造血干细胞的发育调控ppt课件

1、造血干细胞的发育调控造血干细胞的发育调控 授课教师：刘授课教师：刘 静静jingliucsuhotmailjingliucsuhotmail生物科学与技术学院分子生物学研讨中心生物科学与技术学院分子生物学研讨中心研讨方向研讨方向1 1：造血发育调控：造血发育调控研讨方向研讨方向2 2：白血病治疗的分子机制研讨：白血病治疗的分子机制研讨 造血造血hematopoiesishematopoiesis 造血干细胞造血干细胞(hematopoietic stem cell)分分化为早期祖细胞化为早期祖细胞(primitive progenitor cell) ，经大量增殖分化成为晚期祖细胞，经大量增殖

2、分化成为晚期祖细胞(late progenitor cell)，然后再分化为具有特异形，然后再分化为具有特异形状的、骨髓中不同系别的前体细胞状的、骨髓中不同系别的前体细胞(precursor cell)，最后分化成为各类具有生，最后分化成为各类具有生理功能的血细胞的整个过程称为理功能的血细胞的整个过程称为“造血造血 。 骨髓中各类前体细胞是各系祖细胞分骨髓中各类前体细胞是各系祖细胞分化走向成熟的过渡形状。化走向成熟的过渡形状。 造血不包括成熟血细胞在体内储存、造血不包括成熟血细胞在体内储存、释放、分配和凋亡的过程。释放、分配和凋亡的过程。第一节第一节 造血器官造血器官 人体的造血器官是生成血液

3、的器官。人体的造血器官是生成血液的器官。 来源于中胚叶，主要包括骨髓、胸腺、来源于中胚叶，主要包括骨髓、胸腺、淋巴结、淋巴结、 肝脏和脾等。肝脏和脾等。 造血过程分为胚胎期造血和出生后造血。造血过程分为胚胎期造血和出生后造血。一、胚胎期造血器官一、胚胎期造血器官 人类的血液细胞首先在卵黄囊中构成，肝、人类的血液细胞首先在卵黄囊中构成，肝、脾、胸腺和骨髓均参与造血脾、胸腺和骨髓均参与造血 根据发育过程中造血中心的转移，胚胎期根据发育过程中造血中心的转移，胚胎期造血分为三个时期：造血分为三个时期： 卵黄囊造血期卵黄囊造血期 、肝造血期、肝造血期 、骨髓、骨髓造血期造血期 1. 卵黄囊造血期中胚叶造

4、血期卵黄囊造血期中胚叶造血期 始于人胚胎始于人胚胎3周左右，卵周左右，卵黄囊壁上的中胚层细胞开黄囊壁上的中胚层细胞开场分化聚集成团，称为血场分化聚集成团，称为血岛岛blood island。血岛。血岛是人类最初的造血中心。是人类最初的造血中心。 血岛外周的细胞分化为血管内皮细胞。血岛外周的细胞分化为血管内皮细胞。 血岛中央的细胞构成多能造血干细胞，继血岛中央的细胞构成多能造血干细胞，继尔分化成幼稚红细胞，以后大量的多能造尔分化成幼稚红细胞，以后大量的多能造血干细胞迁移至肝、脾、骨髓和淋巴组织血干细胞迁移至肝、脾、骨髓和淋巴组织继续增殖、分化为干细胞。继续增殖、分化为干细胞。 胚胎胚胎 2 2个

5、月后，卵黄囊逐渐退化、萎缩，个月后，卵黄囊逐渐退化、萎缩，被肝、脾取代其造血功能。被肝、脾取代其造血功能。 2肝造血期肝造血期 始于胚胎第始于胚胎第6周，是卵黄囊血岛的造血干细周，是卵黄囊血岛的造血干细胞移植到肝脏的结果，以造红细胞为主，胞移植到肝脏的结果，以造红细胞为主，后期可生成粒细胞和巨核细胞。后期可生成粒细胞和巨核细胞。肝脏是胚胎肝脏是胚胎25个月的造血中心，继续至第个月的造血中心，继续至第7个月时，逐渐被骨髓造血替代。个月时，逐渐被骨髓造血替代。此外脾、胸腺、淋巴结等也参与造血。此外脾、胸腺、淋巴结等也参与造血。 3骨髓造血期骨髓造血期 自胚胎第自胚胎第14周骨髓开场造血，周骨髓开场

6、造血，5个月以后成为胚胎期个月以后成为胚胎期的造血中心。的造血中心。骨髓中的造血干细胞来源于肝、脾，可维持终生。骨髓中的造血干细胞来源于肝、脾，可维持终生。胚胎期的骨髓主要生成红细胞、粒细胞和巨核细胞，胚胎期的骨髓主要生成红细胞、粒细胞和巨核细胞，也生成淋巴细胞和单核细胞。也生成淋巴细胞和单核细胞。 胚胎期造血的三个时期不能截然分开，胚胎期造血的三个时期不能截然分开，此消彼长，互为交错。此消彼长，互为交错。二、出生后造血二、出生后造血 出生后造血主要靠骨髓。出生后造血主要靠骨髓。 在正常情况下骨髓是独一能产生红细胞、在正常情况下骨髓是独一能产生红细胞、粒细胞和血小板的场所，也生成淋巴细胞粒细胞

7、和血小板的场所，也生成淋巴细胞和单核细胞。和单核细胞。 脾和淋巴结为终生制造淋巴细胞的器官。脾和淋巴结为终生制造淋巴细胞的器官。 1骨髓骨髓 骨髓是位于骨髓腔内的海绵样胶状组织，有红骨髓和黄骨髓是位于骨髓腔内的海绵样胶状组织，有红骨髓和黄骨髓之分。骨髓之分。婴幼儿的骨髓几乎都参与造血，即全为红骨髓。婴幼儿的骨髓几乎都参与造血，即全为红骨髓。约从约从5岁开场，长骨的髓腔内出现脂肪细胞，随年龄增岁开场，长骨的髓腔内出现脂肪细胞，随年龄增长，长骨远端的红骨髓转化为黄骨髓。长，长骨远端的红骨髓转化为黄骨髓。成人的红骨髓和黄骨髓约各占成人的红骨髓和黄骨髓约各占50%，但黄骨髓仍有造血，但黄骨髓仍有造血潜

8、能，当机体需求时又转变为红骨髓而参与造血。潜能，当机体需求时又转变为红骨髓而参与造血。 2. 淋巴器官淋巴器官 分为中枢淋巴器官和周围淋巴器官。分为中枢淋巴器官和周围淋巴器官。中枢淋巴器官主要包括胸腺和骨髓，主导淋中枢淋巴器官主要包括胸腺和骨髓，主导淋巴细胞的产生、增殖、分化和成熟。巴细胞的产生、增殖、分化和成熟。周围淋巴器官主要包括淋巴结、脾、肠粘膜周围淋巴器官主要包括淋巴结、脾、肠粘膜相关淋巴组织等，是淋巴细胞聚集和免疫相关淋巴组织等，是淋巴细胞聚集和免疫应对发生的场所。应对发生的场所。 3. 髓外造血髓外造血正常情况下，胎儿出生正常情况下，胎儿出生2个月以后，骨髓以外个月以后，骨髓以外的

9、组织如肝、脾淋巴结等不再制造红细胞、的组织如肝、脾淋巴结等不再制造红细胞、粒细胞和血小板。粒细胞和血小板。但在某些病理情况下，如骨髓纤维化、骨髓但在某些病理情况下，如骨髓纤维化、骨髓增生性疾病及某些贫血，这些组织又恢复增生性疾病及某些贫血，这些组织又恢复造血功能常可导致相应器官肿大，称造血功能常可导致相应器官肿大，称为髓外造血。为髓外造血。 一、造血细胞的生长发育一、造血细胞的生长发育 是一个延续不断的复杂过是一个延续不断的复杂过程，造血器官内的各种造血细胞在造血程，造血器官内的各种造血细胞在造血微环境中经过细胞与细胞之间相互作用，微环境中经过细胞与细胞之间相互作用，在各种细胞因子的诱导下，按

10、一定的规在各种细胞因子的诱导下，按一定的规律发育成为各种成熟的血细胞，然后释律发育成为各种成熟的血细胞，然后释放入血循环中。放入血循环中。第二节第二节 造血干造血干/祖细胞的生长发育、祖细胞的生长发育、特性以及造血调控特性以及造血调控 一根本过程 造血细胞的生长发育包括增殖、分化、成造血细胞的生长发育包括增殖、分化、成熟和释放四个方面。熟和释放四个方面。 多种调理要素控制该过程，维持血细胞数多种调理要素控制该过程，维持血细胞数量和质量稳定。量和质量稳定。造血细胞的增殖造血细胞的增殖proliferation 是指血细胞经过分裂而使其数量添加的是指血细胞经过分裂而使其数量添加的过程。有丝分裂是造

11、血细胞的主要增殖方式。过程。有丝分裂是造血细胞的主要增殖方式。 造血细胞的分化造血细胞的分化differentiation细胞发育过程中失去某些潜能而获得新功细胞发育过程中失去某些潜能而获得新功能的过程，即由多潜能转变为单潜能的能的过程，即由多潜能转变为单潜能的过程。过程。分裂后的细胞在形状和功能上产生新的特分裂后的细胞在形状和功能上产生新的特征，分化过程是不可逆的。征，分化过程是不可逆的。 造血细胞的成熟造血细胞的成熟maturation造血干细胞定向分化，从原始经幼稚到造血干细胞定向分化，从原始经幼稚到成熟细胞的发育过程。血细胞越成熟成熟细胞的发育过程。血细胞越成熟其形状越易识别，功能也日

12、趋完善。其形状越易识别，功能也日趋完善。成熟的血细胞在骨髓内经过成熟的血细胞在骨髓内经过“髓血屏障髓血屏障释放入血循环中。释放入血循环中。二造血细胞生长发育阶段二造血细胞生长发育阶段 根据造血细胞的功能和形状特征，造血细胞根据造血细胞的功能和形状特征，造血细胞生长发育阶段可分为：生长发育阶段可分为： 造血干细胞、造血干细胞、 造血祖细胞、造血祖细胞、 原始及幼稚细胞原始及幼稚细胞造血干造血干细胞阶细胞阶段段造血祖造血祖细胞阶细胞阶段段原始原始及幼及幼稚细稚细胞阶胞阶段段成成熟熟细细胞胞二、造血干祖细胞二、造血干祖细胞 干细胞干细胞stem cellstem cell是具有自我复制和多向是具有自

13、我复制和多向分化才干的细胞。分化才干的细胞。 早期胚胎中的原始生殖细胞即胚胎干细胞，具早期胚胎中的原始生殖细胞即胚胎干细胞，具有广泛的发育和分化潜能，称为全能干细胞有广泛的发育和分化潜能，称为全能干细胞totipotent hematopoietic stem celltotipotent hematopoietic stem cell，THSCTHSC。 胚胎干细胞分化为各类组织干细胞，造血组织胚胎干细胞分化为各类组织干细胞，造血组织中存在造血干细胞、血管干细胞和间质干细胞。中存在造血干细胞、血管干细胞和间质干细胞。一造血干细胞一造血干细胞 造血干细胞又称多能干细胞，由中胚层细胞造血干细胞又

14、称多能干细胞，由中胚层细胞分化而来，是各种血细胞的始祖，具有高度分化而来，是各种血细胞的始祖，具有高度自我更新、多向分化和增殖才干，并且在造自我更新、多向分化和增殖才干，并且在造血组织中含量极少，其形状酷似小淋巴样细血组织中含量极少，其形状酷似小淋巴样细胞而难以识别。胞而难以识别。 1.造血干细胞的根本特征造血干细胞的根本特征 1自我更新自我更新 即细胞经过有丝分裂产生的两个子代即细胞经过有丝分裂产生的两个子代细胞与亲代细胞具有一样的特征。造血干细细胞与亲代细胞具有一样的特征。造血干细胞的自我更新是维持其数量平衡的根底，亦胞的自我更新是维持其数量平衡的根底，亦称自我维持。高度的自我更新才干是造

15、血干称自我维持。高度的自我更新才干是造血干细胞最根本的生物学特征之一。细胞最根本的生物学特征之一。2 造血干细胞静止形状造血干细胞静止形状 干细胞干细胞95%以上细胞处于以上细胞处于G0期静止形期静止形状，不进展状，不进展DNA合成和有丝分裂，当机体合成和有丝分裂，当机体发生缺氧、感染、失血和创伤等应激形状发生缺氧、感染、失血和创伤等应激形状时，干细胞从静止进入增殖的数量添加，时，干细胞从静止进入增殖的数量添加，以满足机体对造血的需求。以满足机体对造血的需求。 3 造血干细胞全能性多向分化造血干细胞全能性多向分化 分化是不可逆的，一旦定向分化为某种祖细分化是不可逆的，一旦定向分化为某种祖细胞，

16、就不能够再变成其它的祖细胞。胞，就不能够再变成其它的祖细胞。 造血干细胞在特定的条件下可以分化成造血干细胞在特定的条件下可以分化成红细胞、粒细胞、单核细胞、血小板、组织红细胞、粒细胞、单核细胞、血小板、组织嗜碱细胞、嗜碱细胞、T淋巴细胞、淋巴细胞、B淋巴细胞及自然杀淋巴细胞及自然杀伤细胞等的祖细胞。伤细胞等的祖细胞。4 造血干细胞不均一性造血干细胞不均一性 造血干细胞有增殖态与静止态之分，造血干细胞有增殖态与静止态之分，并且不断地在静止和增殖态之间转换。造并且不断地在静止和增殖态之间转换。造血干细胞代龄有丝分裂的次数不同构血干细胞代龄有丝分裂的次数不同构成了干细胞群体的代龄构造，构成干细胞成了

17、干细胞群体的代龄构造，构成干细胞不均一性。不均一性。 2造血干细胞检测造血干细胞检测 单个细胞在生物体内有才干长期重建造血是判单个细胞在生物体内有才干长期重建造血是判别该细胞为造血干细胞的别该细胞为造血干细胞的“金规范。金规范。造血干细胞的数量极少，形状上不能区别，干造血干细胞的数量极少，形状上不能区别，干细胞抗原性弱，仅有很少外表抗原。细胞抗原性弱，仅有很少外表抗原。 1脾集落测试法脾集落测试法 1961年年Till等首先采用体内实验小鼠脾集落构成间接等首先采用体内实验小鼠脾集落构成间接证明了造血干细胞的存在：证明了造血干细胞的存在：将受体小鼠以致死剂量射线照射后，破坏全部造血将受体小鼠以致

18、死剂量射线照射后，破坏全部造血细胞，再输以供体骨髓或血液，小鼠能存活，并细胞，再输以供体骨髓或血液，小鼠能存活，并在受体小鼠脾中构成红系、粒系、巨核系细胞结在受体小鼠脾中构成红系、粒系、巨核系细胞结节，这些都是由单个细胞增殖分化而来，即脾集节，这些都是由单个细胞增殖分化而来，即脾集落构成单位落构成单位CFU-S；将脾结节细胞静脉注射给受体小鼠，该小鼠也能存将脾结节细胞静脉注射给受体小鼠，该小鼠也能存活。证明了骨髓或血液中存在血液细胞的祖先细活。证明了骨髓或血液中存在血液细胞的祖先细胞。胞。2 2单克隆抗体法单克隆抗体法 利用利用FACSFACS自动细胞分选系统分选出自动细胞分选系统分选出CD3

19、4+CD38+CD34+CD38+及及CD34+CD38CD34+CD38亚群细胞，在无血清体系中参亚群细胞，在无血清体系中参与各种细胞因子如与各种细胞因子如SCFSCF、IL-3IL-3、IL-6IL-6、GM-GM-CSFCSF及及EpoEpo刺激，结果阐明，刺激，结果阐明，CD34+ CD38CD34+ CD38单个细胞可构成原代集落，并可向红系、粒单个细胞可构成原代集落，并可向红系、粒系、巨噬系、巨核系等系、巨噬系、巨核系等 细胞分化。细胞分化。 CD34+CD38细胞的性能接近于造血干细胞，同时也细胞的性能接近于造血干细胞，同时也证明了造血干细胞具有多向分化的才干。证明了造血干细胞具

20、有多向分化的才干。 3 造血干细胞的外表标志的流式细胞仪检测造血干细胞的外表标志的流式细胞仪检测 CD34+ 细胞具有长期重建造血的才干；细胞具有长期重建造血的才干； CD34+ CD38细胞比细胞比CD34+ 细胞具有更强的细胞具有更强的长期造血才干；长期造血才干； AC 133+细胞也被以为是早期造血细胞的标志。细胞也被以为是早期造血细胞的标志。二造血祖细胞二造血祖细胞 造血干细胞进一步分化为各种造血祖细胞造血干细胞进一步分化为各种造血祖细胞 hematopoietic progenitor cellhematopoietic progenitor cell。 造血祖细胞是一类由造血干细胞

21、分化而来，造血祖细胞是一类由造血干细胞分化而来，但失去自我更新才干的过渡性、增殖性的细但失去自我更新才干的过渡性、增殖性的细胞群，过去称为定向干细胞。胞群，过去称为定向干细胞。 造血祖细胞根据其分化才干，可分为多向造血祖细胞根据其分化才干，可分为多向祖细胞和单向祖细胞。多向祖细胞可进一祖细胞和单向祖细胞。多向祖细胞可进一步分化步分化 为单向祖细胞。为单向祖细胞。 经过体外造血细胞半固体培育证明了造血经过体外造血细胞半固体培育证明了造血祖细胞的存在。祖细胞的存在。红细胞爆式集落构成单位红细胞爆式集落构成单位 BFU-E红细胞的祖细胞体外培育红细胞的祖细胞体外培育红细胞集落构成单位红细胞集落构成单

22、位 (CFU-E)三造血干祖细胞的临床运用三造血干祖细胞的临床运用 造血干祖细胞移植主要运用于：造血干祖细胞移植主要运用于：1.血液系统恶性肿瘤，如急、慢性白血病等；血液系统恶性肿瘤，如急、慢性白血病等；2.血液系统非恶性肿瘤性疾病，如再生妨碍血液系统非恶性肿瘤性疾病，如再生妨碍性贫血、异常血红蛋白病、性贫血、异常血红蛋白病、Fanconi贫血、贫血、难治性贫血等；难治性贫血等；3.实体肿瘤化疗后造血重建，如乳腺癌、卵实体肿瘤化疗后造血重建，如乳腺癌、卵巢癌、神经母细胞瘤等；巢癌、神经母细胞瘤等；4.其他，如重症结合免疫缺陷症、本身免疫其他，如重症结合免疫缺陷症、本身免疫性疾病、基因治疗等。性

23、疾病、基因治疗等。 三、造血调控三、造血调控 造血细胞的增殖、分化受控于不同的调控系统，以造血细胞的增殖、分化受控于不同的调控系统，以坚持各种血细胞数量和质量的相对稳定。其中细胞坚持各种血细胞数量和质量的相对稳定。其中细胞因子的调控占重要位置。因子的调控占重要位置。 细胞因子细胞因子cytokines是一组基因编码的低分子量是一组基因编码的低分子量蛋白质细胞外信号分子，有的是糖蛋白，有的那么蛋白质细胞外信号分子，有的是糖蛋白，有的那么不含糖基，在机体内含量极低，半衰期短，主要功不含糖基，在机体内含量极低，半衰期短，主要功能是在细胞间传送信息，从而影响造血活动。能是在细胞间传送信息，从而影响造血

24、活动。一集落刺激因子类一集落刺激因子类( colony-stimulating factors, CSFs )( colony-stimulating factors, CSFs ) 主要有以下几种：主要有以下几种：1.1.红细胞生成素红细胞生成素erythropoietinerythropoietin，EPOEPO 刺激红系祖细胞的增殖和分化，以提高红刺激红系祖细胞的增殖和分化，以提高红细胞数量。细胞数量。2.粒细胞集落刺激因子粒细胞集落刺激因子(G-CSF) 除促进粒系祖细胞构成集落外，除促进粒系祖细胞构成集落外，G-CSF可诱导某些可诱导某些白血病细胞株分化成熟，激活中性粒细胞的吞噬功白

25、血病细胞株分化成熟，激活中性粒细胞的吞噬功能。能。3.粒巨噬细胞集落刺激因子粒巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF) 除了促进中性粒细胞、单核细胞祖细胞增殖、分化除了促进中性粒细胞、单核细胞祖细胞增殖、分化 成熟外，对成熟细胞也产生作用。成熟外，对成熟细胞也产生作用。4.巨噬细胞集落刺激因子巨噬细胞集落刺激因子M-CSF 促进单核系祖细胞的增殖和分化，激活巨噬促进单核系祖细胞的增殖和分化，激活巨噬细胞的吞噬和分泌功能。细胞的吞噬和分泌功能。5.多系集落刺激因子多系集落刺激因子multi-CSF 促进多系集落生长。促进多系集落生长。6.血小板生成素血小板生成素thrombopoietin, TPO

26、 促进巨核细胞集落构成。促进巨核细胞集落构成。二白细胞介素二白细胞介素interleukin, IL)interleukin, IL)白细胞介素主要是白细胞产生的信号分子，白细胞介素主要是白细胞产生的信号分子，不仅在免疫系统中传送信息，同时也参与不仅在免疫系统中传送信息，同时也参与造血系统的造血调控。造血系统的造血调控。三其它细胞因子三其它细胞因子1.1.干细胞因子干细胞因子stem cell factor, SCFstem cell factor, SCF 又称肥大细胞生长因子又称肥大细胞生长因子 促进肥大细胞生长；协同促进造血干祖促进肥大细胞生长；协同促进造血干祖细胞增殖、分化。细胞增殖、

27、分化。2 2FLT-3FLT-3配基配基(FLT-3 ligand, FL) (FLT-3 ligand, FL) 诱导处于静止期的造血干祖细胞进人细胞诱导处于静止期的造血干祖细胞进人细胞周期，促进其扩增。周期，促进其扩增。1原癌基因原癌基因 如：如：c-myc基因、基因、ras相关基因、相关基因、c-abl基因、基因、bcl-2 基因、基因、c-kit基因等。基因等。四造血基因调控四造血基因调控 原癌基因的编码产物可为：细胞因子、细胞原癌基因的编码产物可为：细胞因子、细胞因子受体、细胞内蛋白激酶、细胞内信号传送因子受体、细胞内蛋白激酶、细胞内信号传送分子及转录因子等。分子及转录因子等。 2.

28、 抑癌基因抑癌基因 如：如：p53基因、基因、WT1基因、基因、NF1基因、基因、DCC、Rb基因等。抑癌基因编码产物通常为基因等。抑癌基因编码产物通常为细胞增殖负调理因子，抑制细胞增殖、诱导终细胞增殖负调理因子，抑制细胞增殖、诱导终末分化、维持基因稳定、诱导细胞凋亡等。末分化、维持基因稳定、诱导细胞凋亡等。 3. 转录因子参与信号转导的调控转录因子参与信号转导的调控 对造血中根本的基因调控机制对造血中根本的基因调控机制 仍存在假设干悬念有待研讨：仍存在假设干悬念有待研讨：1如何在细胞周期如何在细胞周期G1与与G0之间来回转换，之间来回转换，并坚持绝大多数细胞处于并坚持绝大多数细胞处于G0静止

29、形状静止形状? 2干细胞不对称有丝分裂在基因程度上是干细胞不对称有丝分裂在基因程度上是怎样实现的怎样实现的?3干干/祖细胞基因怎样调控各类受体表达，祖细胞基因怎样调控各类受体表达，以接受造血微环境中各种正负信号的影响以接受造血微环境中各种正负信号的影响?4干细胞在基因程度如何调控向淋巴系或干细胞在基因程度如何调控向淋巴系或髓系分化髓系分化?祖细胞基因如何决议分化方向祖细胞基因如何决议分化方向?怎样怎样坚持各系之间正常恒定比例坚持各系之间正常恒定比例? 第三节 造血干祖细胞体外培育技术 体内造血干祖细胞在一个极复杂的造血微环境中增殖、分化生成血液细胞。 体外造血祖细胞培育就是在体外模拟体内的生理

30、环境，将从机体中分别出的造血祖细胞进展培育，使之生存、增殖分化。 造血祖细胞培育的主要运用：造血祖细胞培育的主要运用：1检测造血祖细胞在骨髓、外周血和脐血中的数量检测造血祖细胞在骨髓、外周血和脐血中的数量2研讨体外造血祖细胞类型、特性及生理意义研讨体外造血祖细胞类型、特性及生理意义3利用人工培育条件易于严厉控制的特点，研讨造利用人工培育条件易于严厉控制的特点，研讨造 血调理；血调理；4用于造血系统疾病发活力制，诊断、预后判别、用于造血系统疾病发活力制，诊断、预后判别、 疗效察看及治疗药物的选择等方面的研讨。疗效察看及治疗药物的选择等方面的研讨。一、造血干祖细胞体外培育的根本条件一、造血干祖细胞体外培育的根本条件一细胞培育室条件一细胞培育室条件二培育的支持物二培育的支持物三营养液三营养液四细胞因子四细胞因子五血清五血清 二、造血干祖细胞体外培育一造血祖细胞集落培育：一造血祖细胞集落培育：1 1分别培育细胞，制成单个核细胞悬液。分别培育细胞，制成单个核细胞悬液。2 2配制培育体系：按比例将培育液、细胞、血配制培育体系：按比例将培育液、细胞、血清、细胞因子参与到培育体系，混匀。清、细胞因子参与到培育体系，混匀。3 3将配制的培育体系在将配制的培育体系在3737水浴中保温水浴中保温10min10min。4 4将琼脂等支持物煮沸融化甲基纤维素不需将琼