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文档简介

1、.过氧化氢酶活性测定 - 紫外吸收法过氧化氢酶普遍存在于植物的所有组织中， 其活性与植物的代谢强度及抗寒、 抗病能力有一定关系，故常加以测定。一、原理】H2O2在 240nm 波长下有强烈吸收， 过氧化氢酶能分解过氧化氢， 使反应溶液吸光度 (A 240) 随反应时间而降低。根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。【仪器与设备与试剂】1 、材料小麦叶片等。2、仪器设备研钵；离心机； 250ml 容量瓶；移液管（ 0.5ml 、 2ml 各 2支）；10ml 试管 3支；恒温水浴；紫外分光光度计；3、试剂0.2mol/L pH7.8 磷酸缓冲液（内含1%聚乙烯吡咯烷酮） ；0.1mol

2、/L H 2O2（用 0.1mol/L 高锰酸钾标定） 。【方法】1.酶液提取：藻液接种后每隔 1d，取 40ml 藻液（取时需摇匀），于 4，于 8 500 r/min （10 000g）下离心 10min 收集藻体，用 0.1mol/L 、pH7.8 磷酸钠缓冲液 3mL重悬浮，然后用冰浴超声破碎细胞， 破碎液在 4下 10200 r/min 离心 10min, 上清液即为SOD和 CAT粗酶液。2. 酶活性测定取10ml 试管 3支，其中 2支为样品测定管， 1支为空白管，按表 2-14-1 顺序加入试剂。表2-14-1紫外吸收法测定H 2O2样品液配置表管 号S1S2S3管号S0S1S

3、2粗酶液 (ml)0.20.20.2蒸馏水1.01.01.0/mlpH7.8 磷酸 (ml)1.51.51.5将 S0号管在沸水浴煮 1min以杀死酶液，冷却。然后将所有试管在25 预热后 ,逐管加入 0.3ml0.1mol/L 的 H O，每加完一管立即记时，并迅速倒入石英比色皿中，240nm 下测定吸光度，22每隔 1min 读数 1次，共测 4min，待 3支管全部测定完后，按下式计算酶活性。3.结果计算：以每分钟A 240减少 0.1的酶量为 1个酶活单位（U）。A240VT过氧化氢酶活性U/(g.min)=0.1 VStW.A 240= A S0.( AS1AS2 )2式中A S0加入煮死酶液的对照管吸光值；A S1, AS2样品管吸光值；Vt 粗酶提取液总体积（ml）；V 1测定用粗酶液体积（ml）；FW 样品鲜重（g）；0.1 A 240每下降 0.1为 1个酶活单位（ u）；t加过氧化氢到最后一次读数时间（min ）。【注】所用 H2O

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