九江早餐豆浆中12种异黄酮含量的初步研究

1、2010-6-1 姓姓 名：杨波名：杨波 刘贤德刘贤德 指导老师：指导老师： 王春娥王春娥主要内容主要内容w一、引言一、引言w二、材料方法二、材料方法w三、研究进程三、研究进程w四、可预期的结果四、可预期的结果w五、创新点五、创新点w六、需要克服的困难六、需要克服的困难w七、参考文献七、参考文献1. 引言引言w大豆异黄酮（大豆异黄酮（soybean isoflavone）是大豆生长过程中形成的一类次生代谢产物，属于黄酮类化合物中的异黄酮类成分, 其母核为3- 苯基苯并吡喃酮，共有12种异黄酮, 分为游离型的苷元和结合型的糖苷两大类,分别是大豆苷（daidzin，d）、黄豆苷（glycitin，

2、gl）、染料木苷（genistin，g）、丙二酰化大豆苷（malonyldaidzin，md）、丙二酰化黄豆苷（malonylglycitin，mgl）、丙二酰化染料木苷（malonylgenistin，mg）、乙酰化大豆苷（acetyldaidzin，ad）、乙酰化黄豆苷（acetylglycitin，agl）、乙酰化染料木苷（acetylgenistin，ag）、大豆素（daidzein，de）、黄豆素（glycitein，gle）和染料木素（genistein，ge），其中苷元约占大豆异黄酮总量的2%3%,糖苷约占总量的97%98%。 最近美国营养和食品学会调查了美国和日本人的食谱，发现

3、豆类食品中的三羟基异黄酮是日本人癌症发病率低的主要原因之一。尤其是乳腺癌和前列腺癌，美国人的发病率是日本人的4倍。由于大豆异黄酮作为植物雌激素具有抑制和协同的双向调节作用，对改善女性体内的雌激素平衡、减轻妇女更年期不适症、预防癌症、防止脂质过氧化、预防糖尿病、保护心血管和防止骨质疏松等方面具有重要生理活性。在激素替代治疗、激素依赖性肿瘤以及其他肿瘤的防治方面有着广阔的应用前景, 有很高的保健价值。 正是由于大豆异黄酮许多的生理功效，国内已经将大豆异黄酮作为保健品、食品、特别是医药中间体，被用作食品添加剂、保健食品和药物组分。同时随着异黄酮的生理活性得到人们普遍认可，开展大豆异黄酮研究就具有了重

4、要的理论和实际意义，而其中测定保健品、大豆豆制品和大豆籽粒中大豆异黄酮的含量则成为研究热点之一。 张艳舫等（1）利用高效液相色谱法对市场上销售的5种国产和进口大豆异黄酮保健食品中12 种大豆异黄酮的含量进行测定。检测结果是产品1中为(6.930.22) mg/g 胶囊, 每粒的质量为0.5 g, 说明(3.470.11) mg/粒。产品2中为(38.600.41) mg 总异黄酮/g 胶囊, 每粒的质量为0.5g, 即(19.300.21) mg /粒 。产品3中为(82.790.85) mg/g胶囊, 每粒的质量为0.5 g, 说明(41.40.43) mg/g 胶囊。产品4中为(81.72

5、1.94) mg/g, 每片的质量为0.6g, 说明(49.01.16) mg/粒 。产品5中未检出任何一种大豆异黄酮。 杨威等（12）利用反相高效液相色谱法分别测定了成都牧甫、archer dariels midland co.、成都欣宇、广汉生物、杭州德爱、四川德阳保健品原料中大豆苷含量分别为。 153mg/g、193mg/g、151mg/g、150mg/g、142mg/g、150mg/g，染料木苷含量分别为267mg/g、221mg/g、230mg/g、258mg/g、230mg/g、230mg/g， 大豆素含量分别为11.6mg/g、0.30mg/g、2.2mg/g、13.7mg/g、

6、8.00mg/g、8.60mg/g，染料木素含量分别为21.6 mg/g、24.0mg/g、22.4mg/g、23.0mg/g、21.7mg/g、22.4mg/g. 魏锋等（7）利用hplc - dad - ms联用技术，以染料木素为对照,同时测定北京的市售大豆异黄酮类中药和保健食品中大豆苷、黄豆黄苷、染料木苷、大豆苷元、黄豆黄素和染料木素6种成分的含量。结果显示大豆苷、黄豆黄苷、染料木苷、大豆苷元、黄豆黄素、染料木素在样品1中含量分别为0. 05%、0. 05%、0. 04%、1. 67%、0. 93%、0. 25%，样品2中含量分别为0. 06 %、0. 04%、 0. 07%、1. 49

7、 %、 0. 87%、 0. 20%，样品3中含量分别为0. 07 %、0. 09%、0. 04% 、1. 59%、0. 94%、0. 21%，样品4中含量分别为0. 74%、0. 04%、3. 69% 、0. 32%、0. 15%、5. 70%， 样品5中含量分别为0. 03%、0. 52%、0. 90 %、0. 15%、0. 26%、0. 19%，样品6中含量分别为0. 08%、0. 33%、0. 71% 、0. 21%、0. 19%、0. 12%，样品7中含量分别为0. 17%、0. 47% 、0. 52% 、0. 33%、0. 13%、 0. 15%。 孙卫等（4）利用高效液相色谱法对

8、大豆异黄酮胶囊(华北制药, 批号: 070916 , 070917 , 070918)中的6种有效成分（大豆苷、黄豆黄苷、染料木苷、大豆苷元、黄豆黄、素染料木素） 的含量进行测定，结果显示070916批号中6种大豆异黄酮成分含量分别为12.712%、6.599% 2.845%、0.185%、0.168%、0.002% 异黄酮总含量为22.511%，070917批号中分别为12.594% 、6.487%、2.717%、0.187%、0.167%、0.016% 异黄酮总含量为22.168% ,070919批号中分别为12.930%、6.710%、2.953%、0.184%、0.172%、0.003

9、%，异黄酮总含量为22.952%。 返回 徐淑玲等（3）利用紫外分光光度法对来自周口粮油公司的大豆、大豆粕(cp : 43 %)、大豆粕(cp :48 %)来自广联饲料公司的大豆粉、膨化大豆以及来自吉安的赣中南小黑豆等不同豆类饲料原料中的大豆异黄酮含量进行测定，结果得出,不同豆类饲料原料中大豆异黄酮含量不同,大豆中大豆异黄酮含量为2004. 63 92. 98 (g/ g) ,大豆粕(cp :43 %) 中大豆异黄酮含量为2201. 73 36. 82 (g/ g) ,大豆粕(cp :48 %) 中大豆异黄酮含量为2265. 54 60. 07 (g/ g) ,大豆粉中大豆异黄酮为2333.

10、55 60. 00 (g/ g) ,膨化大豆中大豆异黄酮含量为2264. 75 24. 61 (g/ g) ,赣中南小黑豆中大豆异黄酮含量为2239. 44 24. 8 (g/ g) 。 张静等（5）利用高效液相色谱法对淡豆豉、黄大豆及黑大豆中染料木苷、大豆苷元、染料木素三种成分的含量进行检测，结果显示每g淡豆豉中染料木苷、大豆苷元、染料木素的含量为分别为 1076.8g、310.48g、141.93g， 每g黄大豆中三种异黄酮含量为580.23g、27.43g、14.99g，每g黑大豆中三种异黄酮含量为603.42g、13.48g、5.26g。 史桂玲（6）等利用紫外分光光度法对不同豆制品中

11、大豆异黄酮总含量进行测定并比较，这些豆制品包括豆水、豆腐、豆粕、豆芽、大豆、豆豉、豆浆、豆渣。测定结果显示每2.5g样品中含有的异黄酮总量分别为33.06、29.61 mg、36.68 mg、33.65 mg、18.61 mg、16.31 mg、16.75 mg、1.47 mg。 马方励（8）等利用反相高效液相色谱法测定4种酱油制品中黄豆苷元与染料木素这两种异黄酮苷元的含量，样品酱油由李锦记有限公司提供，结果显示黄豆苷元含量分别为0.0244%、0.0195%、0.006%、0.0045%，染料木素含量0.0288%、0.227%、0065%、0.0043%。 井乐刚（10）等 采用高效液相色

12、谱法检测、分析大豆乳清提取物中的染料木苷和大豆苷的含量。用novapak c18色谱柱分析大豆乳清提取物，流动相为甲醇一0.4磷酸水溶液(30：70，vv)，流速0.7 mlmin，柱温30 ，检测波长260 nm。试验结果表明，大豆乳清提取物中的大豆异黄酮含量为72.5，其组成以染料木苷和大豆苷为主，二者比例接近1：1. 何莉萍等（11）利用高效液相色谱法对浸泡后的大豆、浸泡豆子水、豆腐渣、熟豆浆、豆腐、黄浆水中游离大豆异黄酮总量占原料豆中游离大豆异黄酮总量的百分比进行测定，结果分别为：93.8%，0.50%，30.0%，66.9%，34.2%和20.3%。 返回 谢皓等（2）利用高效液相色

13、谱分析法,对收获于北京地区的53 个大豆品种种子中的3种异黄酮组分(大豆苷元、染料木素和黄豆黄素) 含量进行测定，结果表明,品种间异黄酮含量存在较大多样性,大豆苷元为39. 212 363. 65g/ g ,染料木素为77. 351 149. 50g/ g ,黄豆黄素为0. 051. 30g/ g ,3 种异黄酮总量为146. 732 845. 60g/ g。来自山西和山东品种的异黄酮含量显著高于其他地区的品种。 李辉等（9）利用hplc法对黑龙江省46个主栽大豆品种(系)和6个特用豆品种的大豆异黄酮含量进行分析,筛选出3个高异黄酮含量的主栽品种和2个特用豆品系。52个大豆品种经hplc分析测

14、定结果表明,黑龙江省大豆异黄酮含量的总含量变幅为12595284.6g/g。品种平均含量为2700g/g,含量低品种如绥农10,合丰25等,含量高品种如垦丰5,黑农37。从中得到异黄酮含量在4000g/g的栽培大豆品种(系) 5份。 目前，国内对大豆异黄酮含量的检测也主要集中对大豆籽粒，大豆制品及相关保健食品等方面。而其中在类似与检测豆浆中全部12种大豆异黄酮含量的研究相对较少，而江西九江地区在这一方面更是一个空白区域，因此本次课题选择对九江早餐豆浆中12种大豆异黄酮含量的检测方面进行初步的研究。w2.1 供试材料供试材料 本次研究的样品豆浆将在九江市内的浔阳区、庐山区及所管辖的湖口县这三个地

15、区进行取样，每个地区分别取三批样品，三批样品都取自三个区域内的不同地点，同时所取的样品豆浆尽可能是不同的品牌，每次取样的量大约为500ml。w2.2 主要仪器与试剂主要仪器与试剂 agilent 1200型高效液相色谱系统(包括四元泵、在线真空脱气机、dad检测器、柱温箱、自动进样器,zorbax sb-c18柱(5m, 4.6 mm x 15 cm)、 1.5 ml色谱自动进样小瓶、milli-q超纯水系统、离心机、kq-300db型数控超声波清洗器、多头控温搅拌器、分析天平、有机相针式滤器(13mm 0.45m)、移液器。 甲醇、乙酸、超纯水。标准品:7, 4二羟基异黄酮, 7,4二羟基异

16、黄酮7葡萄糖苷, 6 o乙酰基7, 4二羟基异黄酮-葡萄糖苷; 6o丙酰基7, 4二羟基异黄酮一糖苷, 5, 7, 4-三羟基异黄酮、5, 7,4-三羟基异黄酮一7一葡萄糖苷, 6o乙酰基一5, 7, 4一三羟基异黄酮-葡萄糖苷，6o丙酰基一5, 7, 4三羟基异黄酮葡萄糖苷, 7, 4二羟基6甲氧基异黄酮; 7,4-二羟基6甲氧基异黄酮-7-葡萄糖苷,6o乙酰基7，4二羟基6甲氧基异黄酮葡萄糖苷, 6 o丙酰基7, 4二羟基6甲氧基异黄酮葡萄糖苷。w 2.3 标准储备液与混合标准溶液的配制标准储备液与混合标准溶液的配制 标准储备液的配制:以少量甲醇分别将上述12个标准品溶解，转置于12个10

17、 ml容量瓶，甲醇定容，-20保存备用。混合标准溶液的配制:取12种单标储备液各1 ml于25 ml容量瓶，以甲醇定容，-20保存备用。w2.4 样品制备样品制备 将取自三个区域内的共计27个样品豆浆分别按照地区的不同进行编号，然后对27个样品进行烘干处理，精确测量烘干后豆浆粉末的干重。取样品豆浆10ml置于15 ml离心管，以80%甲醇溶液定容至10 ml，于50 超声辅助提取1 h，经12,000 rpm离心10 min，取上清液约1 ml过0.45 m滤膜注入agilent自动进样专用小瓶(1.5 ml)，-20保存待上机检测.每个样品需重复测定3次。w2.5 色谱条件色谱条件 色谱柱:

18、。zorbax sb一c18柱(5 m, 4.6 mm、15 cm), 36的柱温，检测波长为254 nm(dad)，进样量为10 l，流动相为0.1% (v/v)乙酸水溶液(a)和100%甲醇(b)，流速为2 ml/min,梯度洗脱为02 min, 27% b (v/v)、2-3 min, 2738% b、3-10 min, 38% b、1012 min, 3839%b、1214 min, 39% b、1415 min, 3927% b。柱后3 min。w2.6 统计分析统计分析 采用软件sas 9.0，参考试验统计方法(盖钧锐，2000)与sas统计分析及应用(黄燕和吴平，2006)，根据

19、不同的试验设计按summary, corr与glm程序进行统计分析。w5 月 - 9 月 检索、阅读相关文献，熟悉实验方法、并设计实验。w9 月 - 10月 到指定的取样点进行取样以及对样品进行相关的测定。w11月 2 月 整理数据，分析实验结果最后撰写毕业论文。 4.可预期的结果可预期的结果w 可以测定得到九江地区不同批次早餐豆浆中几种大豆异黄酮的含量。 w （1）九江地区早餐豆浆中12种大豆异黄酮含量测定这方面的研究中，至今仍未有过相关的期刊或文献报道过，因此本项研究正好添补了九江地区早餐豆浆中大豆异黄酮含量检测领域这方面的空白。w （2）可以为九江的食品质量控制和检测方面提供参考依据同时

20、也可为九江市民对早餐豆浆的选择方面提供参考依据。w （3）将来如果九江地区实施对豆浆这类豆制加工品进行营养成分标识化的政策时，本项研究也可为以后的标识化提供相关的信息资源。w（1）在取样的地点的选取上，所选取的取样点能否真正代表整个九江地区，地点选择的过于集中无法代表整个九江地区，分散开多点取样的话虽然能够解决这个问题，但是却会增加本次研究的成本，如何根据自身所现有的条件合理科学的选择取样点是首先要解决的问题。w（2）在大部分豆制类加工品中豆浆中异黄酮含量相对含量是比较低的，要准确的检测出豆浆中12种大豆异黄酮的含量，在方法上就必须有所改善，如何在色谱条件、检测波长、流动相、柱温、流速、进样量等各个方面进行优化使其更快更准确的检测出豆浆中异黄酮的含量同样也是一个难题。w（3）在材料的提取方面由于其他各种原因，提取条件很难做到完全稳定。w1 张艳舫, 王晶, 傅博强.保健食品中大豆异黄酮含量的高效液相色谱法测定. 食品科技.2008，8：191195w2 谢皓，gyorgy vegvari ，gergo sandor，南张杰，陈学珍.北京地区不同大豆品种异黄酮含量比较研究.中国粮油学报 2009，24(5): 2829w3徐淑玲,梁海平,熊智辉. 不同豆类饲料原料中大豆异黄酮含量的测定. 养殖与饲料.2006