第20讲分离以尿素为氮源的微生物ppt课件

1、2021年年10月选考题月选考题32.【加试题】【加试题】(7分分)请回答从土壤中分别产脲酶细菌和脲请回答从土壤中分别产脲酶细菌和脲酶固定化实验的有关问题酶固定化实验的有关问题1LB固体培育基：取适量的蛋白胨、酵母提取物、固体培育基：取适量的蛋白胨、酵母提取物、NaCl，参与一定量的蒸馏水溶解，再加，参与一定量的蒸馏水溶解，再加 ，灭菌，灭菌备用。备用。2尿素固体培育基：先将适宜浓度的尿素溶液尿素固体培育基：先将适宜浓度的尿素溶液,用用 灭菌过的灭菌过的G6玻璃砂漏斗过滤，由于玻璃砂漏斗过滤，由于G6玻璃砂漏斗玻璃砂漏斗 ，故用于过滤细菌。然后将尿素溶液参与到曾经灭菌的含故用于过滤细菌。然后将

2、尿素溶液参与到曾经灭菌的含有酚红的培育基中，备用。有酚红的培育基中，备用。3取适量含产脲酶细菌的取适量含产脲酶细菌的10-4、10-5两种土壤稀释液，两种土壤稀释液，分别涂布接种到分别涂布接种到LB固体培育基和尿素固体培育基上，培固体培育基和尿素固体培育基上，培育育48h，推测固体培育基上生长的菌落数最少的是，推测固体培育基上生长的菌落数最少的是 (A. 10-5稀释液稀释液+尿素固体培育基尿素固体培育基 B. 10-5稀释液稀释液+LB固体固体培育基培育基 C. 10-4稀释液稀释液+尿素固体培育基尿素固体培育基 D. 10-4稀释稀释液液+LB固体培育基固体培育基)。在尿素固体培育基上产脲

3、酶细菌菌落。在尿素固体培育基上产脲酶细菌菌落周围出现周围出现 ，其缘由是细菌产生的脲酶催化尿素分，其缘由是细菌产生的脲酶催化尿素分解产生解产生 所致。所致。4制备固定化脲酶时，用石英砂吸附脲酶，装柱。再制备固定化脲酶时，用石英砂吸附脲酶，装柱。再用蒸馏水洗涤固定化酶柱，其作用是用蒸馏水洗涤固定化酶柱，其作用是 。琼脂琼脂 高压蒸汽高压蒸汽 孔径小，孔径小，细菌不能滤过细菌不能滤过 A A 红色环带红色环带 氨氨( (或或NH3) NH3) 除去游离的脲酶除去游离的脲酶;实验2 分别以尿素为氮源的微生物;一、实验原理一、实验原理1. 菌种特点：含有菌种特点：含有_，可以经过降解，可以经过降解_又

4、称为又称为_作为作为2. 其生长的氮源。反响方程式为其生长的氮源。反响方程式为3. 2. 培育基：以培育基：以_为独一为独一_的培育基培育，以的培育基培育，以_为对照。为对照。4. 3. 分别的方法：分别的方法：_，获得的菌落，通常以每个培育皿，获得的菌落，通常以每个培育皿中含有中含有_个以内的单菌落最为适宜。个以内的单菌落最为适宜。脲酶脲酶尿素尿素尿素尿素氮源氮源LB全营养培育基全营养培育基涂布分别法涂布分别法脲脲20大量的尿素的存在会对环境有怎样影响？大量的尿素的存在会对环境有怎样影响？假设土壤中有许多尿素，在自然界较高温度下会被水解成氨，假设土壤中有许多尿素，在自然界较高温度下会被水解成

5、氨，氨使土壤碱化，氨还与氨使土壤碱化，氨还与SO42-等离子构成化合物，使土壤板结。等离子构成化合物，使土壤板结。含有脲酶的细菌利用了所构成的氨，有利于自然界中氮的循环。含有脲酶的细菌利用了所构成的氨，有利于自然界中氮的循环。有脲酶的细菌在生态稳态上的作用有脲酶的细菌在生态稳态上的作用;. LB全营养固体培育基和尿素固体培育基的配制与灭菌课本全营养固体培育基和尿素固体培育基的配制与灭菌课本26页页二实验步骤二实验步骤1配制配制尿素培育基实验组尿素培育基实验组 葡萄糖葡萄糖 0.025g 0.025g NaCl 0.12g NaCl 0.12g K2HPO4 0.12g K2HPO4 0.12g

6、 琼脂糖琼脂糖 0.5g 0.5g 酚红酚红 0.25g 0.25g 尿素尿素 10ml 10ml 水水LBLB全营养固体培育基对照组全营养固体培育基对照组 蛋白胨：蛋白胨： 0.25g 0.25g 酵母提取液：酵母提取液： 0.12g 0.12g NaCl NaCl： 0.25g 0.25g 琼脂：琼脂： 0.5g 0.5g 水水 为什么用琼脂糖替代琼脂？为什么用琼脂糖替代琼脂？ 由于琼脂是未被纯化的混合物，内含一定量的由于琼脂是未被纯化的混合物，内含一定量的含氮化合物。假设用琼脂固化培育基，会为细含氮化合物。假设用琼脂固化培育基，会为细菌提供一定量的非尿素类氮源，这样会在尿素菌提供一定量的

7、非尿素类氮源，这样会在尿素固体培育上产生大量以非尿素为氮源的细菌，固体培育上产生大量以非尿素为氮源的细菌，不利于以尿素为氮源的细菌的挑选，故用纯化不利于以尿素为氮源的细菌的挑选，故用纯化的琼脂糖而不用琼脂做固化剂的琼脂糖而不用琼脂做固化剂;.倒平板倒平板.制备一定浓度梯度的土壤稀释液细菌悬液制备一定浓度梯度的土壤稀释液细菌悬液. LB全营养固体培育基和尿素固体培育基的配制与灭菌课本全营养固体培育基和尿素固体培育基的配制与灭菌课本26页页三实验步骤三实验步骤取样时，尽量只取悬液取样时，尽量只取悬液;.倒平板倒平板.制备一定浓度梯度的土壤稀释液细菌悬液制备一定浓度梯度的土壤稀释液细菌悬液.稀释涂布

8、分别法分别细菌稀释涂布分别法分别细菌. LB全营养固体培育基和尿素固体培育基的配制与灭菌课本全营养固体培育基和尿素固体培育基的配制与灭菌课本26页页.培育察看倒置，培育察看倒置，37 24-48h无菌，无菌，0.1ml，玻璃刮刀，玻璃刮刀三实验步骤三实验步骤取样时，尽量只取悬液取样时，尽量只取悬液察看景象察看景象LB全营养培育基：菌落多而复杂全营养培育基：菌落多而复杂尿素培育基：菌落少，单一，菌落周围出现红色区域尿素培育基：菌落少，单一，菌落周围出现红色区域;以下关于以尿素为氮源微生物培育与分别的相关表达正确的选项是以下关于以尿素为氮源微生物培育与分别的相关表达正确的选项是()对尿素溶液进展灭

9、菌的最适方法是紫外灯照射灭菌对尿素溶液进展灭菌的最适方法是紫外灯照射灭菌(12浙江改编浙江改编)培育基分装到培育皿后进展灭菌培育基分装到培育皿后进展灭菌(13江苏江苏)取单菌落适当稀释取单菌落适当稀释,用划线分别法接种于固体培育基外表用划线分别法接种于固体培育基外表,在在37 培育箱中培培育箱中培育育24 h,使其均匀生长使其均匀生长,布满平板布满平板(13全国全国)细菌培育实验中进展计数时细菌培育实验中进展计数时,应计数的是接种了各个稀释度样品的培育基上应计数的是接种了各个稀释度样品的培育基上的菌落数的菌落数(14浙江浙江)可以采用涂布分别法来测定活菌数量可以采用涂布分别法来测定活菌数量(1

10、5全国改编全国改编)从土壤中挑选产脲酶细菌从土壤中挑选产脲酶细菌,运用的选择培育基应以尿素为独一氮源运用的选择培育基应以尿素为独一氮源(16四川改四川改编编)考点诊断考点诊断答案答案: :;(2021台州温岭中学测试台州温岭中学测试)以下图是以下图是“分别以尿素为氮源的微生物分别以尿素为氮源的微生物实验的根本流程，请回答以下问题：实验的根本流程，请回答以下问题：(1)A过程配制的培育基有过程配制的培育基有_和和_。配。配制过程中要用制过程中要用_作为培育基的凝固剂，其目的是为了作为培育基的凝固剂，其目的是为了_。B过程尿素溶液用过程尿素溶液用_使之无菌。该实验选用的是涂布分别法，使之无菌。该实

11、验选用的是涂布分别法，而非划线分别法的益处是而非划线分别法的益处是_。(2)有关有关E、F过程，以下实验操作中不正确的选项是过程，以下实验操作中不正确的选项是()A. 将土壤用无菌水进展一系列的梯度稀释将土壤用无菌水进展一系列的梯度稀释B. 同一浓度的土壤稀释液应至少涂布三个平板同一浓度的土壤稀释液应至少涂布三个平板C. 可将未接种的培育基在一样条件下培育作为对照可将未接种的培育基在一样条件下培育作为对照D. 用参与刚果红指示剂的培育基可挑选出能分解尿素的细菌用参与刚果红指示剂的培育基可挑选出能分解尿素的细菌(3)该实验的结果：该实验的结果：A同窗从培育基中挑选出大约同窗从培育基中挑选出大约1

12、50个菌落，而个菌落，而其他同窗只挑选出大约其他同窗只挑选出大约50个菌落。个菌落。A同窗的实验结果产生的缘由同窗的实验结果产生的缘由不能够是不能够是()土样不同土样不同 B. 培育基污染培育基污染 C. 操作失误操作失误 D. 没有设置对照没有设置对照LBLB固体培育基固体培育基尿素固体培育基尿素固体培育基琼脂糖琼脂糖保证培育基中只需尿素一种含氮物质保证培育基中只需尿素一种含氮物质G6G6玻璃砂漏斗过滤玻璃砂漏斗过滤使分别效果更好使分别效果更好DD;4. 操作步骤：操作步骤：留意培育基的成分和灭菌法留意培育基的成分和灭菌法留意条件，稀释方法留意条件，稀释方法玻璃刮刀的灭菌法玻璃刮刀的灭菌法;1、1高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌 无菌水无菌水2涂布涂布 使水蒸汽凝结成的水滴留在培育皿盖上，假设正放，会使使水蒸汽凝结成的水滴留在培育皿盖上，假设正放，会使已构成的菌落相互混杂已构成的菌落相互混杂 37 需求需求 3C21目的菌目的菌 选择选择 2化合物化合物A 异养需氧型异养需氧型 3减少减少 添加添加4划线划线 5血细胞计数血细胞计数