实验七饥饿与饱食对肝糖原含量的影响

1、目目 录录实验七实验七饥饿与饱食对肝糖原含量饥饿与饱食对肝糖原含量的影响的影响目目 录录一、实验目的和要求一、实验目的和要求1.1.掌握饥饿与饱食对小白鼠肝糖原含量的影响掌握饥饿与饱食对小白鼠肝糖原含量的影响2.2.熟悉肝糖原提取鉴定的原理和方法熟悉肝糖原提取鉴定的原理和方法3.3.掌握低速常温离心机的使用，了解离心技术掌握低速常温离心机的使用，了解离心技术目目 录录二、实验原理二、实验原理 肝糖原是由许多葡萄糖分子聚合而成的肝糖原是由许多葡萄糖分子聚合而成的物质，是动物机体能够迅速动用的糖储存形物质，是动物机体能够迅速动用的糖储存形式之一。式之一。目目 录录二、实验原理二、实验原理 血血糖糖

2、肝糖原肝糖原 分解分解 糖原合成糖原合成 肝（肌）糖原肝（肌）糖原 胰高血糖素胰高血糖素 胰岛素胰岛素 目目 录录二、实验原理二、实验原理 提取提取:用三氯醋酸破坏肝组织的蛋白质和酶，使其用三氯醋酸破坏肝组织的蛋白质和酶，使其沉淀而保留糖原，再用乙醇将糖原从滤液中沉淀而保留糖原，再用乙醇将糖原从滤液中沉淀出来，溶于热水中，即为糖原溶液。沉淀出来，溶于热水中，即为糖原溶液。性质性质:糖原溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。糖原溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。定量定量:肝糖原在浓硫酸中水解为葡萄糖后，分子内肝糖原在浓硫酸中水解为葡萄糖后，分子内部脱水缩合成部脱水缩合成5-羟甲基羟甲基-呋喃甲醛。后者与呋喃

3、甲醛。后者与蒽酮反应生成蓝色化合物，在蒽酮反应生成蓝色化合物，在620nm波长下有波长下有最大光吸收。最大光吸收。目目 录录三、器材和试剂三、器材和试剂1.主要器材：手术盘、剪刀、镊子、天平、研钵、离心机、离心主要器材：手术盘、剪刀、镊子、天平、研钵、离心机、离心管、恒温水浴箱、分光光度计、微量进样器、试管及试管架、管、恒温水浴箱、分光光度计、微量进样器、试管及试管架、白瓷凹皿白瓷凹皿2.主要试剂：主要试剂：（1）蒸馏水）蒸馏水（2）5%三氯乙酸三氯乙酸（3）标准的葡萄糖溶液：）标准的葡萄糖溶液：0.5ml相当于相当于25ug葡萄糖葡萄糖（4）95%乙醇乙醇（5）碘试剂：）碘试剂：i2 100

4、mg 及及ki 200mg溶解于溶解于30ml蒸馏水中蒸馏水中（6）0.2%蒽酮试剂蒽酮试剂目目 录录四、操作四、操作目目 录录四、操作四、操作小白鼠小白鼠断头处死断头处死0.5g肝脏肝脏2ml 5%三氯乙酸三氯乙酸研钵中研为匀浆研钵中研为匀浆离心管离心管3ml 蒸馏水洗涤蒸馏水洗涤上清液转移至另一离心管中上清液转移至另一离心管中4000rpm 离心离心3min沉淀即为初步纯化糖原。加沉淀即为初步纯化糖原。加2ml h2o溶解，吹打混匀，即为肝糖原提取液溶解，吹打混匀，即为肝糖原提取液加加5ml 95%乙醇，混匀，静止乙醇，混匀，静止1min，4000r/min离心离心5min观察对比两观察对比两组溶液现象组溶液现象取取0.5ml定定量检测量检测 取取2滴于白瓷凹皿中滴于白瓷凹皿中观察、记录两组颜观察、记录两组颜色，与蒸馏水比较色，与蒸馏水比较加入碘试剂加入碘试剂1滴滴目目 录录四、操作四、操作目目 录录四、操作四、操作目目 录录四、操作四、操作目目 录录五、实验结果五、实验结果1.性质性质：糖原溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。：糖原溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。2.定量定量：糖原浓度糖原浓度(g /ml)=au/as cs 1/1.11肝糖原含量肝糖原含量=糖原浓度糖原浓度100/0.5液体体积液体体积106 注：注：1.11是用此法测得葡萄糖含量换算为糖原含是用此法测得葡萄糖