大黄素对白蛋白诱导人肾小管上皮细胞转分化的影响ppt课件

1、大黄素对白蛋白诱导人肾小管上皮细胞转分化的影响主讲：房向东主讲：房向东The effect of Emodin on the human renal tubular epithelial to mesenchymal transition induced by albumin研讨背景研讨背景1技术道路与方法技术道路与方法2结结 果果3讨讨 论论4结结 论论5概概 要要 蛋白尿不仅仅是肾脏损伤的生物学标志，还是加速肾脏疾病向终末期肾衰进展的主要危险要素之一。 研讨背景研讨背景肾脏损伤肾脏损伤蛋白尿蛋白尿临床表现临床表现反作用反作用物理损伤物理损伤诱导化学趋化因子、炎症因子诱导化学趋化因子、炎症因

2、子激活补体激活补体促进细胞凋亡促进细胞凋亡损伤及加速纤维化损伤及加速纤维化机制机制1、正常肾单位的丧失和肾构造的、正常肾单位的丧失和肾构造的破坏破坏 2、成纤维细胞及肌成纤维细胞的、成纤维细胞及肌成纤维细胞的大量增生大量增生 3、细胞外基质的产生和积聚、细胞外基质的产生和积聚 病理变化病理变化 肾脏纤维化肾脏纤维化研讨背景研讨背景肾间质肾间质纤维化纤维化肾小球肾小球硬化硬化肾脏纤维化肾脏纤维化肾间质纤维化是关键！肾间质纤维化是关键！间质纤维化的程度更能预测肾功能的变化！间质纤维化的程度更能预测肾功能的变化！研讨背景研讨背景 肾小管上皮细胞肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化肌成纤维细胞转分化TE

3、MT 在肾间质纤维化的发生开展中有着重要的作用在肾间质纤维化的发生开展中有着重要的作用，它被定义为肾小管上皮细胞丧失了上皮表型，它被定义为肾小管上皮细胞丧失了上皮表型，而获得新的肌成纤维细胞特征的过程。而获得新的肌成纤维细胞特征的过程。研讨背景研讨背景转分化转分化ECMECMECM上皮细胞肌成纤维细胞化学名：3-甲基-1，3，8-三羟基蒽醌大黄素大黄素传统的生物学作用：抗传统的生物学作用：抗菌消炎、抗肿瘤、免疫菌消炎、抗肿瘤、免疫抑制、保肝、护肾抑制、保肝、护肾 研讨背景研讨背景维护肾脏作用：去除氧维护肾脏作用：去除氧自在基及炎症因子、抗自在基及炎症因子、抗细胞增殖、促细胞外基细胞增殖、促细胞

4、外基质降解、阻滞质降解、阻滞TEMT 体内外研讨发现大黄素可延缓糖尿病肾病、梗阻性肾病等肾脏纤维化发生，其中阻滞TEMT过程发扬重要位置。研讨背景研讨背景研讨目的研讨目的白蛋白能否诱导白蛋白能否诱导HK-2细胞转发生转分化过程细胞转发生转分化过程、促进细胞外基质合成、促进细胞外基质合成 大黄素对白蛋白产生的上述过程能否产生影响大黄素对白蛋白产生的上述过程能否产生影响技术道路与分组技术道路与分组空白对照组空白对照组 大黄素对照组大黄素对照组大黄素干涉组大黄素干涉组白蛋白诱导组白蛋白诱导组HK-2细胞细胞无处置要素 20g/ml大黄素作用0、12、24、48h5mg/ml白蛋白刺激时同白蛋白刺激时

5、同时参与时参与20g/ml大黄素作用大黄素作用0、12、24、48h察看各组细胞形状学变化，搜集细胞总察看各组细胞形状学变化，搜集细胞总RNA半定量检测半定量检测-SMA、E-cadherin、FNmRNA的表达的表达5mg/ml白蛋白作用白蛋白作用0、12、24、48h各组实验反复各组实验反复3 3次，一切数据以次，一切数据以x xs s表示，行方差齐性检验，多组间计表示，行方差齐性检验，多组间计量资料采用单要素方差分析量资料采用单要素方差分析用用SPSS12.0SPSS12.0软件对数据进展处置软件对数据进展处置以以P P0.050.05为有显著性差别为有显著性差别, P, P0.010.

6、01有非常显著性差别有非常显著性差别 RT-PCRRT-PCR正常正常HK-2细胞仅表达少量的细胞仅表达少量的-SMA、FNmRNA，而而E-cadherinmRNA的表达较强。的表达较强。E-cadherin -SMA FNM 0 12 24 48h 大黄素对照组上述因子的表达与正常对照组无差别结结 果果白蛋白诱导白蛋白诱导HK-2细胞表型转化及大黄素干涉后的效果细胞表型转化及大黄素干涉后的效果 白蛋白可诱导白蛋白可诱导HK-2细胞发生表型转化，即细胞发生表型转化，即E-CadherinmRNA的表达下调，的表达下调，-SMAmRNA的表达上调，与的表达上调，与0h比较，比较，12h后即有差

7、别，后即有差别，48h后差别显著，后差别显著，p0.01。而同时参与。而同时参与20g/ml大黄素作用后，其变化趋势明显减弱。大黄素作用后，其变化趋势明显减弱。-SMA 白蛋白诱导白蛋白诱导大黄素干涉大黄素干涉M 0 12 24 48h 结结 果果白蛋白诱导白蛋白诱导HK-2细胞表型转化及大黄素干涉后的效果细胞表型转化及大黄素干涉后的效果 E-cadherin 大黄素干涉大黄素干涉白蛋白诱导白蛋白诱导M 0 12 24 48h M 0 12 24 48h 白蛋白诱导白蛋白诱导HK-2细胞分泌纤维衔接蛋白细胞分泌纤维衔接蛋白FN的情况及大黄素干涉后的效果的情况及大黄素干涉后的效果FN的表达随白蛋

8、白刺激时间延伸而逐渐增多，在大黄素干涉后其表达上调趋势亦明显减缓。的表达随白蛋白刺激时间延伸而逐渐增多，在大黄素干涉后其表达上调趋势亦明显减缓。FN白蛋白诱导白蛋白诱导大黄素干涉大黄素干涉M 0 12 24 48h 讨讨 论论蛋白尿与肾小管间质损伤蛋白尿与肾小管间质损伤蛋白尿的程度反映了肾小球损伤的程度蛋白尿的程度反映了肾小球损伤的程度MDRDMDRD实验实验 把蛋白尿根底排出量作为独立的危险要素纳入加速慢性肾脏病进展的研讨把蛋白尿根底排出量作为独立的危险要素纳入加速慢性肾脏病进展的研讨临床研讨发现临床研讨发现CKDCKD患者在运用患者在运用 ACEI ACEI、ARBARB类药物可非依赖降压

9、作用减少尿蛋白量的排泄而类药物可非依赖降压作用减少尿蛋白量的排泄而延缓慢性肾脏病恶化速度延缓慢性肾脏病恶化速度 降尿蛋白和延缓降尿蛋白和延缓GFRGFR下降之间有着严密的联络，蛋白尿的程度对下降之间有着严密的联络，蛋白尿的程度对CKDCKD预后具有很强的预测预后具有很强的预测价值价值 。讨讨 论论蛋白尿与肾小管间质损伤蛋白尿与肾小管间质损伤我们的实验结果发现，我们的实验结果发现，5mg/ml5mg/ml人纯化白蛋白刺激人纯化白蛋白刺激HK-2HK-2细胞一段时间内后，上细胞一段时间内后，上皮细胞表型标志物皮细胞表型标志物E-cadherinmRNAE-cadherinmRNA表达下调，肌成纤维

10、细胞表型物表达下调，肌成纤维细胞表型物-SMAmRNASMAmRNA表达上调，且随白蛋白作用时间的延伸表达程度逐渐加强。表达上调，且随白蛋白作用时间的延伸表达程度逐渐加强。 结果阐明结果阐明HK-2HK-2细胞发生表型转变，介导了肾小管间质纤维化的发生。细胞发生表型转变，介导了肾小管间质纤维化的发生。讨讨 论论TEMT与肾小管间质纤维化与肾小管间质纤维化 TEMTTEMT在肾间质纤维化的发生开展过程中发扬重要在肾间质纤维化的发生开展过程中发扬重要作用作用 TEMTTEMT过程包括：肾小管上皮细胞的黏附属性缺失过程包括：肾小管上皮细胞的黏附属性缺失(E-(E-钙粘蛋白减少钙粘蛋白减少) )，肾小

11、管基底膜的破坏，表达，肾小管基底膜的破坏，表达-SMASMA的肌成纤维细胞增多及其向间质迁移最终导致的肌成纤维细胞增多及其向间质迁移最终导致间质纤维化。间质纤维化。 。 肾间质纤维化的另一决议要素是肾间质纤维化的另一决议要素是ECMECM合成与降解合成与降解平衡的调理平衡的调理 肌成纤维细胞分泌肌成纤维细胞分泌FNFN参与参与ECMECM构成。构成。 本研讨选择本研讨选择FNFN作为察看作为察看ECMECM聚积的评价目的聚积的评价目的TEMT与肾小管间质纤维化与肾小管间质纤维化讨讨 论论 我们实验结果发现正常肾小管上皮细胞因未发生我们实验结果发现正常肾小管上皮细胞因未发生明显转分化，其明显转分

12、化，其FNmRNAFNmRNA的分泌甚微，的分泌甚微， 而而5mg/ml5mg/ml人白蛋白诱导人白蛋白诱导HK-2HK-2细胞转分化的发生同细胞转分化的发生同时，检测到时，检测到FNmRNAFNmRNA表达呈现时间依赖性加强，表达呈现时间依赖性加强，进一步参与肾间质纤维化的构成。进一步参与肾间质纤维化的构成。TEMT与肾小管间质纤维化与肾小管间质纤维化讨讨 论论 讨讨 论论大黄素阻滞大黄素阻滞TEMT在肾间质在肾间质 纤维化中的作用纤维化中的作用实验中，我们经过运用实验中，我们经过运用20g/ml20g/ml大黄素与白蛋白共同作用大黄素与白蛋白共同作用HK-2HK-2细胞制造干涉模细胞制造干

13、涉模型。型。实验结果发现，经大黄素干涉后实验结果发现，经大黄素干涉后HK-2HK-2细胞后其细胞后其E-cadherinmRNAE-cadherinmRNA的表达亦有渐的表达亦有渐降趋势，降趋势，-SMA mRNA-SMA mRNA表达上升，但在表达上升，但在48h48h内其下降内其下降/ /上升趋势呈明显减缓，上升趋势呈明显减缓，较白蛋白诱导组有明显差别。较白蛋白诱导组有明显差别。大黄素部分阻滞了大黄素部分阻滞了HK-2HK-2细胞的细胞的TEMTTEMT过程。过程。 讨讨 论论大黄素阻滞大黄素阻滞TEMT在肾间质在肾间质 纤维化中的作用纤维化中的作用而经过对而经过对FNmRNAFNmRNA表达情况的检测发现：经大黄素干涉后，表达情况的检测发现：经大黄素干涉后，FNmRNAFNmRNA表达亦表达亦遭到部分抑制。遭到部分抑制。缘由能够为：缘由能够为：1 1、大黄素阻滞了、大黄素阻滞了HK-2HK-2细胞的转分化发生，使得细胞