第3章 细胞生物学研究方法

1、1细胞生物学研究方法细胞生物学研究方法2 光学显微镜：以可见光（或紫外线）为光源。光学显微镜：以可见光（或紫外线）为光源。 电子显微镜：以电子束为光源。电子显微镜：以电子束为光源。肉眼：肉眼：0.2 mm; 光镜：光镜：0.2 m m; 电镜：电镜：0.2 nm31. 4（The Light Microscope）1) 1) 结构结构光学显微镜光学放光学放大系统大系统目镜目镜物镜物镜照明照明系统系统聚光镜聚光镜光源光源机械支持系统机械支持系统显微镜的分辨力由哪部分决定？显微镜的分辨力由哪部分决定？5分辨率分辨率 =0.61X0.5/1.4=0 63）总放大率：总放大率：74)4) 目镜的目镜的

2、 作用：作用： 与显微镜的分辨率无关，它只是把物象第与显微镜的分辨率无关，它只是把物象第二次放大，使眼睛便于观察。二次放大，使眼睛便于观察。 目镜只能将物镜已经分辨的影像进行放大，目镜只能将物镜已经分辨的影像进行放大，无法观察到未被物镜分辨的细节。无法观察到未被物镜分辨的细节。问题：使用问题：使用40/0.6540/0.65物镜时，应选配适宜目镜物镜时，应选配适宜目镜5 5）应用：经过固定染色后，切片标本的观察。）应用：经过固定染色后，切片标本的观察。8移动臂移动臂蜡或树脂包埋的样品蜡或树脂包埋的样品切片用钢刀切片用钢刀样品切片蜡带样品切片蜡带伸展在盖玻片和伸展在盖玻片和载玻片之间的切片载玻片

3、之间的切片切片机切片机石蜡切片石蜡切片固定剂（甲固定剂（甲醛）醛）乙醇脱水乙醇脱水-二甲苯二甲苯-石蜡包埋石蜡包埋9VWAp27 TUNEL 10染色细胞染色细胞未染色细胞未染色细胞光线通过染色的细胞，光线通过染色的细胞，振幅变低。光线通过振幅变低。光线通过未染色的细胞，振幅未染色的细胞，振幅不变，但相位发生改不变，但相位发生改变。变。利用光利用光衍射和干涉衍射和干涉特特性，通过添加物镜后性，通过添加物镜后焦面上焦面上相板相板和聚光镜和聚光镜上的上的环状光栅环状光栅，使相，使相位差变为振幅差，提位差变为振幅差，提高高明暗对比。明暗对比。11在构造上，相差显微镜在构造上，相差显微镜有不同于普通光

4、学显微有不同于普通光学显微镜两个特殊之处。镜两个特殊之处。环形光阑环形光阑（annular diaphragm）：位于光）：位于光源与聚光器之间。源与聚光器之间。相位板相位板（annular phaseplate）：物镜中）：物镜中加了涂有氟化镁的相位加了涂有氟化镁的相位板，可将直射光或衍射板，可将直射光或衍射光的相位推迟光的相位推迟1/4。12Figure 3-2. Interference between light waves. When two light waves combine in phase, the amplitude of the resultant wave is la

5、rger and the brightness is increased. Two light waves that are out of phase partially cancel each other and produce a wave whose amplitude, and therefore brightness, is decreased. 13 衍射光的相位比直射光推迟衍射光的相位比直射光推迟1/4波长波长 明反差（负反差）明反差（负反差）：将：将直射光推迟直射光推迟1/4入入，使，使直射光和衍射光，维持同一相位，由于干涉现直射光和衍射光，维持同一相位，由于干涉现象，合成光的

6、振幅是二者象，合成光的振幅是二者振幅之和振幅之和，而背景只，而背景只有直射光，所以被检物体比背景亮。有直射光，所以被检物体比背景亮。 暗反差（正反差）暗反差（正反差）：将：将衍射光推迟衍射光推迟1/4入入，由，由于直射光和衍射光的干涉作用，合成光的振幅于直射光和衍射光的干涉作用，合成光的振幅是直射光与衍射光是直射光与衍射光的差的差，而背景只有直射光，而背景只有直射光，所以背检物体比背景暗。所以背检物体比背景暗。优点：可对未经染色的标本和活细胞进行显微内优点：可对未经染色的标本和活细胞进行显微内部结构的观察，提高分辨率部结构的观察，提高分辨率143. 3. 微分干涉差显微镜微分干涉差显微镜 （d

7、ifferential-interference microscopy）利用的是利用的是偏振光偏振光，这些光经棱镜折射后分成，这些光经棱镜折射后分成两束，在不同时间经过样品的相邻部位，然两束，在不同时间经过样品的相邻部位，然后在经过另一棱镜将这两束光汇合，从样品后在经过另一棱镜将这两束光汇合，从样品中厚度上的微小区别就会转化成明暗区别，中厚度上的微小区别就会转化成明暗区别，增加了增加了样品反差样品反差并且具有并且具有很强的立体感很强的立体感。一些较大的细胞器，如核、线粒体等，立体一些较大的细胞器，如核、线粒体等，立体感特别强，适合于显微操作，影像具有感特别强，适合于显微操作，影像具有浮雕浮雕感

8、。感。15丁达尔效应原理丁达尔效应原理分辨力：分辨力：0.004um利用特殊聚光器，使利用特殊聚光器，使照明光线照明光线不不能进入能进入物镜物镜，经过标本的，经过标本的散射光散射光进入物镜放大。进入物镜放大。观察样品结构的观察样品结构的明亮轮廓明亮轮廓，如，如活活细胞细胞内的细胞核、线粒体等，但内的细胞核、线粒体等，但分辨不清内部分辨不清内部结构结构。16 (A) 普通光学显微镜普通光学显微镜 (B) 相差显微镜相差显微镜 (C) 微分干涉差显微镜微分干涉差显微镜 (D)暗视野显微技术暗视野显微技术. 1718倒置：物镜在载物台之下，照明系统倒置：物镜在载物台之下，照明系统在在载物台载物台之上

9、，用于观察培养的之上，用于观察培养的活细胞活细胞，通常具有，通常具有相差相差物镜。物镜。19原理：原理：荧光物质荧光物质经经波长较短波长较短的光线照射后分子被的光线照射后分子被激活激活，吸收能量吸收能量后处于后处于激发态激发态释放能量，其能量一部释放能量，其能量一部分转化为热能，大部分能量则以波长较长的光分转化为热能，大部分能量则以波长较长的光能能荧光荧光形式辐射出来。形式辐射出来。应用：检测细胞上的特异荧光染料。应用：检测细胞上的特异荧光染料。20第一滤第一滤光片光片第二滤第二滤光片光片平面反射镜平面反射镜物镜物镜仪器：光源，仪器：光源，滤色装置滤色装置高高压压汞汞灯灯2122荧光标记物：荧

10、光标记物：异硫氰酸荧光素异硫氰酸荧光素(FITC), rhodamine.23多种荧光探针多种荧光探针着丝点着丝点:红色红色DNA：蓝色：蓝色纺锤体微管：绿色纺锤体微管：绿色DAPI即4,6-二脒基-2-苯基吲哚(4,6-diamidino-2-phenylindole) 24257. 激光扫描共聚焦显微镜激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope )26原理原理原理原理 激光光源通过一个微小激光光源通过一个微小缝隙，打到一个缝隙，打到一个二向色二向色镜镜。由镜子反射的光线。由镜子反射的光线通过通过物镜物镜、聚焦在样品、聚焦在样品的的一个层面上一

11、个层面上。样品被。样品被激发后发出较长波长的激发后发出较长波长的光，通过物镜成像、聚光，通过物镜成像、聚焦在显微镜中的一个焦在显微镜中的一个针针孔缝隙孔缝隙中，而来自中，而来自其它其它层面的光线被挡板挡住层面的光线被挡板挡住。图像通过信号放大传输图像通过信号放大传输到计算机中。到计算机中。 27特点：单色激光形成的点光源特点：单色激光形成的点光源光点扫描光点扫描二维图像二维图像改变焦平面改变焦平面三维重建处理三维重建处理优点：优点：使图像异常清晰，提高灵使图像异常清晰，提高灵敏度和分辨率敏度和分辨率28肠胚期果蝇胚胎细胞微丝的常规和肠胚期果蝇胚胎细胞微丝的常规和confocal荧光显微镜的图像

12、比较荧光显微镜的图像比较29 透射电镜（透射电镜（transmission electron microscope，TEM） 扫描电镜（扫描电镜（scanning electron microscope， SEM）30 原理：原理：电磁透镜电磁透镜: 分辨率：分辨率：0.2nm，生物样品：生物样品：1nm31 原理：原理：电磁透镜电磁透镜: 分辨率：分辨率：0.2nm，生物样品：生物样品：1nm32 原理：原理：电磁透镜电磁透镜: 分辨率：分辨率：0.2nm，生物样品：生物样品：1nm33各种光及电子束的波长各种光及电子束的波长341）结构结构35投影镜投影镜直接观察物像直接观察物像聚光镜聚光

13、镜物镜物镜目镜目镜363）样品制备：）样品制备：固定固定：戊二醛和四氧化锇戊二醛和四氧化锇乙醇、丙酮系列乙醇、丙酮系列脱水脱水环氧树脂环氧树脂包埋包埋超薄超薄切片切片：4050nm电子电子染色染色：醋酸铀、柠檬醋铅醋酸铀、柠檬醋铅增加反差增加反差37铜网铜网3839 电镜观察的样品不能太厚，当样品太厚时电子不电镜观察的样品不能太厚，当样品太厚时电子不能穿透，就需要把样品本身去掉，此技术是便于能穿透，就需要把样品本身去掉，此技术是便于透射电子显微镜透射电子显微镜观察的一种技术。观察的一种技术。亦称冰冻断裂亦称冰冻断裂(freeze-fracture)，是研究，是研究生物生物膜内部结构膜内部结构的

14、一种有用的技术，关于膜结构的许的一种有用的技术，关于膜结构的许多资料即是利用这种方法取得的。多资料即是利用这种方法取得的。40冷冻冷冻-断裂断裂-蚀刻蚀刻-复型复型-融化组织融化组织将标本于将标本于-100干冰中或干冰中或-196液氮中，超低温液氮中，超低温冰冻。冰冻。然后用冷刀骤然将标本冲断开，升温后冰在然后用冷刀骤然将标本冲断开，升温后冰在真空真空条条件下迅即件下迅即升华升华，暴露出了断裂面结构，暴露出了断裂面结构蚀刻蚀刻(etching)。技术过程技术过程蚀刻蚀刻断裂断裂41剩剩复型膜复型膜观察观察垂直喷垂直喷碳碳加固加固融组织融组织立体感强，分辨立体感强，分辨率高，主要用于率高，主要用

15、于生物膜结构的研生物膜结构的研究。究。复型膜：样品用重金属复型膜：样品用重金属倾斜倾斜投影后再用投影后再用碳垂直碳垂直喷镀喷镀一次，以形成一层一次，以形成一层连续的碳膜连续的碳膜，然后以，然后以强力的消化强力的消化剂剂将生物样品腐蚀掉。这样就只剩下一层可在透射将生物样品腐蚀掉。这样就只剩下一层可在透射电镜下观察的带有电镜下观察的带有重金属造成的影像的碳膜重金属造成的影像的碳膜，称为，称为复型膜。复型膜。42P: protoplasmic faceE: exoplasmic face原生质面原生质面外质面外质面43冷冻蚀刻复型技术冷冻蚀刻复型技术制备的细胞断面制备的细胞断面4445透镜：汇聚透镜

16、：汇聚电子束电子束偏转器扫描偏转器扫描发生器发生器透镜透镜在观察在观察屏成像屏成像检测器检测器： 1 1） 原理原理： 电子探针受扫描发生器电子探针受扫描发生器控制，在控制，在样品表面样品表面逐点逐线逐点逐线地地扫描扫描，样品被，样品被电子轰击电子轰击所所产生的产生的二次电子信号二次电子信号被收集、被收集、转换、放大，在转换、放大，在荧光屏荧光屏上上同同步扫描步扫描成像。样品发射成像。样品发射电子电子多多的地方，在荧光屏上相应的地方，在荧光屏上相应的点就的点就亮亮，反之则暗。，反之则暗。加热的灯加热的灯丝丝(电子电子发射源发射源)462）样品制备样品制备： 固定：戊二醛和四氧化锇固定：戊二醛和

17、四氧化锇乙醇、丙酮系列脱水乙醇、丙酮系列脱水CO2临界点干燥法：临界点干燥法： 防止样品脱水干燥中表面张力造成的变形防止样品脱水干燥中表面张力造成的变形喷镀：为了改善二次电子发放的性质及防止电荷喷镀：为了改善二次电子发放的性质及防止电荷积累（金或铂）积累（金或铂）47蛙内耳毛细胞扫描电镜投影图蛙内耳毛细胞扫描电镜投影图成像具强烈的成像具强烈的立立体感体感，适于观察精适于观察精细的立体表面结构。细的立体表面结构。分辨率较低分辨率较低（3nm），不能），不能 观察内部结构。观察内部结构。48 扫描探针（金属针尖）扫描探针（金属针尖）对对样品表面样品表面进行扫描。进行扫描。 针尖和样品之间会产针尖和

18、样品之间会产生生隧道电流隧道电流。 针尖和样品针尖和样品间间距离距离的的微小变化转换为微小变化转换为隧道隧道电流电流的变化。的变化。49将探针接近被测样品，并在其间加将探针接近被测样品，并在其间加2-10伏的小电压，伏的小电压，当两者距离十分小时当两者距离十分小时（约（约1纳米），纳米），电子就可因量子隧电子就可因量子隧道效应在没有接触的道效应在没有接触的针尖和样品间针尖和样品间流动，即产生了流动，即产生了隧穿电隧穿电流流。保持两者的保持两者的距离不变距离不变，隧穿电流也，隧穿电流也保持不变保持不变。隧穿电流对针尖和样品间距离的隧穿电流对针尖和样品间距离的微小变化异常敏感微小变化异常敏感如针尖

19、在样品表面扫描时改变如针尖在样品表面扫描时改变1个原子大小的间距个原子大小的间距，隧隧穿电流穿电流即可变化即可变化1000倍倍5051 优点：优点： 高分辨率高分辨率。具有原子级的空间分辨率。横向空间。具有原子级的空间分辨率。横向空间分辨率为分辨率为0.1nm，纵向为，纵向为0.001nm。 不需任何透镜，体积小。不需任何透镜，体积小。 缺点：缺点：是其检查的对象必须是是其检查的对象必须是导电体导电体，而生物样品的导，而生物样品的导电性很差，这是限制其在生命科学研究中应用的电性很差，这是限制其在生命科学研究中应用的主要因素。主要因素。52 不再要求样品是导电不再要求样品是导电体体 用于检查用于

20、检查不导电不导电的样的样品的品的形貌形貌并能得到清并能得到清楚的图像。楚的图像。 但分辨率比扫描隧道但分辨率比扫描隧道显微镜显微镜要低，比扫描要低，比扫描电镜高。电镜高。53当探针尖当探针尖端端与样与样品品表面接表面接触触时时，依其，依其作用力作用力作作用用( (吸力或斥力吸力或斥力) )，使得，使得悬悬臂臂弯弯曲曲，依依据据角度的角度的变变化，造成化，造成二二极体极体电电流改流改变变。由由测测量量电电流的流的变变化可得知化可得知悬悬臂臂弯弯曲程度，曲程度，输输入入电脑产电脑产生生样样品表面三品表面三维维影像影像。不不论绝缘体论绝缘体、半、半导体导体、导体导体都一都一样样可以可以获得获得三三维

21、维空空间间影像。影像。 54原子力显微镜原子力显微镜肺癌肺癌A549细胞细胞55原理：原理：利用细胞内各种成分的利用细胞内各种成分的大小、形大小、形状和密度状和密度不同，采用不同的离心不同，采用不同的离心力将之分离。力将之分离。分类：差速离心分类：差速离心密度梯度离心密度梯度离心2.2 2.2 细胞组分的分析方法细胞组分的分析方法56原理：主要根据被分离物原理：主要根据被分离物质的质的大小差异大小差异。体积大。体积大的沉降得快，反之沉降的沉降得快，反之沉降得慢。得慢。用途：用途：分离分离体积相差悬殊体积相差悬殊的细胞和细胞器。的细胞和细胞器。57-介质介质密度均一密度均一，递增速度逐级离心，递

22、增速度逐级离心58组织匀浆组织匀浆低速离心低速离心1,000g 10分分沉淀含：沉淀含：细胞核细胞核59沉淀含：沉淀含：线粒体、溶线粒体、溶酶体、过氧化物酶体酶体、过氧化物酶体将上清中速离心将上清中速离心20,000g 10分分60将上清高速离心将上清高速离心80,000g 1小时小时沉淀含：沉淀含：微粒体小泡微粒体小泡61 微粒体是指在细胞匀浆和差速离心过程中获得的微粒体是指在细胞匀浆和差速离心过程中获得的由由破碎的内质网自我融合破碎的内质网自我融合形成的近似球形的形成的近似球形的膜囊膜囊泡状泡状结构结构 包含内质网膜和核糖体两种基本成分。包含内质网膜和核糖体两种基本成分。62将上清超速离心

23、将上清超速离心150,000g 3小时小时沉淀含：沉淀含：核糖体核糖体,病毒大分子病毒大分子63 用介质在离心管内形成一用介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯连续或不连续的密度梯度度，将细胞混悬液或匀浆置于，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部介质的顶部，通过，通过离心力场的作用使细胞和细胞成分分层、分离。离心力场的作用使细胞和细胞成分分层、分离。 类型：速度沉降、等密度沉降。类型：速度沉降、等密度沉降。 常用介质：氯化铯、蔗糖、多聚蔗糖。常用介质：氯化铯、蔗糖、多聚蔗糖。 分离活细胞的介质要求：分离活细胞的介质要求： 能产生密度梯度，且密度高时，粘度不高；能产生密度梯度，且密度高时，粘度不高

24、； PH中性或易调为中性；中性或易调为中性； 浓度大时渗透压不大；浓度大时渗透压不大； 对细胞无毒对细胞无毒。特点：特点：常用常用蔗糖或甘油蔗糖或甘油制备轻微的制备轻微的连续密度的介质连续密度的介质，将待分离的样品加在离心管的最上层。在离心将待分离的样品加在离心管的最上层。在离心过程中，过程中，体积、密度不同体积、密度不同的颗粒就会以不同的的颗粒就会以不同的沉降带分开，最后收集各区带。沉降带分开，最后收集各区带。用途：分离用途：分离体积体积大小大小稍微不同稍微不同、密度相近的颗粒。、密度相近的颗粒。65特点特点 在密度连续梯度的介质中，将细胞匀浆置于介质的顶在密度连续梯度的介质中，将细胞匀浆置

25、于介质的顶部，离心使匀浆中的不同组分沉降到与部，离心使匀浆中的不同组分沉降到与自身密度相等自身密度相等的介质的介质处，并停留在那里达到平衡。各沉降带可分别处，并停留在那里达到平衡。各沉降带可分别收集。收集。用途：用途：分离密度不同分离密度不同的颗粒的颗粒常用介质：蔗糖常用介质：蔗糖(5%20%) 、CsCI66速度速度沉降沉降离心离心等密等密度离度离心心样品蔗糖的稳定梯度慢速沉降成分快速沉降成分样品蔗糖的不连续梯度低浮力密度成分高浮力密度成分68 优点：可以对细胞内的各种细胞器的化学组成进优点：可以对细胞内的各种细胞器的化学组成进行直接的定量分析。行直接的定量分析。 缺点：缺点：1.分离细胞器

26、时难免混入少量其他的细胞器。分离细胞器时难免混入少量其他的细胞器。2.某种细胞器的表面可能吸附了其他细胞器中某某种细胞器的表面可能吸附了其他细胞器中某种化学物质种化学物质。 69通过一些通过一些显色剂显色剂与某些特殊基团与某些特殊基团特异性结合的性质，利用特异性结合的性质，利用细胞化细胞化学反应学反应来显示细胞内某组分的分来显示细胞内某组分的分布及强弱的技术。布及强弱的技术。核酸、糖类、脂类、蛋白质核酸、糖类、脂类、蛋白质70Feulgen染色的洋葱根尖细胞染色的洋葱根尖细胞Feulgen染色染色:鉴定鉴定DNA紫红色紫红色 71甲基绿甲基绿-派洛宁染色蛙红血细胞派洛宁染色蛙红血细胞甲基绿甲基

27、绿-派洛宁染色：派洛宁染色：DNA显示显示绿色绿色与与RNA显示显示红色红色。72PAS染色染色（过碘酸雪夫染色）细胞含糖原区呈紫红色细胞含糖原区呈紫红色 PAS染色法染色法（Periodic Acid-Schiff stain） ：过碘酸雪夫染色过碘酸雪夫染色-鉴定多糖呈现鉴定多糖呈现紫红色紫红色 73细胞内脂类显示细胞内脂类显示橘黄色橘黄色 苏丹苏丹III（三号苏丹红）（三号苏丹红） ：脂类显示：脂类显示橘黄色橘黄色74 考马斯亮蓝染色显示细胞骨架考马斯亮蓝染色显示细胞骨架75 是利用抗体同特定抗原专一结合的原理，对抗原是利用抗体同特定抗原专一结合的原理，对抗原进行定位定性测定的技术进行定

28、位定性测定的技术。a. a. 免疫荧光技术：免疫荧光技术： b. b. 免疫电镜技术：免疫电镜技术： （immunoelectron microscopyimmunoelectron microscopy，IEMIEM）胶体金技术胶体金技术c. c. 蛋白电泳蛋白电泳(SDS-PAGE)(SDS-PAGE)与免疫印迹反应与免疫印迹反应 (Western-Blot) (Western-Blot) 76抗体抗体Y字形下面的主干部分称为恒定区字形下面的主干部分称为恒定区(Fc)，所有人的抗体的，所有人的抗体的Fc都是一样的都是一样的 ，所有鼠的抗体所有鼠的抗体Fc也都是一样，所有山羊的也都是一样，所

29、有山羊的Fc也都是一样也都是一样 。ProteinA识别抗体的识别抗体的FC段。段。77金黄色葡萄球菌蛋白金黄色葡萄球菌蛋白A（proteinA）能与数种哺乳）能与数种哺乳动物动物IgG分子的分子的Fc段结合。段结合。（1）胶体金技术）胶体金技术78Immunogold electron microscopy. Electron micrographs of an insulin-secreting cell in which the insulin molecules have been labeled with anti-insulin antibodies bound to tiny c

30、olloidal gold spheres. Most of the insulin is stored in the dense cores of secretory vesicles; in addition, some cores are being degraded in lysosomes.79Figure 3-41. The detergent sodium dodecyl sulfate (SDS) and the reducing agent beta-mercaptoethanol. These two chemicals are used to solubilize pro

31、teins for SDS polyacrylamide-gel electrophoresis. The SDS is shown here in its ionized form. SDS polyacrylamide-gel electrophoresis（2）western技术技术8081Figure 3-42. SDS polyacrylamide-gel electrophoresis (SDS-PAGE).Electrophoresis8283PVDF膜表面有膜表面有很多洞洞很多洞洞，通过电转，通过电转， 胶上的蛋白胶上的蛋白被转移到了膜上，蛋白被转移到了膜上，蛋白以机械填补（堆

32、积）和吸附以机械填补（堆积）和吸附的方式结合的方式结合于表面。于表面。 电转后的电转后的NC或或PVDF膜上，有很多空白区，膜上，有很多空白区，这些洞这些洞洞并没有填进东西，而抗体也是蛋白洞并没有填进东西，而抗体也是蛋白，也会被吸附，也会被吸附在空的洞里，这样就会有很多非特异的信号。在空的洞里，这样就会有很多非特异的信号。封闭液中的蛋白可以与表面上的空白位置结合，同封闭液中的蛋白可以与表面上的空白位置结合，同样以机械填补（堆积）和吸附覆盖的方式结合在膜样以机械填补（堆积）和吸附覆盖的方式结合在膜上，以上，以避免一抗的非特异结合避免一抗的非特异结合，所以起，所以起“封闭封闭”的的作用。这样抗体就

33、不会被非特异性的吸附到膜上，作用。这样抗体就不会被非特异性的吸附到膜上，而只会跟而只会跟特异性蛋白结合特异性蛋白结合。封闭原理封闭原理84底物化学发光底物化学发光ECL ,反应底物为过氧化物反应底物为过氧化物+鲁米诺，如遇到鲁米诺，如遇到HRP，即发光，即发光，可使胶片曝光，可显影出条带。可使胶片曝光，可显影出条带。辣根过氧化物酶在催化过氧化氢的情况下，鲁米诺底物被氧化而产生的发辣根过氧化物酶在催化过氧化氢的情况下，鲁米诺底物被氧化而产生的发光反应光反应 原理：原理：利用放射性同位素所发射出来的利用放射性同位素所发射出来的带电离子（带电离子（或或粒子粒子等）等）作用于卤化银乳胶（如作用于卤化银

34、乳胶（如X光片光片)，乳胶颗粒，乳胶颗粒曝光曝光形形成成潜影潜影，通过显影液显示。，通过显影液显示。半衰期：原子不断衰变，当衰变掉一半时所需要的时间半衰期：原子不断衰变，当衰变掉一半时所需要的时间 32P(14天天)、131I(8.1天天)、35S(87天天)、 3H(12.3年年)、 45Ca (164天天)和和14C（5590年）等。年）等。步骤：步骤：测定放射性前体物质渗入细胞后，测定放射性前体物质渗入细胞后，不同时间所在的位置和化学变化。不同时间所在的位置和化学变化。86用用3H标记亮氨酸标记亮氨酸10分钟后，在高尔基体中出现分钟后，在高尔基体中出现45分钟后，在分泌泡中出现分钟后，在分泌泡中出现8788染色染色89Figure 3-31. A fluorescence-activated cell sorter. When a cell passes through the laser beam, it is monitored for fluorescence. Droplets containing single cells are given a negative or positive charge, depending