细胞免疫学实验0606

1、微生物学与免疫学教研室2/22department of microbiology and immunology 6-june-2014 内容提要内容提要e花环实验花环实验1淋巴细胞转化实验淋巴细胞转化实验2大吞噬实验大吞噬实验3小吞噬实验小吞噬实验43/22department of microbiology and immunology 6-june-2014 e花环试验人外周血人外周血t t淋巴细胞淋巴细胞上能与绵羊红细胞结合的受体上能与绵羊红细胞结合的受体，称为，称为e e受体，即受体，即cd2cd2分子或分子或lfa-2 lfa-2 （淋巴细胞功（淋巴细胞功能相关抗原能相关抗原-2-

2、2） ；在一定的试验条件下，绵羊红；在一定的试验条件下，绵羊红细胞能与该受体结合形成以细胞能与该受体结合形成以t t细胞为中心，四周绕细胞为中心，四周绕以绵羊红细胞的玫瑰花团，故称以绵羊红细胞的玫瑰花团，故称e e花环形成试验。花环形成试验。 ttbsrbccd24/22department of microbiology and immunology 6-june-2014 固定、染色v固定：固定：取出孵育后的细胞，滴加0.8%戊二醛200l （等体积），轻轻悬浮混匀，4孵育放置20-30minmin。v涂片：涂片：向上述细胞悬液中加50l美兰染液，混匀，静置5min，取一滴于载玻片上，加盖

3、玻片。5/22department of microbiology and immunology 6-june-2014 镜检镜检：镜检：淋巴细胞呈蓝色，srbc呈红色围绕淋巴细胞形成花环，凡表面粘附有3个或3个以上srbc者为花环形成细胞（即e阳性细胞） 计数200个淋巴细胞，算出花环形成百分率，并推测其t淋巴细胞百分率。正常值为：5080%。注意：注意：计数及摇匀细胞时动作应轻柔，避免打散已形成的花环6/22department of microbiology and immunology 6-june-2014 结果7/22department of microbiology and i

4、mmunology 6-june-2014 e花环分类nea-rfc(效应t细胞)：正常值为1535%。 （activated rosette formation cells,a-rfc）。 e-rfc(总和)：正常值为6080%。意义：意义： e-受体为t细胞所特有，是鉴定t细胞的重要标志之一，还用于t细胞的分离。 用于检测患者外周血中t细胞的比例及数目，间接反映患者细胞免疫功能。视频动画视频动画8/22department of microbiology and immunology 6-june-2014 内容提要淋巴细胞转化实验淋巴细胞转化实验2e花环实验花环实验1大吞噬实验大吞噬实验

5、3小吞噬实验小吞噬实验49/22department of microbiology and immunology 6-june-2014 淋巴细胞转化试验植物血凝素（植物血凝素（phapha）、刀豆蛋白）、刀豆蛋白a a（conacona）选择性刺激选择性刺激t t细胞细胞增殖增殖；脂多糖（脂多糖（lpslps）、葡萄球菌）、葡萄球菌a a蛋白（蛋白（spaspa）可刺）可刺激激b b细胞细胞增殖；增殖；t细胞、细胞、b细胞表面具有抗原识别受体和有丝分细胞表面具有抗原识别受体和有丝分裂原受体裂原受体美美洲洲商商陆陆10/22department of microbiology and imm

6、unology 6-june-2014 淋巴细胞转化试验11/22department of microbiology and immunology 6-june-2014 原理当t淋巴细胞在体外培养时，加入pha或cona刺激， t淋巴细胞可转化为淋巴母细胞，同时伴有dna、rna及蛋白质合成的增加，最终导致细胞分裂。根据其转化率可测定t淋巴细胞的功能，从而反映机体的细胞免疫功能。 12/22department of microbiology and immunology 6-june-2014 dnadna合成合成分化分化淋巴母细胞淋巴母细胞刺激物刺激物细胞变大细胞变大细胞浆扩大细胞浆扩

7、大空泡空泡核仁明显核仁明显核染色质疏松核染色质疏松t淋巴细胞淋巴细胞未转化细胞未转化细胞过渡态细胞过渡态细胞淋巴母细胞淋巴母细胞13/22department of microbiology and immunology 6-june-2014 转化淋巴细胞的判断标准转化淋巴细胞的判断标准细胞细胞类别类别形态特征形态特征转化的淋巴细胞转化的淋巴细胞未转化的未转化的淋巴细胞淋巴细胞淋巴母细胞过渡型细胞胞体大小（直径）胞体大小（直径）1020m或更大1216m68m 胞胞 核核位 置多偏于一侧，少数位于中央中央或稍偏多位于中央染 色 质疏松，呈粒状较疏松致密团聚核 仁清晰，可见13个有或无无有丝分

8、裂有时可见无无 胞胞 浆浆量丰富，核之一侧较宽广稍宽较少，常呈一窄环嗜碱性+空 泡常可见有或无无伪 足常可见有或无无14/22department of microbiology and immunology 6-june-2014 内容提要内容提要大吞噬实验大吞噬实验3淋巴细胞转化实验淋巴细胞转化实验2e花环实验花环实验1小吞噬实验小吞噬实验415/22department of microbiology and immunology 6-june-2014 原理巨噬细胞对颗粒性抗原有强大的吞噬能力。常用细胞型抗原如鸡红细胞、白色念珠菌、酵母细胞等与巨噬细胞孵育，检测巨噬细胞的吞噬能力。16

9、/22department of microbiology and immunology 6-june-2014 原理1617/22department of microbiology and immunology 6-june-2014 大吞噬试验鸡红细胞鸡红细胞大吞噬细胞大吞噬细胞对鸡红细胞消化程度分级：对鸡红细胞消化程度分级：级：未消化，鸡红细胞核清晰，着色正常。级：未消化，鸡红细胞核清晰，着色正常。级：轻度消化，鸡红细胞核模糊，核肿胀，着级：轻度消化，鸡红细胞核模糊，核肿胀，着色淡。色淡。级：完全消化，鸡红细胞核溶解，染色极淡。级：完全消化，鸡红细胞核溶解，染色极淡。 18/22dep

10、artment of microbiology and immunology 6-june-2014 结果计算可观察鸡红细胞的消化程度，以判断巨噬细胞胞内杀伤功能。吞噬百分比吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/所计数的巨噬细胞总数（吞噬的未吞噬的）100%吞噬指数100个巨噬细胞吞噬的鸡红细胞总数/100个巨噬细胞19/22department of microbiology and immunology 6-june-2014 临床意义参考值：正常人吞噬百分比为60%65%，吞噬指数1%左右临床意义：可作为机体抗肿瘤能力的判断指标。恶性肿瘤病人吞噬百分比为34%38%。吞噬指数为0.6%左右。有人报告

11、，食道癌、胃癌、肠癌、乳腺癌以及其它恶性肿瘤患者的吞噬百分比都在45%以下，吞噬指数也降低。不少患者在术后有不同程度的回升，提示本试验也可作为判断肿瘤疗效及预后的一个参考指标。20/22department of microbiology and immunology 6-june-2014 内容提要内容提要3214e花环实验花环实验淋巴细胞转化实验淋巴细胞转化实验大吞噬实验大吞噬实验小吞噬实验小吞噬实验21/22department of microbiology and immunology 6-june-2014 原理v血液中的中性粒细胞通称小吞噬细胞。有强大的吞噬和消化异物的功能，构成机体天然抵抗力。在机体固有免疫和适应性免