1ml使

5、溶解，作为供试品溶液。另取丹参对照药材粗粉1g和按处方量从中除去丹参药材的阴性对照品粗粉4g，分别同法制成对照药材溶液和阴性对照液。再取丹参酮A对照品，加醋酸乙酯制成每毫升含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法实验1，吸取上述4种溶液各6l,分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯191为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，而阴性对照色谱在相应的位置上无此斑点。见图1。 2.1.2栀子的鉴别1 取本品内容物3g，加乙醇20ml，超声处理20min，滤过，滤液浓缩至约2ml，作为供试品溶液。另取栀子对照药材粗粉1g和按处方量

6、从中除去栀子的阴性对照品粗粉3g，分别加乙醇10ml和20ml,同法制成对照药材溶液和阴性溶液。再取栀子苷对照品，加乙醇制成每毫升含2mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述溶液各5l，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水5511为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，而阴性对照色谱中无相应的斑点。见图2。 2.1.3黄柏的鉴别 取本品内容物2g，加甲醇20ml,超声处理20min，滤过，滤液浓缩至2ml，作为供试品溶液。另取黄柏对照药材粗粉0.2

7、g和按处方量从中除去黄柏的阴性对照品粗粉2g，分别加甲醇10ml和20ml,加热回流提取15min，过滤，滤液浓缩至干，各加1ml甲醇使溶解，分别作为对照药材溶液和阴性对照溶液。再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每毫升含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述溶液各3l,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨试液631.51.50.5为展开剂，置氨蒸气饱和的层析缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同的荧光斑点。见图3。 2.1.4黄芪的鉴别1 取本品内容物4g，加正丁醇30

8、ml，超声处理1h，滤过，滤液用1%氢氧化钠溶液洗涤3次，20ml/次，弃去碱液，用正丁醇饱和的水洗至中性，弃去水液，正丁醇浓缩至干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪对照药材粗粉1g和按处方量从中除去黄芪的阴性对照品粗粉4g，分别加正丁醇15ml和30ml，同法制成对照药材溶液和阴性对照溶液。再取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每毫升含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取供试品溶液和阴性对照品溶液各8l，对照药材溶液6l，对照品溶液4l，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水102011510以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1

9、0%硫酸乙醇溶液，置105烘至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。见图4。 2.1.5五味子的鉴别1 取本品内容物5g，置索氏提取器中，加氯仿30ml，回流提取3h，回收氯仿，残渣加氯仿2ml使溶解，作为供试品溶液。另取五味子对照药材粗粉2g和按处方量从中除去五味子的阴性对照品粗粉5g,分别置索氏提取器中，各加氯仿15ml和30ml，同法制成对照药材溶液和对照品溶液。再取五味子乙素对照品，加氯仿制成每毫升含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取供试品溶液、对照药材溶液和阴性溶液各5l，对照品溶液3l，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶GF2

10、54薄层板上，以石油醚3060-甲酸乙酯-甲酸1551的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同的荧光斑点。见图5。 2.2含量测定 2.2.1色谱条件的选择 色谱柱KromasilC18200mm4.6mm,5m,流动相：甲醇-水-冰醋酸55450.5流速1.0ml/min；检测波长280nm；柱温25；理论板数按黄芩苷峰计应不低于1500。 2.2.2标准曲线的制备 精密称取干燥至恒重的黄芩苷对照品2.92mg，置50ml量瓶中，加适量甲醇溶解，稀释至刻度，摇匀，制成每毫升含0.00584mg的对照品溶液

11、。分别精密吸取对照品溶液2，4，6，8，10l，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以黄芩苷进样量微克数为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，得一直线，计算回归方程为Y=2.43106X-3.74104，r=0.9997（n=5.结果表明黄芩苷在0.11680.5840g范围内线性关系良好。 2.2.3供试品溶液的制备 取本品10粒，倾出内容物，研细，取3.0g精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇50ml,称定重量，超声处理功率250W，频率40kHz30min，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液2.0ml，置10ml量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇

12、匀后过0.45m微孔滤膜，滤液作为供试品溶液。 2.2.4精密度实验 精密吸取浓度为0.00584mg/ml的黄芩苷对照品溶液5l，重复进样5次，均值为609299，RSD=0.90%n=5，结果表明仪器精密度良好。 2.2.5稳定性实验 精密吸取供试品溶液5l，注入液相色谱仪，分别于0，1，3，7，12h测定峰面积。结果表明峰面积的RSD为0.90%，表明供试品溶液在12h内基本稳定。 2.2.6空白实验 取样品和按处方比例不含黄芩的诸药，按制剂工艺分别制成供试品溶液和阴性对照液，精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各5l，分别注入液相色谱仪，依法测定，结果阴性对照品溶液在与黄芩苷

13、对照品溶液相同保留时间处无色谱峰，表明无干扰。见图6。 2.2.7重复性实验 取同一批号样品，按供试品制备方法平行制备5份，依法测定黄芩苷峰面积，分别计算含量，RSD为1.24%，表明重复性良好。 2.2.8回收率实验 采用加样回收法，精密称取已知黄芩苷含量的同一批号样品(040105)5份，1.6g/份，分别精密加入黄芩苷对照品8mg，按含量测定方法操作测定，计算，平均回收率为99.06%，RSD为1.4%。结果见表1。表1回收率考察数据（略） 2.2.9样品含量测定 取3批样品依法制备供试品溶液，精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5l，分别注入液相色谱仪，测定峰面积，计算样品中黄芩苷的含量。

14、结果见表2。表2样品含量测定数据（略） 3讨论 在黄柏的薄层色谱鉴别实验中，黄柏鉴别项下1的展开剂，醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水10611进行实验，结果分离效果不好，Rf值较小，相邻斑点分不开。后来选用黄连鉴别项下的展开剂，经过多次调整，把展开剂中的水换成浓氨试液，即展开剂为苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨试液(631.51.50.5)效果较好，结果较稳定。 流动相的选择“双黄连颗粒”项下1黄芩苷含量测定的流动相，试验结果发现黄芩苷达不到基线，保留时间较短，经调整将甲醇比例增大些，醋酸比例缩小，则达到基线分离、保留时间合适，故流动相选用甲醇-水-冰醋酸55450.5。 采用参考文献1方法对肝愈胶囊进行薄层色谱鉴别，重现性好，阴性实验无