不同树龄苹果园土壤对苹果砧木的抑制作用及与土壤微生物群落的相关关系研究

1、不同树龄苹果园土壤对苹果砧木的抑制作用及与土壤微生物群落的相关关系研究论文导读:：本研究以平顶海棠（苹果砧木）为试验材料，以采集自清苑县4个不同树龄苹果园的土壤为对象，研究了不同树龄苹果园土壤对再植平顶海棠幼苗生长的影响。结果表明，在前茬树龄为3、8、15和24年苹果园土种植的平顶海棠幼苗比正茬土对照的平均株高分别减少31.22%、46.38%、57.66%和63.10%；再植平顶海棠幼苗地上部干重分别减少0.96%、57.58%、76.88%和78.10%；地下部干重分别减少40.38%、48.79%、64.03%和79.43%。在24年生苹果树土壤中再植海棠幼苗校正发病率达到了72.73%

2、，而在3年生苹果树的土壤中再植海棠幼苗校正发病率只有18.18%。用16S rDNA 和18S rDNA特异引物，将土壤中提取的总DNA进行PCR扩增，通过变性梯度凝胶电泳（DGGE）对不同树龄的苹果园土壤根际细菌和真菌群落结构的差异进行分析。结果表明，随着苹果树龄的提高，根际土壤中真菌种类和数量显著增加，而细菌的种类和数量则随着树龄的增加显著减少。论文关键词：苹果再植病害，根际微生物，树龄，变性梯度凝胶电泳据统计，2008年我国苹果种植面积为199.23万hm2，产量为2984.7万t，占世界苹果面积和产量的40%以上，居世界第一位1。由于很多主产区大部分耕地都栽植了苹果，很难在新区域发展果

3、树种植，苹果再植问题严重困扰着我国苹果主产区果业的可持续发展。以河北省为例农业论文，本研究组在2007和2008年调查发现，树龄在15年以上的苹果园已占到近70%，而苹果最佳的结果年龄一般不超过20年，表明果园更新换代问题已经非常紧迫。苹果树再植病（Apple replant disease，ARD）又称连作障碍或忌地现象，有的也叫再植障碍，得病植株表现为树势弱、叶片小、新梢细短、根系腐烂、根量减少、果实质量差等症状。据报道，果树再植病主要是由于土壤残毒、线虫、土壤根际有害微生物等影响造成2。再植病害病因复杂，但众多的研究报道35认为，土壤微生物对果树再植病害的发生发挥着重要作用6论文开题报告

4、范例。变性梯度凝胶电泳（denaturing gradient gel electrophoresis，DGGE）最早是一项用于DNA突变检测的电泳技术7，近些年来已经被广泛应用于各种环境微生物的生态研究中，如高热温泉、湖泊、海洋、土壤和根际等 8。本文首先研究了随着苹果种植年限的延长，其根际土壤对于后茬再植平顶海棠幼苗的株高、生物量、发病率和病原真菌数量的影响农业论文，然后采用PCR-DGGE技术，以不同树龄苹果园土壤样品中土壤微生物的基因组总DNA为研究对象，通过比较土壤中原核微生物的16S rDNA和真核微生物的18S rDNA差异，研究了随着苹果树龄的增加土壤中微生物群落多样性的变化情

5、况。1 材料与方法1.1 实验材料：花盆（1012 cm）；海棠品种：平顶海棠(Malus robust Rehd.)1.2 育苗：海棠种子用1%次氯酸钠表面消毒5分钟，然后在自来水下冲洗5分钟。4层积处理30 d以上，待种子露白后播种于灭菌的泥煤苔和珍珠岩混合基质上，定时浇灌Hoagland营养液。每6 d更换新的营养液，调节pH 6.0士0.2，培养温度（24士1)，12 h光照的培养室中生长。1.3 土样采集和处理设置：土壤采集于河北省清苑县温仁村红富士苹果园，采集果园的树龄分别为3、8、15和24年。砧木为八棱海棠（Malus micromalus Makino)，土壤类型为黄褐土。对

6、照土采集于苹果园附近未种植过果树的麦田。果园土样采集距苹果树干1.5 m，深10-30 cm范围内的根际土壤，五点随机取样农业论文，混匀、过筛，备用。对不同树龄果园土壤的肥力测定结果表明，土壤肥力与苹果树龄间没有明显相关性（表1）。将不同树龄苹果园土壤及对照土壤分装于直径12 cm花盆中，每盆装土1 kg。将在培养室中培养4周的平顶海棠幼苗移栽于不同处理的花盆中。每个处理4次重复，每6株幼苗作为一个重复论文开题报告范例。1.4 土壤微生物总DNA提取和PCR扩增1.4.1 土壤微生物总DNA提取和纯化采用化学裂解法，称取 5 g根际土壤样品，按照化学裂解法的试验步骤进行土壤微生物总DNA的提取9。为了避免土壤样品所含腐殖质杂质对PCR扩增反应的抑制作用，对土壤样品的基因组DNA粗提液进行了纯化。