羊水细胞培养染色体检查

1、羊水细胞培养染色体检查通过羊水细胞培养，产前诊断染色体疾病的可靠性达到96%o（一）适应证1 孕妇年龄超过35岁以上者。2已生过21 三体综合征患儿及有相应的家族史者。3有染色体异常家族史或夫妇双方一方为异常染色体携带者。4 疑有性连锁遗传疾病者。5 已生育过神经管畸形儿者。6有畸形儿、智力低下儿家族史及近亲结婚者。7羊水过多及有重复流产史者。8妊娠早期受外界因素影响，有可能使胎儿异常者。（二）禁忌证1 孕周大于20周者，培养成功率较低，不适合羊水细胞培养染 色体检查。2先兆流产、重复流产的危险期。3妊娠合并其他疾病的急性期。（三）简易羊水细胞培养染色体检查1取材：羊膜腔穿刺一般选择孕期在16

2、-18周时，在无菌条件 下抽取羊水1020ml,注入10ml离心管中，立即送实验室以800 1000r/min离心10分钟，吸去上清液，留0.5ml用吸管轻轻吹打，制 成细胞悬液。2配制细胞培养液：选用25ml方形细胞培养瓶2个，每瓶含 3mlf10或tc199,小牛血清1ml,青霉素100u/ml,链霉素100 u g/ml, 调ph为6.87.0。选用无菌一次性使用的细胞培养瓶及羊水全培养 基更好。3原代培养：将羊水细胞悬液混匀平均移入2个培养瓶内，封紧 瓶口，平放于37°c培养箱内静置45天，倒置显微镜下观察细胞生 长情况，第7天无论细胞生长情况怎样均须换液。倒出培养瓶中原培

3、养液，加入新配制的培养液1.52ml继续培养，每12天镜检1次。 将培养瓶置37°c含5%co2的培养箱内，放松培养瓶盖，开放培养， 能提高培养成功率。应注意，镜检时培养物不能离开培养箱时间太长, 以免温度下降，或污染影响培养结果。般在培养45天吋细胞贴 壁生长，这时多为纤维细胞或上皮样细胞，810天可见大量细胞生 长。4制片：当瓶内贴壁细胞层每个群落屮出现有丝分裂细胞1520 个以上时，说明细胞群落处于有丝分裂的高峰，即可收获进行染色体 制片。在收获前加秋水仙素使最终浓度为0.4u g/ml,作用吋间为2 6小时，用竹制刮剥器将贴壁细胞刮下，或用37°c预热0.25%的胰

4、蛋 白酶水溶液将细胞消化下来，移入离心管中，用吸管轻轻吹打均匀制 成细胞悬液。以8001000r/min离心10分钟，吸去上清液，加入37°c 预热0.075mol/l氯化钾4ml, 37°c水浴中低渗710分钟。以后步骤 按外周血淋巴细胞培养染色体检查制备法即可得到染色体标本。5原瓶传代：当培养细胞生长不旺盛或不均匀时，可做传代培养。 在无菌操作下，倒去瓶中原有培养液，加入0.25%的胰蛋口酶水溶液 12ml,在37°c条件下轻轻摇动培养瓶，一般经35分钟倒掉胰蛋 白酶溶液，然后加入培养液56ml,用吸管反复轻轻吹打，使细胞 从瓶壁脱落，制成细胞悬液分装两瓶，各

5、加小牛血清lml,置37°c培 养箱继续培养，细胞一般在4小时开始贴壁，24小时贴壁完毕。（四）羊水细胞飞片培养染色体检查羊水细胞飞片培养法与简易羊水细胞培养法不同的是预先处理 好盖玻片置方形细胞培养瓶内，将羊水细胞悬液轻轻滴在盖玻片上， 依靠表面张力，尽量使细胞悬液既不流到盖玻片以外的地方，又能占 满全部盖玻片表面，静置37°c培养箱内34小时，然后加培养液2 3ml,封紧瓶口继续培养。在收获吋直接取出盖玻片低渗固定即可。（五）羊水细胞培养染色体检查注意事项1以妊娠1620周时羊水质量最好。2在抽取羊水以前，让孕妇翻动身体，以获得更多的细胞。3在培养过程中严格无菌操作技术是避免污染的最佳手段。4培养液ph以6.87.0为准。5培养瓶一定要瓶壁平整、光洁，以免影响细胞贴舉。6