血浆蛋白质醋纤膜电泳课件

1、血浆蛋白质醋纤膜电泳1 血浆蛋白质 醋酸纤维素薄膜电泳实验实验2血浆蛋白质醋纤膜电泳2实验目的实验目的l1、掌握醋酸纤维素薄膜电泳的原理l2、掌握醋酸纤维素薄膜电泳分离血浆蛋白质 的实验操作技术和注意事项。l3、了解醋酸纤维素薄膜作支持物进行电泳 的优点及使用范围。血浆蛋白质醋纤膜电泳3醋酸纤维素薄膜电泳醋酸纤维素薄膜电泳 采用醋酸纤维素薄膜作为支持物的电泳方法叫做醋酸纤维素薄膜电泳。 醋酸纤维素是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯，将它溶于有机溶剂（如丙酮 、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等）后，涂抹成均匀的薄膜，干燥后就成为醋酸纤维素薄膜。该膜具有均一的泡沫状结构，厚度约为120m，通透性好，

2、对分子移动阻力少，是一种良好的电泳支持物。血浆蛋白质醋纤膜电泳4醋酸纤维素薄膜电泳的优点及应用醋酸纤维素薄膜电泳的优点及应用l具有微量、快速、简便、区带清晰、灵敏度高、便于摄影和保存等优点。l用于科学实验、生化产品分析和临床化验，如血浆蛋白、血红蛋白、球蛋白、脂蛋白、糖蛋白、甲胎蛋白、同工酶等的分离鉴定。血浆蛋白质醋纤膜电泳5 原原 理理 血浆中各种蛋白质的等电点不同，一般都低于ph7.4。它们在ph8.6的缓冲液中均解离带负电荷，在电场中向正极移动。由于血浆中各种蛋白质分子大小、形状及所带的电荷量不同，因而在醋酸纤维素薄膜上电泳的速度也不同。因此可以将它们分离为清蛋白（albumin)、1-

3、球蛋白、2-球蛋白、-球蛋白、-球蛋白，纤维蛋白原条区带。血浆蛋白质醋纤膜电泳6 血浆蛋白质的等电点、血浆蛋白质的等电点、平均相对分子量、及正常含量平均相对分子量、及正常含量 球球 蛋蛋 白白清蛋白清蛋白 a 1 2 pi相对分子量（104）含量（%）4.886.957725.0620255.0630495.129156.2126.857.315.6301220血浆蛋白质醋纤膜电泳7实验材料实验材料l健康人血浆或动物血浆血浆蛋白质醋纤膜电泳8试剂试剂l1、ph8.6巴比妥缓冲液l2、氨基黑10b染色液l3、漂洗液l4、洗脱液l5、透明液（试剂配制参见实验讲义）定量时用血浆蛋白质醋纤膜电泳9仪器

4、和器材仪器和器材l1、常压电泳仪、电泳槽l2、醋酸纤维素薄膜（28cm）l3、点样器（载玻片或盖玻片）、玻璃板l4、培养皿（泡膜、染色和漂洗用）l5、滤纸l6、镊子l7、试管、试管架、吸量管l8、分光光度计（定量用）血浆蛋白质醋纤膜电泳10操作步骤操作步骤l1、薄膜准备、薄膜准备 将醋酸纤维素薄膜切成28cm的小条。 在薄膜粗面一端1.5cm处用铅笔轻轻画一横线。 在薄膜角上用铅笔作一标记。 将醋酸纤维素薄膜浸泡于缓冲液中20min。 血浆蛋白质醋纤膜电泳11操作步骤操作步骤醋酸纤维素薄膜规格及点样位置8cm2cm点样线点样区1.5cm(粗面）血浆蛋白质醋纤膜电泳12操作步骤操作步骤l2、电泳

5、仪准备、电泳仪准备 在电泳槽内加入缓冲液，使两个电极槽内的液面等高。先剪裁尺寸合适的滤纸条，取双层滤纸条附着在电泳槽的支架上，使它的一端与支架的前沿对齐，而另一端浸入电极槽的缓冲液内。用缓冲液将滤纸全部润湿并驱除气泡，使滤纸紧贴在支架上，即为滤纸桥。它是联系醋酸纤维薄膜和两极缓冲液之间的“桥梁”。 血浆蛋白质醋纤膜电泳13血浆蛋白质醋纤膜电泳14操作步骤操作步骤l4、上槽、上槽 待血浆吸入膜后，以薄膜粗面向下粗面向下、点样点样端置阴极端端置阴极端，两端紧贴在滤纸盐桥上，加盖，平衡约5min，使薄膜渗透的缓冲液达到平衡。 切勿使点样处与电泳槽接触切勿使点样处与电泳槽接触血浆蛋白质醋纤膜电泳15醋

6、酸纤维素薄膜电泳装置示意图醋酸纤维素薄膜电泳装置示意图血浆蛋白质醋纤膜电泳16操作步骤操作步骤l5、电泳、电泳 检查电泳装置是否正确，开启电源，调节电压、电流，然后通电4060min。 电压：110150v（10v/cm膜长） 薄膜的有效长度是两电极缓冲液面之间滤纸盐桥和薄膜的长度之和。 电流：0.40.6ma/cm膜宽 有数条膜便求数条膜宽的总和。 血浆蛋白质醋纤膜电泳17操作步骤操作步骤l6、染色和漂洗、染色和漂洗 电泳完毕后，关闭电源，将膜取出，直接浸于染色液中5min。 取出膜，尽量沥净染色液，移入漂洗液中浸洗脱色（一般更换23次），至背景颜色脱净为止。 取出膜，用滤纸吸干即可。血浆蛋

7、白质醋纤膜电泳18操作步骤操作步骤l血浆蛋白醋酸纤维素薄膜电泳图谱电泳方向a12纤维蛋白原血浆蛋白质醋纤膜电泳19操作步骤操作步骤l7、透明、透明 薄膜完全干燥后，浸入透明液中20min后，取出平贴在玻璃板上（不要留有气泡），完全干燥后即成透明的薄膜图谱，要作扫描或照相用。可长期保存。血浆蛋白质醋纤膜电泳20血浆蛋白质醋纤膜电泳21血浆蛋白质醋纤膜电泳22血浆蛋白质醋纤膜电泳23* *生理及临床意义生理及临床意义 同工酶谱的改变有同工酶谱的改变有助于对疾病的诊断。助于对疾病的诊断。心肌梗死和肝病病人血清心肌梗死和肝病病人血清ldhldh同工酶谱的变化同工酶谱的变化1 1酶酶活活性性心肌梗死酶谱

8、心肌梗死酶谱正常酶谱正常酶谱肝病酶谱肝病酶谱2 23 34 45 5血浆蛋白质醋纤膜电泳24血浆蛋白质醋纤膜电泳25和和珠蛋白肽链合成异珠蛋白肽链合成异 常而导致其比例不均衡引起的溶血性贫血。常而导致其比例不均衡引起的溶血性贫血。血浆蛋白质醋纤膜电泳26 地地 区区 地贫地贫 地贫地贫 样本数样本数 地贫地贫1 % 1 % 样本数样本数 表型阳性数表型阳性数 % % 广州广州 1,681 101 6.0 13,462 452 3.36 珠海珠海 1,028 41 3.99 9,854 227 2.30 汕头汕头 574 38 6.6 402 21 5.2 韶关韶关 969 40 4.13 1,597 54 3.4 湛江湛江 1004 48 4.78 1,170 41 3.5 血浆蛋白质醋纤膜电泳27血浆蛋白质醋纤膜电泳28操作流程操作流程1、薄膜准备2、电泳仪准备3、点样4、上槽5、电泳6、染色及漂洗血浆蛋白质醋纤膜电泳29注意事项注意事项l1、最好选用同一批号、厚薄均匀、质量良好的醋纤膜。l2、样品要新鲜。l3、点样要细窄、均匀、集中。l4、盐桥要平整。l5、电泳槽盖要密封。l6、室温不宜过高。血浆蛋白质醋纤膜电泳