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文档简介
1、钙磷镁与微量元素的临床生物化学 第一节概述 一、钙、磷代谢及调节 (一)含量与分布 钙是体内含量最多的无机盐,占体重的1.5%2%,总量约7001400g,其次是磷,占体重0.8%1.2%,总量约400800g。 99%以上的钙和86%以上的磷是以羟磷灰石形式沉积于骨、牙。 (二)吸收与排泄 吸收:在pH较低的小肠上段,钙的吸收率随年龄的增长而降低,每增加10岁减少5%10%,婴儿吸收率可达50%以上,儿童40%,成人20%左右,故老人易发生骨质疏松症。 磷的吸收率约70%,低磷时可达90%。 排泄:主
2、要通过肠道和肾脏。 钙:80%肠道 20%肾脏 磷:30%肠道 70%肾脏(三)血钙与血磷血液中钙几乎全部存在于血浆,正常血清钙2.252.75mmol/(911mg/dl) 发挥生理作用的是离子钙,但临床实验室测定的大多数是总钙。 血磷是指血液中的无机磷酸盐(HPO42、H2PO4)正常人血清无机磷0.971.61mmol/L(35mg/dl),儿童稍高。 Ca × P = 3540 大于40骨盐沉积,有利于骨钙化。小于35骨盐溶解。(四)钙、磷生理功能钙:1.参与血液凝固。
3、0; 2.参与肌肉收缩。 3.维持神经肌肉应激性。 H+HCO3 4.作为第二信使。 磷:1.作为核酸、磷脂、磷蛋白合成的原料。 2.参与高能磷酸化合物的合成。 3.构成核苷酸辅酶。 4.构成磷酸盐缓冲对。(五)钙、磷代谢调节 1.维生素D3(VitD3) 促进肠道对钙、磷的吸收;促进肾小管对钙、磷的重吸收;协同PTH促进骨重建。2.甲状旁腺素(PTH) 甲状旁腺主细胞分泌的84肽。促进溶骨作用,促进间充质细胞转化成破骨细胞,抑制破骨细胞转化为成骨细胞;促进肾小管对钙的重吸收,抑制磷的重吸收。3.降钙素
4、(CT) 甲状腺滤泡旁细胞分泌的32肽,与PTH拮抗。促进成骨作用,抑制间充质细胞转化为破骨细胞,促进破骨细胞转化为成骨细胞;抑制肾小管对钙、磷的重吸收。 二、镁代谢和生理功能 (一)镁代谢1.镁的含量与分布 占体重的0.03%,正常成人镁的总量2028g,其中60%存在于骨骼,20%30%存在于骨骼肌,其余10%存在于其它组织中。体液中细胞内液镁的含量占总量的39%,而细胞外液仅占1%。 2.血镁 血浆镁的浓度约0.671.23mmol/L,存在形式主要有三种: 离子镁 55% 血镁碳酸氢镁、柠檬酸
5、镁、磷酸镁等 15% 蛋白结合镁30% 发挥生理作用的是离子镁。 3.吸收与排泄 食物镁含量丰富,人体每天需要量300350mg,镁的吸收主要在小肠,吸收率只有30%40%,吸收率与肠腔中镁的含量成反比。体内镁的排泄主要通过肾脏。 (二)镁的生理功能 1.作为酶的辅助因子体内约300种酶的辅助因子是Mg2+。 2.维持神经肌肉的应激性 Mg2+能降低神经肌肉的应激性。三、微量元素与疾病 (一)体内化学元素组成和分类人体约含有50多种元素。 主要元素含量0.1g/kg体重C
6、、H、O、N、S、P、Ca、K、Na、Cl、Mg等必需的 Fe、Cu、Zn、Mn、Co、 Ni、Se、I、F等14种微量元素 含量0.1g/kg体重 非必需的Si、As、Rb、B、Al 等 有害的Bi、Hg、Pb、Be等 (二)必需微量元素对人体各种生命活动的影响1.促进机体的生长发育铁、铜、锌、锰、钴、碘等,作为酶和激素的重要组成成分。 2.对神经系统结构和功能的影响 铁、铜、锌、锰、钴、碘等缺乏时可导致神经系统结构和功能的异常,智力低下。 3.对内分泌系统的影响 铜、铁、锌、锰、铬等元素的缺乏
7、或过量可引起内分泌功能失常。 4.对免疫系统的影响 铁、铜、锌等缺乏时可降低机体的免疫力。5.对心血管疾病及创伤的影响 适量的锌、锰、铬、硒等元素有利于心血管的结构和功能。如食物中的锌/镉比与高血压的发生和预后密切相关。多种微量元素还能影响核酸和蛋白质的生物合成,故有利于创伤的愈合和疾病的恢复。 第二节 钙、磷、镁和微量元素测定 一、钙的测定 血钙测定方法很多。 化学法 滴定法(氧化还原滴定,络合滴定); 比色法(邻甲酚酞络合法,甲基麝香草酚蓝法)。 物理法 火
8、焰光度法;ISE法;原子吸收分光光度法; 同位素稀释质谱法。1. EDTA-Na2络合滴定法 在碱性溶液中,血清钙与钙红指示剂结合成可溶性的复合物,使溶液呈淡红色,EDTA-Na2对钙有很大的亲和力,能与复合物中的钙络合,使钙红指示剂重新游离溶液变蓝色,根据EDTA-Na2滴定用量可计算出血清钙含量。 钙指示剂除钙红外,还有依地铬黑T(红蓝),钙黄绿素(黄绿),紫红酸铵(红紫)。钙红指示剂终点明显,不受血清镁干扰,血清镁在强碱性条件下生成Mg(OH)2,指示剂在强碱性条件下不稳定,加指示剂后应立即滴定。 操作简便,无需特殊仪器设备,适合于基层医院,但终点判断人为误差较大,
9、溶血、黄疸影响终点判断。 2.邻甲酚酞络合酮法(O-CPC)邻甲酚酞络合酮是一种金属络合染料,也是一种酸碱指示剂,在碱性溶液中能与钙和镁螯合,生成紫红色螯合物(吸收峰575nm),作钙测定时,加入8-羟基喹啉消除镁的干扰。Mg2+ 8-羟基喹啉可溶性络合物 Ca2+邻甲酚酞络合酮紫红色螯合物 灵敏度很高,试管、器皿如有微量的钙污染亦会引起误差,最好使一次性试管,所有试剂置塑料瓶中保存。 3.甲基麝香草酚蓝法(MTB)血清钙在碱性溶液中与甲基麝香草酚蓝(MTB)结合,生成一种蓝色络合物,加入8-羟基喹啉消除镁干扰。显色稳定,线性范围大,溶血、黄疸无干扰
10、。 4.离子选择电极法(ISE) 此法迅速、简便、灵敏度高、重复性好,并可同时测定总钙和离子钙,离子钙测定最好用血清,不用抗凝剂,在急需检测结果时可用肝素抗凝。 【正常参考值】成人总钙2.252.75mmol/L 离子钙1.151.42mmol/L 二、无机磷测定 目前还不能直接测定人体内 的磷元素,各种方法都是直接地分析两种磷酸盐阴离子(HPO42、H2PO4),常用的方法有磷钼酸法,染料法,酶法。 1.磷钼酸法以三氯醋酸沉淀蛋白,在无蛋白滤液中加入钼酸铵试剂,无机磷结合成磷钼酸,再以硫酸亚铁为还原剂,
11、还原成钼蓝。还原剂有很多种,1-氨基-2-萘酚-4-磺酸,应用历史较久,试剂不太稳定,显色时间长,灵敏度不高。氯化亚锡,灵敏度较高,颜色强度随显色时间时间而改变,偏离Beer定律。硫酸亚铁,显色较稳定。 2.孔雀绿直接显色法 血清经浓尿素溶液稀释后,用孔雀绿-钼酸试剂显色,加入吐温-20使标准液与血清标本显色反应速度接近。灵敏度较高,但影响因素多,重复性差,显色不稳定。 3.酶法 三、镁的测定化学法 钙镁试剂比色法,达旦黄比色法,甲基麝香草酚蓝比色法 传统方法 物理法 原子吸收分光光度法(参考方法),同位素稀 释中子活化法(决
12、定性方法) 酶法 新进展,将成为新的自动方法。 1.钙镁试剂(Calmagite)比色法 血清镁在碱性条件下与钙镁试剂生成紫红色络合物,颜色深浅与镁浓度成正比。加入EGTA 乙二醇双(-氨基乙醚)-N,N,N,N-四乙酸,可消除钙的扰。吸收峰520nm。 显色稳定,操作简便,快速,可手工操作,也可用于自动化分析。 2.原子吸收分光光度法 血清经酸性氯化镧溶液作50倍稀释,直接用原子吸收分光光度计检测285.2nm的吸光度。操作简便,准确,精密度好,可同时进行钙的测定422.7nm。 3.酶法 【正常参考值】0.671.23mmol/L 四、铁的测定血清铁测定 血清总铁结合力(TIBC)测定 TIBC是指可与血清运铁蛋白结合的铁的最大量。血清铁和总铁结合力的百分比称为铁饱和度。 测定方法,亚铁嗪比色法。323Fe2Fe运铁蛋白)(运铁蛋白酸性 Fe3+还原剂Fe2+ Fe2+3亚铁嗪Fe2+-亚铁嗪
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