微量凯氏(Mirco-Kjeldahl)定氮法

1、微量凯氏(MircoKjeldahl)定氮法1、学习微量凯氏定氮法的原理2、掌握微量凯氏定氮法的操作技术，包括标准 硫酸钱含量的测定，未知样品的消化、蒸馄、 滴定及其含氮量的计算等。原理（消化、蒸惚、滴定、计算）凯氏定氮法常用于测定天然有机物（如蛋白质，核酸及氨基 酸等）的含氮量。天然的含氮有机物与浓硫酸共热时，其中的碳、氢二元素被 氧化成二氧化碳和水，而氮则变成氨，并进一步与硫酸作 用生成硫酸鞍。此时程称之为“消化”。（但是，这个反应进行得比较缓慢，通常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提高反应的沸点，并加入硫酸铜作为催化剂，以 促込反血h勺进行。）浓碱可使消化液中的硫酸鞍分解，借水蒸汽将产生的氨蒸馅

2、到一定 的量和浓度的硼酸溶液中（紫红色），硼酸吸收氨后（绿色）， 氨与溶液中的氢离子结合，生成鞍离子，使溶液中氢离子浓度降 低。然后用标准无机酸滴定，直至恢复溶液中原來氢离子浓度为 止（紫红色），最后根据所用标准酸的摩尔数（相当于待测物中 氨的摩尔数）计算出待测物中的氮量。(NH 4口0& + 2NaOH Na 2S0A + 2NH A0HNH 4OH t H 2O + NH 3*NH 3 + H3BO3 - NH 4H2BO3NH 4H 2BO3 + HCLNH 4CL + H ,BO 3滴定时用甲烯蓝和甲基红混合指示剂，其指示范围为pH5.256,将 NH4H2BO3的绿色滴至原来H3BO

3、3的紫红色即为终点。本法适用范围0.2-1.0毫克氮。相对误差应小于2%。器材1 改良型凯氏定氮仪2、10mL微量酸式滴定管3、酒精灯（打火机）4、凯氏烧瓶5、锥形瓶（50100毫升）、容量瓶（50毫升）试齐I1 0.1mg/mL 标准(NH4) 2SO42、30% NaOH溶液3、2%硼酸4、标准HCI (0.0100M)5、混合指示剂(田式指示剂)操作步骤 （样品的处理、消化时间长，略）1 熟悉改良型凯氏定氮仪构造原理，滴定管的使用夹子3夹子1夹了 2图凯氏微迫定氮蔗懈装就2蒸憾器的清洗（将蒸汽发生器废水换掉，主要清洗反应室）（1）取3个50mL锥形瓶编号，各准确加入5mL硼酸（内加混合指

4、示剂 2滴），呈淡紫色。表面皿覆盖备用。（2）先将夹子打开缓慢接上冷水，向蒸汽发生器（A球）中注入3/4 球体的水，将夹子全关上，将水烧开，然后在加样漏斗中 加入少许蒸僻水到反应室（B球）中，B球中水将自动吸到A球； 或者将酒精灯挪开；或者将夹子打开放入少许冷水，都将使反 应室中的水自动吸岀，反复清洗3次。最后一次可用硼酸检测：将冷凝管出口下端浸入第1个硼酸及指 示剂的锥形瓶的液面下，蒸饰数分钟，观察颜色变化，若不变色 则洗净。（注：先挪开锥形瓶，再挪酒精灯，防锥形瓶中液体被 倒吸）3.蒸憎样品澀靭点触学脐錚入秸威亲加飜竝骁少许和水做水封。关闭所有夹子缓慢5mL (NH4) 2SO4缓慢加入反

5、应室，再加入5mLNaOH,关闭夹 当观察到锥形瓶内溶液由紫变绿时，开始计时蒸懈3分钟，然后提高 冷凝管出口离开液1cm高，同时用少许蒸馆水冲冷凝管出口外侧， 继续蒸馆1 min.移走锥形瓶，用表面皿覆盖，等待滴定。 清洗反应室：放掉发生器中废水，按照步骤2 (2)操作，最后将蒸汽 发生器中废水全换了，并加热使蒸汽通过整个装置数分钟4.蒸馅空白操作如蒸馄样品，空白不加（NH4） 2SO4, 而是5mL蒸馄水及5mL NaOH（2）第3个锥形瓶收集完后，清洗反应室，放掉 废水，操作按照3 （3）5滴定用标准盐酸溶液滴定第2, 3两只锥瓶内溶液，当 硼酸溶液刚由绿变回淡紫色时为滴定终点，记 录所用盐酸的量。6.计算(NH4) 2SO4样品含N量(mg/mL) =C(V1-V2) X14/VC标准HCI的浓度0.01MV1滴定样品消耗标准HCI平均mL数 V2 滴定