《大肠杆菌群》ppt课件

1、大肠杆菌群大肠菌群的定义 大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。 大肠菌群不是细菌学上的分类命名，而是根据卫生学方面的要求，提出的与粪便污染有关的细菌，即作为食品、水体等能否受过人畜粪便污染的指示菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。根据进一步的生化实验，可将这群细菌再分为大肠艾希氏菌俗称大肠杆菌、弗氏柠檬酸杆菌、肺炎克雷伯氏菌和阴沟肠杆菌等。 大肠杆菌的定义 大肠杆菌也称大肠埃希氏菌，分类于肠杆菌科，归属于埃希氏菌属。 大肠杆菌指革兰氏阴性无芽孢杆菌、乳糖发酵产酸产气、IMViC实验靛基质、MR、V-P、柠檬酸盐实验为+-或-+-的细菌。 与人类有

2、关的大肠杆菌统称为致泻性大肠杆菌，包括五种：肠毒素性大肠杆菌ETEC、致病性大肠杆菌EPEC、出血性大肠杆菌EHEC、侵袭性大肠杆菌EIEC、黏附性大肠杆菌EAEC。大肠菌群和大肠杆菌的关系大肠菌群和大肠杆菌的关系卫生学意义大肠菌群和大肠杆菌是评价卫生质量的重要目的，作为食品中的粪便污染目的。食品中检出大肠菌群，阐明该食品有粪便污染，既能够有肠道致病菌存在，因此也就有能够经过污染的食品引起肠道传染病的流行。大肠菌群数的高低，阐明了粪便污染的程度，也反映了对人体安康危害性的大小。大肠杆菌在外界存活时间与一些主要肠道致病菌接近，它的出现预示着某些肠道病原菌的存在，因此该菌是国际上公认的卫生监测指示

3、菌。近年来，有些国家在执行HACCP管理中，将大肠杆菌检测作为微生物污染情况的监测目的和HACCP实施效果的评价目的。大肠杆菌的生物学特性根本形状： 此菌为两端钝圆的短小杆菌，普通约0.5-0.8m*1.0-3.0 m，多单独存在或成双，但不呈长链陈列。约50%的菌株有周生鞭毛，但多数只需1-4根，普通不超越10根，故菌体动力弱。多数菌株有菌毛，有的有荚膜或微荚膜，不构成芽孢，对普通碱性染料着色良好，革兰氏染色阴性。大肠杆菌的生物学特性培育特性：大肠杆菌合成代谢才干强，在含无机盐、铵盐、葡萄糖的普通培育基上生长良好。最适生长温度为37，在42-44 条件下仍能生长，生长温度范围15-46 。l

4、 在普通营养琼脂上有3中菌落形状：l 1光滑型：菌落边缘整齐，外表有光泽、潮湿、 l 光滑、呈灰色，在生理盐水中易分散；l 2粗糙型：菌落扁平、干涩、边缘不整齐，易l 在生理盐水中自凝；l 3黏液型：常为含有荚膜的菌株。大肠菌群及大肠杆菌测定 MPN法检验流程FDA BAM 检样50g+450ml稀释液 适当十倍稀释样品选择3个适宜的延续稀释度的样品稀释液，每个稀释度接种三管LST肉汤每管9mlLST肉汤并加有导管，每管接种1mL 35 ，24 2h 48 2h 没有产气管 有产气管 报告阴性 接种BGLB肉汤管 接种EC肉汤 35 ，48 2h 44.50.5 水浴培育 24 2h 48 2

5、h 查MPN表报告结果 产气管接种EMB平板35、1824h 大肠菌群 从EMB平板上挑取5个可疑菌转接到PCA斜 面，进展革兰氏染色、IMVC生化鉴定、接 种LST复检产气 查MPN表报告结果大肠杆菌 大肠菌群测定MPN法检验几点阐明MPNMPN检索表：检索表： MPN MPN 为最大能够数为最大能够数(Most Probable Number)(Most Probable Number)的简称。这种方法，对样品进展延续系列的简称。这种方法，对样品进展延续系列稀释，参与培育基进展培育，从规定的反响呈阳性管数的出现率，用概率论来推算样品中菌稀释，参与培育基进展培育，从规定的反响呈阳性管数的出现

6、率，用概率论来推算样品中菌数最近似的数值。数最近似的数值。MPNMPN检索表只给了三个稀释度，如改用不同的稀释度，那么表内数字应相检索表只给了三个稀释度，如改用不同的稀释度，那么表内数字应相应降低或添加应降低或添加1010倍。倍。初发酵和证明实验：初发酵和证明实验： 1 1两步法进展了两次乳糖发酵实验。初发酵和证明实验所用培育基不同，但都是为了两步法进展了两次乳糖发酵实验。初发酵和证明实验所用培育基不同，但都是为了证明培育物能否符合大肠菌群的定义，即证明培育物能否符合大肠菌群的定义，即“在在3737分解乳糖产酸产气。分解乳糖产酸产气。 LST LST中提供了磷酸中提供了磷酸盐缓冲体系，氯化钠可

7、维持浸透压，月桂基硫酸钠可抑制非大肠菌群的生长，这个缓冲蛋白盐缓冲体系，氯化钠可维持浸透压，月桂基硫酸钠可抑制非大肠菌群的生长，这个缓冲蛋白胨乳糖肉汤允许胨乳糖肉汤允许“缓慢乳糖发酵缓慢乳糖发酵Slow lactose fermentationsSlow lactose fermentations来促进菌体产气。来促进菌体产气。BGLBBGLB中胆盐和煌绿可以抑制革兰氏阳性细菌和除了大肠菌群的很多革兰氏阴性细菌。中胆盐和煌绿可以抑制革兰氏阳性细菌和除了大肠菌群的很多革兰氏阴性细菌。 2 2初发酵阳性管，不能一定就是大肠菌群细菌，经过证明实验后，有时能够成为阴性。初发酵阳性管，不能一定就是大肠菌

8、群细菌，经过证明实验后，有时能够成为阴性。有数听阐明，食品中大肠菌群检验步骤的符合率，初发酵与证明实验相差较大。因此，在实有数听阐明，食品中大肠菌群检验步骤的符合率，初发酵与证明实验相差较大。因此，在实践检测任务中，证明实验是必需的。践检测任务中，证明实验是必需的。产气量与倒管：产气量与倒管： 在乳糖发酵实验任务中，经常可以看到在发酵倒管内极微少的气泡有时比小米粒还在乳糖发酵实验任务中，经常可以看到在发酵倒管内极微少的气泡有时比小米粒还小，有时可以遇到在初发酵时产酸或沿管壁有渐渐上浮的小气泡。实验阐明，大肠菌群的小，有时可以遇到在初发酵时产酸或沿管壁有渐渐上浮的小气泡。实验阐明，大肠菌群的产气

9、量，多者可以使发酵倒管全部充溢气体，少者可以产生比小米粒还小的气泡。假设对产产气量，多者可以使发酵倒管全部充溢气体，少者可以产生比小米粒还小的气泡。假设对产酸但未产气的乳糖发酵如有疑问时，可以用手悄然打动试管，如有气泡沿管壁上浮，即应思酸但未产气的乳糖发酵如有疑问时，可以用手悄然打动试管，如有气泡沿管壁上浮，即应思索能够有气体产生，而应作进一步实验。索能够有气体产生，而应作进一步实验。 大肠杆菌测定EMB选择性分别鉴别EMB平板典型大肠杆菌菌落特征：中心黑色或紫红色，有或无绿色金属光泽大肠杆菌测定EMB选择性分别鉴别EMB是一种弱选择性培育基，一些球菌也可在该培育基上生长；高压灭菌可使得美蓝复

10、原从而使培育基的颜色呈不均一橘黄色，悄然摇动培育基可以恢复原有的正常紫色，倾注平板前应先摇匀；大肠杆菌在该培育基上并不一定总是呈现绿色的金属光泽；该培育基受可见光易使其中的成分氧化，储存及培育细菌时都应在避光条件。菌名菌落形态大肠埃希氏菌 紫黑色，有绿色金属光泽肺炎克雷伯氏菌粉色，中心色深阴沟肠杆菌粉色，中心色深弗氏志贺氏菌无色鼠伤寒沙门氏菌 无色粪链球菌无色大肠杆菌测定革兰氏染色根本原理： 革兰氏染色法是细菌学中广泛运用的一种重要的鉴别染色法。1884年由丹麦医师Gram创建。此法可将细菌分为革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌两大类。 革兰氏染色的机理主要是利用两类细菌的细胞壁成分和构造的不同。革兰

11、氏阴性菌的细胞壁中含有较多的类脂质，而肽聚糖的含量较少。当用酒精或丙酮酸脱色时，类脂质被溶解，添加了细胞壁的通透性，使初染后的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细胞被脱色，经复染后，又染上复染液的颜色。而革兰氏阳性菌细胞壁中肽聚糖的含量多而且交联度大，类脂质含量少，经乙醇或丙酮洗脱后，肽聚糖层的孔径变小，通透性降低，因此细胞仍保管初染时的颜色。大肠杆菌测定革兰氏染色Gram negativeGram positiveGram straining大肠杆菌测定革兰氏染色根本步骤：将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染液，染1min，水洗；滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗；滴加95%乙醇脱色约1530s,直至染色液被洗掉