大蒜素对小鼠膀胱癌的体内及体外抗肿瘤效果的实验研究

1、大蒜素对小鼠膀胱癌的体内及体外抗肿瘤效果的实验研究【摘要】目的了解大蒜素对小鼠膀胱肿瘤的抗肿瘤效 果与机制。方法通过mtt实验评定了大蒜素的直接细胞毒活 性，动物实验显示大蒜素在体内有明显的抗肿瘤效果，并用 ldh释放法测细胞毒活性。结果大蒜素对膀胱肿瘤有直接细 胞毒作用。大剂量治疗组与对照组相比，肿瘤的生长速度明 显受到抑制，大蒜素治疗后产生了针对b16肿瘤细胞的淋巴 细胞。结论大蒜素对膀胱肿瘤有明显的抗肿瘤作用。这种效 果可能与直接细胞毒作用和免疫反应有关。大蒜素可能是一 种有效的表浅膀胱癌腔内治疗药物。【关键词】大蒜素；抗肿瘤；膀胱肿瘤 thee xperimentalresearc h

2、ontheantitumoreffectofallicinonmuri nebladderabstract : objectivetounders tandanti tumoreffe ctandmechanismofallicinonmurinedirectinhibitioneffectsofallicininvitrowa sevaluatedbymtttu moreffectofallicin invivrowasdeterminedbyanimalexperimemphocytewasmeasureogenouslactatedehyultsallicinhadsignnt.ctla

3、ctivityofly dbythereleaseofend drogenase(ldh). res ificantdirectcytotoxicitytobladdercancercells. inhighdosegroup,itshowedam earanceandgrowthof oncomparedwi thcont dygeneratedthecytotyandimmunemaybeancaltreatmentagentfkeywordsallicinantiturnarkeddelayintheapptumorsafterinjectirolgroup (p <).thebo

4、toxiclymphocyteresponsestob16tumorce llsaftertreatedwit hhasamarkedanti tumoreffectonbladdereffectmayberelatedtodirectcytotoxicieffectiveintravesiorsuperf icialbladd ercancer.oreffect； bladdert umor大蒜为百合科葱属两年生草本植物，有效成分为大蒜素，在我国民间药用已有三千多年的历史。现代研究提示大蒜对 肿瘤有良好的防癌、抗癌作用。有报道显示大蒜提取液对膀 胱肿瘤生长有明显抑制作用，但是一些实验动物死于

5、治疗相 关的毒性1。b16肿瘤细胞是美国田纳西大学利用口服n-甲酰胺从 c3h小鼠诱发而来2。这种低分化移行细胞癌所表现的转 移特性与人移行细胞癌相类似。为了解大蒜素对膀胱肿瘤的 治疗效果和机理，我们测定了大蒜素在体外对b16肿瘤细胞 生长的影响，并且评估了其在体内抗肿瘤效果和对局部免疫的影响。1材料与方法动物30只68周龄雌性c3h/he鼠是从北京维通利华 实验技术有限公司购得。所有实验均根据广东医学院动物实 验指南进行。肿瘤细胞和大蒜素b16肿瘤细胞由日本癌症资源库的细 胞库提供。培养于含10%小牛血清的dmem和3 7 °c的5%c02中。 大蒜素是由广东万基药业有限公司生产。

6、2 方法mtt实验在96孔板中建立细胞培养。在每孔中含5x103 b16肿瘤细胞，每5孔为一组。为测定大蒜素在体外对肿瘤 细胞生长率的影响，将不同剂量的大蒜素与b16细胞共同培 养48ho加入mtt试剂培养最后4h。酶标仪上波长560nm测 定0d值。动物实验为测定大蒜素对膀胱肿瘤的治疗效果，将 c3h/he小鼠分成3组，每一组含10只小鼠。第1组注射生 理盐水lml，第2组注射mg大蒜素，第3组则注射25mg大 蒜素。所种植的肿瘤细胞均用细胞铲从培养瓶中收集，用生 理盐水洗2次。并将其悬浮于生理盐水中。浓度调整为ix 106细胞/ml。将肿瘤细胞种植到c3h小鼠在后侧腹皮下，剂量 为ml。次

7、日将大蒜素注射到肿瘤附近的皮下，剂量分别为 mg和25mg的大蒜素。每周两次用测量器测定肿瘤的两径，观察肿瘤的生长情况3。ldh释放法测细胞毒活性c3h/he小鼠皮下注射25mg大 蒜素一次进行免疫，注射生理盐水作为阴性对照。1周后收 集脾细胞。96孔培养液板中将效应脾细胞与b16靶细胞按不 同比例混合。每组3孔。在实验前，b16靶细胞与丝裂霉素 c注射液共同培养lh。96孔培养板在3 7°cc02培养箱中培 养24h。按ldh细胞毒试剂盒提供方法与492nm波长下检测。见lo细胞毒活性=10 0%x实验组ldh-自然释放ldh最大释放 ldh-自然释放ldh统计学分析将所有结果进行

8、统计分析，分析软件为 spss11，分析方法为通过方差分析以后的两两比较计算p值。3结果大蒜素对肿瘤细胞的体外影响mtt实验表明，当大蒜素 剂量为mg/ml时，即有中度细胞毒作用，肿瘤的抑制率可迗 到，剂量为mg/ml对膀胱癌细胞有显著的直接细胞毒作用。 结果见表1。1 ldh释放法测细胞毒活性表1大蒜素对b16肿瘤细胞体外生长的抑制 大蒜素的在体抗肿瘤效果与对照组相比，大蒜素大剂量治疗组明显延迟了肿瘤的发生。在注射19d后，对照组的肿 瘤发生率即高达80%；而小剂量治疗组的肿瘤发生率为50%； 但是大剂量治疗组的肿瘤发生率却仅为20%o在第19天，生 理盐水对照组，小剂量治疗组和大剂量治疗组

9、的肿瘤面积分 别是，和。大剂量治疗组与生理盐水对照组相比，肿瘤的生 长速度明显受到抑制。结果见表2。大蒜素治疗后，产生了针对b16肿瘤细胞的细胞毒t淋 巴细胞为研究这种治疗方法是否能促进体内淋巴细胞肿瘤细 胞的细胞毒活性，将c3h小鼠注射25mg大蒜素进行免疫， 注射生理盐水作阴性对照。如图2所示，大蒜素免疫后产生 了针对b 16肿瘤细胞的细胞毒淋巴细胞4，而生理盐水则 无此作用。4讨论大蒜素化学名为二烯丙烯丙基三硫，是大蒜的主要成分 1997年等发现老蒜提取液浓度为mg/ml时，对b16肿瘤细胞 的抑制率是;当浓度为mg/ml或高于此时，老蒜提取液对 膀胱癌细胞有明显直接的细胞毒活性5。表2

10、大蒜素治疗后肿瘤的面积大剂量大蒜素与对照组比较，*p<2大蒜素治疗后肿瘤发生率我们在研究中观察到大蒜素对肿瘤细胞有直接的细胞 毒活性。mtt实验表明，大蒜素的浓度为20 u g/ml时即有 中度直接细胞毒作用，抑制率可达到41%；当浓度为mg/ml时可见到重大的直接细胞毒活性。与老蒜提取液相比，大蒜 素的生物学活性要强25倍。这可能是因为两者的主要成分 不同，虽然它们都来源于大蒜，但是老蒜提取液的主要成分 是s-稀丙基半胱氨酸。大蒜素对肿瘤细胞直接抑制的机理目前还不清楚。大蒜 素的细胞毒作用可能是通过降低活性氧类自由基水平，影响 肿瘤细胞nf kb活性，使nf k b与dna结合的活性降

11、低，nf kb通路受到抑制，导致某些基因表迗水平改变6;或通 过降低芳香胺 n 乙酰基转移酶以及2 aminofluorene 活性，从而抑制肿瘤细胞的生长7。此外，大蒜素抗肿瘤 的另一个重要机制是刺激免疫系统。动物实验显示大蒜素在体内有明显的抗肿瘤效果。这种 效果与剂量有关。在大剂量治疗组，无论是肿瘤发生率还是 肿瘤生长速度均明显低于小剂量治疗组。ldh释放法测细胞毒活性实验的结果也表明，注射大蒜 素后，能产生针对b16肿瘤细胞的细胞毒t淋巴细胞。大蒜 素刺激免疫的机制与大蒜相类似。一些研究表明大蒜能引起 il 2，tnf a以及ifn y的释放，并增强噬菌作用8。 大蒜的其他活性包括增进杀

12、伤细胞活性以及淋巴细胞对丝 裂原刺激的免疫增殖反应9。这些效应，特别是细胞因子 释放模式，表明大蒜素激活thl细胞免疫反应，这种反应是 有效抗肿瘤免疫治疗所特有。综上所述，大蒜素对膀胱瘤有明显的抗肿瘤效果。这种 效果可能与其直接细胞毒作用和免疫反应有关。本研究说明 了大蒜素对膀胱肿瘤的生物学活性，并支持这样一个观点， 即大蒜素是一种有效的化学预防或化学治疗药物。大蒜素可 能是一种有效的表浅膀胱癌腔内治疗药物，而且价格低廉， 不良反应小，值得临床推广使用。【参考文献】1 lammd l, riggsdr. thepoten tialapplicationofa lliumsativum(gar1

13、i c)forthetreatmento fbladdercancer j . urolclinnortham200 0,27(2): 157.2 mi ckeydd,mickeygh,mu rphywmetvirtochara cterzationoffourn- 4(5 nitro 2 fury 1)2thiazolyformamide (fanft) induce dmousebladdertumor s. j .urol,1982, jun,127(6): 1233.3 上海市肿瘤研究所流行病学研究室.19 98年上海 市市区恶性肿瘤发病率j.肿瘤，2001, 21： 312.4 王坚

14、，谭明天，吴宏，等.泌尿外科恶性肿瘤住院 患者的情况调查j.广东医学，2001, 22： 964.5 riggsdr,dehavenjiandlammsativum(garlic)treatmentform urinetransitionalc ellcarcinoma j . ca ncerl997,79(10)： 19 87.dirschvm,gerbesalandvollmar,acompoundofgarlic,indecesapoptosisinhumanpromye1o1eukemiccells,accompaiedbygenerationofreactiveoxygenspeciesandac t i vat i onofnuc1earfactorhappab.j . molpharmacol. 199 8,53 (3): 402.7 li njg,chengw,succ,et ofgarliccomponentsdiallysulfideanddiallyldisulfideonarylaminen-acetyltransferaseactivityand2-aminofluorene-dnaadductsi