专题二微生物的培养与应用-知识点总结

1、专题二微生物的培养与应用 知识点微生物的实验室培养1 .培养基是人们按照微生物对营林质的川同需求,配制由供其用7藜珅营养基质，是进行微生物培养的物质基础。2 .培养基按物理性质分为液值1主基（应用于工业或生活生产）、g邳养基（应用于微生物的分离和鉴定）和半固体培养隼（常用于观 察微生物的运动及菌种保藏等）。按成分分为修西养基（用成分已知 的化学物质配制而成，成分种类比例明确，用于微生物的分离鉴定） 和叵冲养基（用化学成分不明的天然物质配制而成，用于实际工业 生产）。按用途分为所同养基（加入某种化学物质，以抑制不需要微 生物生长，促进所需微生物的生长）和鉴别惜碎 （根据微生物的特 点，加入某种指

2、示剂或化学药品，来鉴别不同类别的微生物）。3 .培养基的化学成分包括：水J无机盐、碳源、氮源和生长因子等。一碳一 源包括CQ、NaHCa等叵独源和糖类、 石油、花生粉饼等油画源。 异养微生物只能利用有邈而。单质碳不能作为碳源。氮源包括用、NH3、NO3-、NH4+等忙机寂源和蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白 月东等位球源。只有固H旺物才能利用.N2。4 .培养基还需满足|pH、特殊营养物质和氧气的分求。例：培养乳酸杆 菌需添加维生素；培养霉菌需将 pH调至酸性；培养细菌需将 pH调至 中性或微碱性；培养厌氧型微生物需提供无氧的条件。5 .无菌操作技术包括：对实验操作的空间、操作者的衣着和手，

3、进 行清洁和消毒。将用于微生物培养的器皿与神用具和培养基至落 具进行灭菌。为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精 灯火焰附近进行。实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周 围的物品相接触。6 .消毒与灭菌的区别是：消毒指使用较为乱画物理或化学方法仅杀死 物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽胞和抱子）| ,包括区画毒法，叵时肖毒法 （酒精、氯气、石炭酸）和|紫外线冷毒法。 灭菌指使用职喇理化因素杀死物体内外所有轲微生物，包甜芽胞和1 抱子|包括I烧同菌、干了灭巾、高叫蒸汽灭氤7 .灭菌方法：集种环、接种针、试管口等利用灼烧灭菌法;玻璃 匚 器皿、金属用具等使用干热灭菌法,所

4、用器械是干热灭菌箱；培养 匚 基、无菌水娱使用高压蒸汽灭菌法,所用器械是高压蒸汽灭菌锅； 表面灭菌和空气灭菌等惬用紫外线灭菌法,所用器械是紫外灯。8 .制作牛肉膏蛋白腺固体培养基（1）方法步骤：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。（2）倒平板操作的步骤包括：将灭过菌的培养皿放在酒精加火焰旁 的桌面上，有EJ装有培养基的锥形瓶，左手画布塞。将锥形瓶 的瓶口延速通过火焰（啊烧灭菌,防止瓶口的微生物污染培养基）。将培养皿打开一条帮大于瓶口的卷隙,再将锥形瓶中的培养基（约20hL）倒入培养皿，立即盖上培养皿的皿盖。等待平板冷却凝固然 后，将平板砸三|置，使培养皿盖在下、皿底在上（目的：使培养 口 基表面的

5、水分用好地挥发,又可以防止皿盖上的水珠落入埼养基，造 一 成污染）。9 .倒平板时若不慎将培养基溅在皿盖与皿底上，则这个平板不能用来培养微生物，原因是空中的微生物会在皿盖与皿底上生长。10 .纯化大肠杆菌的原理是：用平卡划线法制稀释除布平板法词,使 聚集在一起的微生物分脓成单个细胞，叫而能在培养基表面形成单个 的菌落（生态学上称种叵，以达纯化菌种的目的。11 .平板划线操作时第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环的原因是：前者避免林而上可能存在的微生物污染培养物，后者杀死上次|划线残留在环上的菌种，憧菌种逐渐变少以便得到单个菌落。在划线 操作结束时，仍然需要灼烧接种环的原因是及时杀死接种环上残留

6、的 菌种，避免细菌浊函境和感染操作者。在下烧接种环之后,要等其 冷却后再进行划线的原因是避免接种环温度太高而杀死菌种。 一12 .涂布平板操作的步骤包括：将涂布器浸在盛有酒精曲I汕中。 取少量菌液，滴加到培养基表面。将沾有少量酒精的涂布器在火席上引燃，待棺精燃尽后，冷却810s。用东布器鸟菌液均匀地涂布在培养基表面。13 .菌种的保存：频繁使用，临时保存接种到固体4面培养基？彳4c下保存。长期保存菌种用甘油管藏的方法土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1 .尿素是重要的农业氮不能直接被植物吸收。土壤中有一类细菌能 合成帧均 将尿素分解成氨R植物吸收利用。尿素最初是从人的尿口阈中发现的。2 .实验室

7、中微生物筛选的原理是：人为提供有利于日的菌株生长的条件 （包括营养、温度、PH等），同时抑制或阻止用他微生物生长。3 .在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称作选报ffj基。例如，培养基中不加入 有机物H以选择培养自养微生物;培养基中不加入氮元也可以选择 培养能固氮的微生物；加入高淞度的食盐可选忤培养金黄色葡萄球菌等。4 .测定微生物数量的常用方法有稀索涂布平板法和显枷建直接计数。一5 .稀释涂布平板法常用来统计样品中活血画目。原理是：当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落，来源于样品耐液中的 一个活菌。|统计平板上的菌落数，就能推测由

8、样品中大约含有多少活 菌。为了保证结果准确，一般选择 35个菌落数在1303001的平板进 行计数，并取双均值/6 .统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，周因是当两个出多个细胞一连在一起时,平板上看到的只是一个菌落，因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。7 .设置对照的主要目的是排除实验组中非测试国赛对头驱结果的影响， 提高实验结果的可信度。对照实验是指除了被测状的条件*外,其他 口 标和相同的实验,其作用是比照试验组，排除任何其他可能原因的 干扰，证明确实是阿M的条件引用相应的结果。8 .实验设计包括*验方案，配需仪器、材料、用具和药品，具体的实施步骤以及时间安排等的综合考虑和安排。

9、9 .土壤取样：铲去表层土，在距地表约3H8cm的土壤层从富含有国 潮湿、pH= 7的土壤中取样。10 .卜羊品的稀释程度W直接影响平板上生长的菌落数目。在实际操作中，通常选用一定稀释范围（细仁单选用104、105 106;帧线菌般选用103、104、105； 叵+般选用102、103、104）的样品液进行培养， 以保证获得菌落数在 3。300 |之间、适于计数的平板。11 .不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。细菌30-37 C 1-2 天；放线菌 25-28 C 5-7 天；霉菌 25-28 C 3-4 天。12 .每隔24小时统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为

10、结 果，这样可以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。一附来说, 在一定的培养条件下（相同的培养基、唯独及培养时间） ，同种微生物 表现由稳定的前落特征（柩状、大小、隆起程度和颜色基本一致）13 .每克样品中的菌落数=|（C/V） X m （C:某一稀释度下平板上生 长的平均菌落数；V:涂布平板时所用的稀释液的体积（ ml）; M:代 表稀释倍数）14 .在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚纣指示剂，培养某种细菌后，如果PH H因 指示剂变红，可初步鉴定该种细菌能分解尿素为氨。 口分解纤维素的微生物的分离1 .纤维素是一种由油萄糖首尾相连而成的高分子化合物,是地球上含量最丰富的多糖类物质。棉梃

11、坦然界中纤维素含量最高的天然产物， 木材、作物秸秆可也富含纤维素。2 .纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即 0酶、 Cx酶和葡萄糖昔酶，|前两种酶使纤维素分解成纤维上糖，第二种酶将 纤维二糖分解成前萄糖，忸微生物的生长提供营养。3 .当在含有纤维素的培养基中加入刚栗红时，| 它能与培养基中的纤维素 形成红色复合物小当纤维素被纤维素酶分解后,刚果近一纤维素的复 合物就无法形成，培养基中会由现以纤维|素分解菌为中4的透明圈, 根据是否产生透明圈就可以来筛选纤斜素分解菌，这种方法叫做刚果|红染色法。4 .刚果红染色法油选纤维素分解菌的国理:刚果红（染料）可以与像 纤维素这样的多糖物

12、质形成红色复合物,但并不和水解的纤维二糖 和葡萄糖发生这种反应。5 .实验流程：土壤取样 -选择培养（此步是否需要，应根据样品中目的 菌株数量的多少来确定）-匣却释-将样品涂布到堂别纤维素分解一 阑的培养基上-挑选产生透明圈而菌落6 .为确定得到的是纤维素分解菌，需要进行发到产纤维素酶|的实验。纤维素酶的测定方法，一般是对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的 葡萄糖他行定量的测定。7 .由于生物与环境的相归依存瓦系,在富含纤维索花环骑中,纤维素 分解菌与含量相对提高,因此从这种土样中获得目的微生物的几率要 住于普通环境。8 .将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相对聚集， 实际上是人工设置纤 维素分解菌生存的适宜环境。 一般应将纸埋于深约 10cm左右腐殖土壤中。9 .刚果红染色法种类：一种是先培诟生物，再加入刚果红屉行颜也 反应；另一种是在倒平板时门加入刚果红。前者的缺点是操作繁琐， 加入刚果红溶液会使菌落之间发生混杂3t点是这样显示由的颜色 反应基本上是耶隹素分解菌的昨用。方法二的优点是操作简便，不存 在菌落混杂问题，缺点是由于纤维素和琼脂、土豆汁中都含有淀粉类 匚