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文档简介

1、目前应用于临床的治疗的 T 细胞有如下几种：1、CD3AK细胞CD3AK细胞全称为抗CD3单克隆抗体激活的杀伤细胞，当淋巴细胞与抗CD3单克隆抗体共育 2-3 天，淋巴细胞可以明显增殖，此种激活为一次性完成，淋巴细胞一经激活即无需抗CD3单克隆抗体持续存在而发挥作用。只会在加入低剂量的IL-2继续培养即可维持起活跃增殖，经2-3周培养后可获得大量的表现为 CD3+ CD4以及CD8+勺混合体，且随时间 延长，CD3和CD8双阳性细胞的比例增加，而 CD4和CD8+双阳性的比例则下降。因此， CD3AK细胞在表型上似乎接近于CTL具体培养方法 :1、 培养前1天以含CD3Ab 5 mg/L的磷酸

2、盐缓冲液（PBS）20 ml平铺培养瓶，4C过夜包被；2、培养第1天弃去PBS以PBS冲洗2次及1640培养液冲洗1次，加入1000 U/ml的IFN- Y,置于37C体积分数为5% CQ的饱和湿度培养箱中；3、24 小时后加入 1 000 U /ml 的 lL-2 。4、继续培养2、CIK 细胞CIK细胞的全称为细胞因子活化的杀伤细胞，它是在多种细胞因子（IFN- 丫，CD3单抗，CD28单抗，IL-2和IL-1 ）作用下，外周血单核细胞可以被定向诱导并大量增殖成为具有 抗肿瘤活性的细胞群。CIK细胞的表型主要为 CD3+CD56+是来源于 PBMC中的T细胞CD3+CD56)- 。具体培养

3、方法：3、LAK细胞LAK细胞全称为淋巴因子激活的杀伤细胞，可在外周血单核细（ PBMC中加入IL-2体外 培养4-6天，能诱导出一种非特异的杀伤细胞，称为 LAK细胞。LAK细胞的前体细胞是NK 细胞和 T 细胞。4、TIL 细胞TIL细胞的全称为肿瘤浸润淋巴细胞。它的制备方法与LAK细胞相似，所不同的是 TIL的细胞来源是肿瘤组织中分离的浸润淋巴细胞，用少量的 IL-2 细胞刺激后，能大量扩增表 型为CD4及CD8为主的T细胞。外周血单核细胞（ PBM）C 分离实验血标本：EDTA（2%盐抗凝血：采集后可4度保存不超过半天，尽量早处理。10ml抗凝 血分 2 份（分离淋巴细胞可稍多）。外周

4、血单核细胞（PBMC分离步骤：1. 吸出10ml新鲜抗凝血（含2%EDTA至50ml离心管中，加入10mlPBS混匀，此时共20ml；2. 2个50ml离心管内分别加入10ml外周血单核细胞（PBMC分离分层液；3. 向装有分层液的 50ml 的离心管分别加入 10ml 稀释样品，注意缓慢加入，不要冲破液 面， 2000r/min 离心 20分钟；4. 巴氏管插入液面，轻吸灰白色的淋巴细胞层，放入另一个离心管中，避免吸入分层液和血浆（ 2管混入一个离心管）； 5. 加入 5ml PBS，1800r/min 离心 5 分钟；6. 弃上清，取沉淀，再次加入 5mlPBS混匀成细胞悬液，1000r/min离心5分钟，弃去 上清，保留沉淀 ;7. 2ml 16

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