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1、会计学1SSR分析的原理及操作技术分析的原理及操作技术第1页/共30页第2页/共30页第3页/共30页第4页/共30页第5页/共30页第6页/共30页第7页/共30页第8页/共30页第9页/共30页第10页/共30页第11页/共30页第12页/共30页第13页/共30页第14页/共30页第15页/共30页第16页/共30页第17页/共30页第18页/共30页第19页/共30页第20页/共30页第21页/共30页第22页/共30页第23页/共30页组分组分1 1个反应体积个反应体积终浓度终浓度4 4个反应体积个反应体积ddHddH2 2O O10.210.2L L40.840.8L L1010b

2、ufferbuffer缓冲液缓冲液（含（含15mM Mg15mM Mg）2.02.0L L1 18 8L L2.5mM dNTP2.5mM dNTP1.61.6L L0.2mM0.2mM6.46.4L L5 5M M 引物引物F F1.01.0L L0.25M0.25M4 4L L5 5M M 引物引物R R1.01.0L L0.25M0.25M4 4L L模板模板DNADNA（5ng/5ng/L L）4 4L L1ng/L1ng/LTaqTaq酶（酶（5U/5U/L L）0.20.2L L1U1U0.80.8L L总体积总体积2020L L8080L L第24页/共30页第25页/共30页5

3、 5变性胶变性胶100ml100ml尿素尿素 （UreaUrea）42g42g5 5TBE bufferTBE buffer20ml20ml4040丙稀酰胺丙稀酰胺12.5ml12.5ml1010过硫酸铵过硫酸铵400400l lTEMEDTEMED87.587.5l l4040丙稀酰胺溶液（丙稀酰胺溶液（1919：1 1）100ml100ml丙稀酰胺（丙稀酰胺（AcrylamideAcrylamide）38g38g甲义甲义- -丙稀酰胺（丙稀酰胺（Bis-AcrylamideBis-Acrylamide）2g2g第26页/共30页LoadingbufferLoadingbuffer组分组分用

4、量用量9898FormamideFormamide（甲酰胺）（甲酰胺）49ml49ml（100100）10MmEDTA10MmEDTA（pH8.0pH8.0）1ml1ml（0.5M0.5M，pH8.0pH8.0）0.250.25Bromophenol BlueBromophenol Blue（溴酚蓝）（溴酚蓝）0.125g0.125g第27页/共30页步骤步骤试剂试剂漂洗漂洗30s30sddHddH2 2O O染色染色8min8min0.10.1硝酸银硝酸银400ml400ml漂洗漂洗30s30sddHddH2 2O O显色显色4min4min8g 8g NaOHNaOH，2ml 372ml 37甲醛，甲醛，0.1

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