实验二显微镜油镜的使用细胞形态的观察及革兰氏染色PPT学习教案

1、会计学1实验二显微镜油镜的使用细胞形态的观实验二显微镜油镜的使用细胞形态的观察及革兰氏染色察及革兰氏染色1.1.学习并掌握普通光学显微镜的构造和学习并掌握普通光学显微镜的构造和油镜的使用油镜的使用技术及维护的基本知识；技术及维护的基本知识；2.2.掌握细菌掌握细菌革兰氏染色革兰氏染色的原理和方法，学会在油镜下观察细胞和识别细菌的形态特征。的原理和方法，学会在油镜下观察细胞和识别细菌的形态特征。第1页/共28页（一）普通光学显微镜（一）普通光学显微镜第2页/共28页第3页/共28页图图1-1-2 光学显微镜的成像原理光学显微镜的成像原理倒立的虚像倒立的虚像第4页/共28页D值越小，分辨率越高，看

2、到的物象越清晰值越小，分辨率越高，看到的物象越清晰2.2. 显微镜的分辨率显微镜的分辨率：是表示显微：是表示显微镜辨析物体（两端）两点之间镜辨析物体（两端）两点之间距离的能力，可用公式表示为距离的能力，可用公式表示为： D D（R R）=0.61/n=0.61/nSin/2Sin/2n式中式中D D：物镜分辨出物体两点间：物镜分辨出物体两点间的的最短距离最短距离。 ：可见光的波长（平均：可见光的波长（平均0.550.55 m) m) n n: : 物镜和被检标本间介质的折物镜和被检标本间介质的折射率。射率。 ：镜口角（即入射角）。：镜口角（即入射角）。1.1.放大倍数放大倍数= =接物镜放大倍

3、数接物镜放大倍数接目镜放大倍数接目镜放大倍数镜口率镜口率 N.A=nSin/2第5页/共28页u根据公式根据公式 ，增大分母，使得，增大分母，使得D值减小，分值减小，分辨率增大。辨率增大。（二）油镜使用的原理（二）油镜使用的原理第6页/共28页第7页/共28页第8页/共28页n根据革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌之间根据革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌之间细胞壁细胞壁的的结构差异结构差异来达到染色的目的的。来达到染色的目的的。n先用先用结晶紫初染结晶紫初染，所有的细菌都被染成初染料的，所有的细菌都被染成初染料的蓝紫色蓝紫色；n然后用然后用碘媒染碘媒染，它与结晶紫结合成，它与结晶紫结合成结晶紫结晶紫碘复碘复

4、合物合物，从而增强了染料与细菌的结合力。，从而增强了染料与细菌的结合力。n然后再用然后再用乙醇脱色乙醇脱色处理。处理。（四）、革兰氏染色原理（四）、革兰氏染色原理第9页/共28页n由于革兰氏由于革兰氏阳性菌阳性菌细胞壁主要由肽聚糖形成网状细胞壁主要由肽聚糖形成网状结构、壁厚、类脂质含量低，结构、壁厚、类脂质含量低，脱色时网孔收缩脱色时网孔收缩，结晶紫结晶紫碘碘不易被洗脱不易被洗脱而保留在细胞内，复染时而保留在细胞内，复染时仍保持仍保持蓝紫色蓝紫色。n而革兰氏而革兰氏阴性菌阴性菌由于细胞壁的肽聚糖层较薄、类由于细胞壁的肽聚糖层较薄、类脂含量高，所以当脱色处理时类脂被乙醇溶解，脂含量高，所以当脱色

5、处理时类脂被乙醇溶解，细胞壁透性增大，结晶紫细胞壁透性增大，结晶紫碘复合物被洗脱，复碘复合物被洗脱，复染时细胞被染上复染剂的颜色染时细胞被染上复染剂的颜色（红色）（红色）。（四）、革兰氏染色原理（四）、革兰氏染色原理第10页/共28页大肠杆菌大肠杆菌葡萄球菌葡萄球菌第11页/共28页乙醇、擦镜纸乙醇、擦镜纸三、实验材料三、实验材料第12页/共28页四、实验操作步骤四、实验操作步骤第13页/共28页四、实验操作步骤四、实验操作步骤第14页/共28页由对应学号的同学承担责任。由对应学号的同学承担责任。四、实验操作步骤四、实验操作步骤第15页/共28页四、实验操作步骤四、实验操作步骤第16页/共28

6、页无菌操作无菌操作涂片涂片 干燥干燥 固定固定 染色染色 水洗水洗 干燥干燥 镜检镜检四、实验操作步骤四、实验操作步骤第17页/共28页三区涂片法三区涂片法第18页/共28页载玻片生理盐水滴菌体涂片大肠杆菌大肠杆菌葡萄球菌葡萄球菌混合菌混合菌第19页/共28页种方法。固定时尽量维持细种方法。固定时尽量维持细胞原有的形态。胞原有的形态。（三）革兰氏染色的操作方法（三）革兰氏染色的操作方法第20页/共28页（三）革兰氏染色的操作方法（三）革兰氏染色的操作方法第21页/共28页初染初染媒染媒染脱色脱色复染复染第22页/共28页（三）革兰氏染色的操作方法（三）革兰氏染色的操作方法第23页/共28页（三）革兰氏染色的操作方法（三）革兰氏染色的操作方法第24页/共28页（三）革兰氏染色的操作方法（三）革兰氏染色的操作方法注意：实验