多聚酶链式反应扩增DNA片段导学案

1、课题 2 多聚酶链式反应扩增DNA片段学习目标 知识 目标：1、了解 PCR技术的基本操作2、理解 PCR的原理3、讨论 PCR的应用 能力目标：在多聚酶链式反应扩增DNA片段的实 验过程中，应避免外源DNA污染，严格控制温度等反应条件 情感态度价值观：通过对 PCR实验的操作及结果分析，培养学生严谨的科学态度和实事求是的科研精神自主学习一： PCR技术扩增DNA的过程，与细胞内DNA复制过程类似：1细胞内DNA复制条件分析：条件组分作用模板原料酶能量引物2细胞内DNA复制过程的解析：解旋：解旋酶、 ATP， DNA两条链打开，形成两条DNA单链。引物结合：在DNA单链 3端与 DNA反向配对

2、结合。DNA聚合酶结合：DNA聚合酶与模板链结合，标志着单链合成开始。子链合成： DNA聚合酶从引物3端开始，将配对的脱氧核苷酸连接起来。后续加工： DNA聚合酶 I 将引物切去， 并合成空缺处的 DNA单链，再由 DNA连接酶将不连续的DNA子链连接起来（半不连续合成。先导链，滞后链）子链合成特点：。思考 DNA分子能准确复制的原因有哪些？。3 DNA 分子复制的人工控制解开螺旋：在时， DNA双螺旋打开，形成两条DNA单链，称为变性。恢复螺旋：在左右时，两条DNA单链重新形成双螺旋结构，称为复性。复制条件：。反应场所： （自动温度周期性调节） 。思考缓冲液相当细胞内的什么成分？（核基 质）

3、4 PCR的反应过程变性复性延伸变性：在时DNA解旋复性：在时引物与DNA单链结合延伸：在时合成DNA子链（两个引物间的序列）实验操作（1） PCR 反应体系：缓冲液、，、两种 RNA引物，水（2） 实验操作步骤按照 PCR反应体系配方配制反应液；将 PCR反应体系50 L 用微量移液器转移到微量离心管（0.5mL）中；将微量离心管放到PCR仪中；设置 PCR仪的工作参数。DNA在 PCR仪中大量扩增。2 4 水浴法：将微型离心管依次在、的恒温水浴锅中循环处理相应时间。3实验注意事项（ 1）避免外源 DNA污染：所用仪器、缓冲液、蒸馏水等使用前高压灭菌。（ 2）缓冲液和酶分装成小份， 20低温

4、保存。（ 3）每添加一种反应成分，更换一个移液器的枪头。（ 4）混匀后离心处理，使反应液集中在离心管底部。【典例分析】例 1 标准的PCR过程一般分为变性、复性、延伸三大步，这三大步需要的温度依次是() 。A94、 55、 72B72、 55、 94C55、 94、 72D80、 55、 72例 2 聚合酶链式反应(PCR 技术 ) 是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，由高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应组成一个周期，循环进行，使目的DNA得以迅速扩增，其简要过程如图所示。下列关于PCR技术叙述不正确的是() 。A PCR技术是在实验室中以少量DNA制备大量DNA的技术B反应中新合成的

5、DNA又可以作为下一轮反应的模板C PCR技术中以核糖核苷酸为原料，以指数方式扩增D应用 PCR技术与探针杂交技术可以检测基因突变限时训练1 DNA分子复制时，解旋的两条链中（）A 仅一条作为复制模板B 两条链作为模板并复制出两个不同的DNA分子C两条链作为模板并复制出两个相同的DNA分子D 两条链作为模板，各自合成一条子链，然后两条母链重新结合为原来的双螺旋分子，两条新链结合成一个全新的 DNA分子2. 下列关于DNA复制过程的正确顺序是（）互补碱基对之间氢键断裂互补碱基对之间形成氢键 DNA 分子在解旋酶的作用下解旋以解旋后的母链为模板进行碱基互补配对 子链与母链盘旋成双螺旋状结构ABCD3. 下列各项过程中，遵循“碱基互补配对原则”的有（） DNA复制 RNA复制转录翻译逆转录ABCD4. 实验室内模拟生物体DNA的复制必需的一组条件是（）酶 游离的脱氧核苷酸ATP DNA分子 mRNA tRNA 适宜的温度适宜的