《色层分离法》ppt课件

1、l色层分别法又称层析法或色谱分别法，它的最大特点色层分别法又称层析法或色谱分别法，它的最大特点是分别效率高，能把各种性质及相近的物质彼此分别。是分别效率高，能把各种性质及相近的物质彼此分别。现代的色谱分别技术就是在此根底上开展而来的。现代的色谱分别技术就是在此根底上开展而来的。l色层分别最早是由波兰植物学家色层分别最早是由波兰植物学家M茨维特提出来的。茨维特提出来的。他在叶绿素的石油醚溶液流经装有碳酸钙的管柱时，他在叶绿素的石油醚溶液流经装有碳酸钙的管柱时，发现碳酸钙对叶绿素中各种色素的吸附才干不同，于发现碳酸钙对叶绿素中各种色素的吸附才干不同，于是在管柱中出现了不同颜色的色谱带，因此称这种分

2、是在管柱中出现了不同颜色的色谱带，因此称这种分别方法为色层分别法或色谱分别法。别方法为色层分别法或色谱分别法。6.1 概 述年代年代发明者发明者发明的色谱方法或重要应用发明的色谱方法或重要应用1906 Tswett 用碳酸钙作吸附剂分离植物色素。最先提出色谱概念用碳酸钙作吸附剂分离植物色素。最先提出色谱概念 1931 Kuhn, Lederer 用氧化铝和碳酸钙分离用氧化铝和碳酸钙分离a-、b-和和g-胡萝卜素。使色谱法开始为胡萝卜素。使色谱法开始为人们所重视。人们所重视。1938Taylor Uray用离子交换色谱法分离了锂和钾的同位素。用离子交换色谱法分离了锂和钾的同位素。 1941 Ma

3、rtin, Synge 提出色谱塔板理论；发明液提出色谱塔板理论；发明液-液分配色谱；预言了气体可作为流液分配色谱；预言了气体可作为流动相（即气相色谱）。动相（即气相色谱）。1952Martin,James 从理论和实践方面完善了气从理论和实践方面完善了气-液分配色谱法。液分配色谱法。 1956Van Deemter提出色谱速率理论，并应用于气相色谱。提出色谱速率理论，并应用于气相色谱。1957基于离子交换色谱的氨基酸分析专用仪器问世。基于离子交换色谱的氨基酸分析专用仪器问世。 1958Golay发明毛细管柱气相色谱。发明毛细管柱气相色谱。1965Giddings 发展了色谱理论，为色谱学的发

4、展奠定了理论基础。发展了色谱理论，为色谱学的发展奠定了理论基础。 1975 Small发明了以离子交换剂为固定相、强电解质为流动相，采用抑制发明了以离子交换剂为固定相、强电解质为流动相，采用抑制型电导检测的新型离子色谱法。型电导检测的新型离子色谱法。1981 Jorgenson创立了毛细管电泳法。创立了毛细管电泳法。层析分别图示层析分别图示 “层析的本质是使一种液体均匀地渗过一个相层析的本质是使一种液体均匀地渗过一个相当细碎的物质的柱体，这些物质经过某种当细碎的物质的柱体，这些物质经过某种过程有选择地阻留了液体内的某些组分。过程有选择地阻留了液体内的某些组分。 马丁马丁A. J. P. Mar

5、tinA. J. P. Martin英英一、层析法的条件一、层析法的条件 层析法应具备的要素或条件是：层析法应具备的要素或条件是： 1. 1. 具有两相具有两相 固定相固定相固定不动的一相固定不动的一相 流动相流动相即携带样品流过固定即携带样品流过固定相的流动体。相的流动体。 2. 2. 混合物中各组分的物理化学性质有混合物中各组分的物理化学性质有差别差别 3. 3. 多次展开多次展开6.1 概概 述述二、层析法的分类二、层析法的分类l 根据层析机理不同的划分根据层析机理不同的划分凝胶层析法凝胶层析法 分配层析法分配层析法 离子交换层析离子交换层析 吸附层析法吸附层析法 吸附剂为固定相，利用吸

6、附才吸附剂为固定相，利用吸附才干强弱的差别来分别干强弱的差别来分别利用组分在固定相和流动相间利用组分在固定相和流动相间分配系数的差别来分别分配系数的差别来分别离子交换剂作固定相，利用离离子交换剂作固定相，利用离子交换亲和力的差别来分别子交换亲和力的差别来分别凝胶作固定相，利用对分子大凝胶作固定相，利用对分子大小的筛分作用来分别小的筛分作用来分别 根据操作技术的划分根据操作技术的划分低压层析技术低压层析技术中压层析技术中压层析技术高压层析技术高压层析技术电泳法电泳法操作压力在操作压力在0.5MPa-5MPa之间之间操作压力在操作压力在5Mpa-40MPa之间之间操作压力小于操作压力小于0.5MP

7、a靠溶质分子在电场中的挪动速度靠溶质分子在电场中的挪动速度 不同而分别不同而分别二、层析法的分类二、层析法的分类 根据固定相的形状划分：根据固定相的形状划分： 柱层析法柱层析法 固定相装填在金属或玻璃管中固定相装填在金属或玻璃管中纸层析法纸层析法 以滤纸为固定相进展层析以滤纸为固定相进展层析薄层层析法薄层层析法把吸附剂粉末铺成薄层作为固定相把吸附剂粉末铺成薄层作为固定相二、层析法的分类二、层析法的分类 根据流动相的物态不同的分类根据流动相的物态不同的分类 气相层析法气相层析法液相层析法液相层析法气气-液层析法液层析法气气-固层析法固层析法液液-液层析法液层析法液液-固层析法固层析法二、层析法的

8、分类二、层析法的分类各种层析法的机理及优缺陷各种层析法的机理及优缺陷 类型类型机理机理优点优点缺点缺点适用范围适用范围吸附层析吸附层析化学、物理吸附化学、物理吸附操作简便操作简便易 受 离 子易 受 离 子干扰干扰各种生物大分各种生物大分子的分离、脱子的分离、脱色和去热源色和去热源凝胶层析凝胶层析分子筛的排阻效应分子筛的排阻效应分辨力高，不分辨力高，不会引起变性会引起变性各 种 凝 胶各 种 凝 胶介质昂贵，介质昂贵，处 理 量 有处 理 量 有限制限制分子量有明显分子量有明显差别的可溶性差别的可溶性生物大分子生物大分子分配层析分配层析溶质在固定相和流溶质在固定相和流动相中分配系数的动相中分配

9、系数的差异差异分辨力高，重分辨力高，重复性较好，能复性较好，能分离微量物质分离微量物质影 响 因 子影 响 因 子多 ， 上 样多 ， 上 样量太小量太小用于各种生物用于各种生物大分子的分析大分子的分析鉴定鉴定亲和色谱亲和色谱亲和色谱生物大分亲和色谱生物大分子与配体之间有特子与配体之间有特殊亲和力殊亲和力分辨力很高分辨力很高 一 种 配 体一 种 配 体只 能 用 于只 能 用 于一 种 生 物一 种 生 物大 分 子 ，大 分 子 ，局限性大局限性大各种生物大分各种生物大分子子聚焦色谱聚焦色谱等电点和离子交换等电点和离子交换作用作用分辨力高分辨力高进 口 试 剂进 口 试 剂昂贵昂贵蛋白质和

10、酶蛋白质和酶一、吸附柱层析二、一、吸附柱层析二、分配柱层析分配柱层析柱层析分别的原理表示图柱层析分别的根本原理表示图柱层析分别的根本原理表示图t1t0t1t2t0t0t3t1t2t0分子量： 一、吸附柱层析一、吸附柱层析 1. 原理原理 吸附柱层析是利用吸附剂对混合试吸附柱层析是利用吸附剂对混合试样各组分的吸附力不同而使各组分分别。样各组分的吸附力不同而使各组分分别。 固定相：固体吸附剂流动相：即洗脱剂。三种：纯溶剂或原试样或吸附力更强的溶液。一、吸附柱层析一、吸附柱层析l吸附剂普通是多孔性的微粒状物质，在其外表具有许吸附剂普通是多孔性的微粒状物质，在其外表具有许多吸附中心或称吸附位置，吸附中

11、心的数量多少多吸附中心或称吸附位置，吸附中心的数量多少以及吸附才干强弱直接影响其吸附性能。以及吸附才干强弱直接影响其吸附性能。l当流动相载着溶质当流动相载着溶质A渐渐流过层析柱时，溶质渐渐流过层析柱时，溶质A在固在固定相和流动相中不断的进展吸附、脱附、再吸附、再定相和流动相中不断的进展吸附、脱附、再吸附、再脱附的过程。脱附的过程。l在一定的温度下，溶质在固定相和流动相之间的平在一定的温度下，溶质在固定相和流动相之间的平衡关系服从分配定律：衡关系服从分配定律：l KD= Cs/Cml KD为分配系数为分配系数l Cm，Cs 分别为流动相和固定相中的溶质分别为流动相和固定相中的溶质A的浓的浓度。度

12、。l运用条件：温度一定运用条件：温度一定l 低浓度低浓度一、吸附柱层析一、吸附柱层析l试样中各组分的分配系数有差别，分配系数大试样中各组分的分配系数有差别，分配系数大的组分，在柱中被吸附得较牢，在固定相中保的组分，在柱中被吸附得较牢，在固定相中保管的时间较长，不易被洗脱下来，而分配系数管的时间较长，不易被洗脱下来，而分配系数小的组分被吸附得较不牢，在柱中保管时间较小的组分被吸附得较不牢，在柱中保管时间较短，易被洗脱下来。短，易被洗脱下来。l洗脱时，吸附力较强的组分，挪动的间隔小，洗脱时，吸附力较强的组分，挪动的间隔小，后出柱；吸附力较弱的组分，挪动的间隔大，后出柱；吸附力较弱的组分，挪动的间隔

13、大，先出柱。先出柱。一、吸附柱层析一、吸附柱层析2、吸附等温线、吸附等温线 吸附等温线：某种组分在吸附剂外表吸附等温线：某种组分在吸附剂外表的吸附规律。包括：线形和非线性。的吸附规律。包括：线形和非线性。1线性吸附等温线线性吸附等温线lCm：溶质A在流动相中的浓度lCs：溶质A在固定相中的浓度l当溶质A在随流动相缓慢流过层析柱的固定相时，在两相中不断吸附、脱附到达平衡l Cm Cs 吸附平衡l KD= Cs/Cm Cs 固定相Cm 流动相l洗脱曲线洗脱曲线l假设测定流出液中假设测定流出液中A的的浓度，绘制浓度，绘制CV的曲线，的曲线，那么得到洗脱曲线又那么得到洗脱曲线又叫洗提曲线。为一对叫洗提

14、曲线。为一对称的层析图谱称的层析图谱 。CV2非线性吸附等温线非线性吸附等温线l吸附剂外表具有吸附才干不同的吸附中心，溶质在其上的分配系数是吸附剂外表具有吸附才干不同的吸附中心，溶质在其上的分配系数是不同的。不同的。l吸附才干强的吸附中心，溶质在其上的分配系数吸附才干强的吸附中心，溶质在其上的分配系数KD较大，溶质分子将较大，溶质分子将首先占据它们，其次再占据较弱的、弱的和最弱的吸附中心。首先占据它们，其次再占据较弱的、弱的和最弱的吸附中心。l随着溶质在吸附中心上的浓度添加，强吸附中心逐渐被饱和，其分配随着溶质在吸附中心上的浓度添加，强吸附中心逐渐被饱和，其分配系数也渐变小。因此吸附等温线逐渐

15、向下弯曲构成凸形。系数也渐变小。因此吸附等温线逐渐向下弯曲构成凸形。l洗脱时，由于数量较多的弱的和较弱的吸附中心上的溶质先被洗下，洗脱时，由于数量较多的弱的和较弱的吸附中心上的溶质先被洗下，因此溶质集中的区域前进较快，接着较少的强吸附中心的溶质后被洗因此溶质集中的区域前进较快，接着较少的强吸附中心的溶质后被洗下流出，出现拖尾峰。下流出，出现拖尾峰。 Cs 固定相固定相Cm 流动相流动相Langmuir等温线 凸形Cs 固定相固定相Cm 流动相流动相反Langmuir等温线 凹形 3. 吸附剂的选择 吸附剂应具有适宜的吸附力。吸附剂应具有适宜的吸附力。 颗粒均匀、大小适宜。颗粒均匀、大小适宜。

16、吸附与解吸可逆。吸附与解吸可逆。 不含杂质。不含杂质。 不溶于所运用的溶剂即洗脱剂，不溶于所运用的溶剂即洗脱剂，与欲分别的物质不发生化学反响。与欲分别的物质不发生化学反响。 常用吸附柱介质常用吸附柱介质l无机物吸附介质包括：氧化铝、无机物吸附介质包括：氧化铝、硅胶、活性炭、膨润土、磷酸硅胶、活性炭、膨润土、磷酸钙钙( (凝胶型和晶型凝胶型和晶型) )、氧化钛和、氧化钛和氢氧化锌凝胶等。氢氧化锌凝胶等。l聚合物吸附介质有：琼脂糖、聚合物吸附介质有：琼脂糖、葡聚糖、纤维素和聚丙烯酰胺葡聚糖、纤维素和聚丙烯酰胺等等1Al2O3中性、酸性、碱性I Al2O3分类分类中性：适用于醛，酮，醌，酯，内酯及苷

17、的分别中性：适用于醛，酮，醌，酯，内酯及苷的分别酸性：酸性化合物如酸性色素，氨基酸等酸性：酸性化合物如酸性色素，氨基酸等碱性：生物碱，醇及其它中性和碱性物质碱性：生物碱，醇及其它中性和碱性物质普通地，能用酸性或碱性普通地，能用酸性或碱性Al2O3分别的也能用中性分别的也能用中性Al2O3分别分别2Al(OH)3 Al2O3 +3H2O300400II Al2O3的活性的活性 活度级活度级I级加强级加强 吸附才干吸附才干 I 减弱减弱 在不同的温度下活化氧化铝：在不同的温度下活化氧化铝： 加热至加热至 100150 活化有活化有一定活性一定活性 150 III级级 300400 IVVI 600

18、 脱水脱水开场烧结开场烧结每一批每一批Al2O3外表积和外表孔构造不一致，外表积和外表孔构造不一致，活性不同活性不同普通，分别极性较强的组分用活性弱的吸普通，分别极性较强的组分用活性弱的吸附剂；分别弱极性的组分用活性强的吸附剂；分别弱极性的组分用活性强的吸附剂。附剂。2硅胶l弹性多聚硅酸脱水制的弹性多聚硅酸脱水制的 l硅氧烷不具吸附性硅氧烷不具吸附性l外表孔穴较小的硅酸吸附能较强外表孔穴较小的硅酸吸附能较强l用途：微酸性，吸附才干较用途：微酸性，吸附才干较Al2O3 弱，可弱，可分别酸性和中性物质，如有机酸，氨基酸，分别酸性和中性物质，如有机酸，氨基酸，萜类，甾胆固醇及激素属于甾类化合物萜类，

19、甾胆固醇及激素属于甾类化合物类类弹性多聚硅酸脱水弹性多聚硅酸脱水 OHOH SiOSi SiOH SiSi 硅氧烷硅氧烷 游离型硅酸醛游离型硅酸醛 束缚型束缚型 活泼型活泼型 硅酸醛硅酸醛 硅酸醛硅酸醛 a b c d3聚酰胺l乙内酰胺聚合：聚己内酰胺，锦纶乙内酰胺聚合：聚己内酰胺，锦纶l可与酚类，酸类，醌类，硝类化合物构可与酚类，酸类，醌类，硝类化合物构成氢键而分别。构成氢键基团的吸附才成氢键而分别。构成氢键基团的吸附才干大干大l对、间位构成氢键邻位空间位阻对、间位构成氢键邻位空间位阻l芳香族由于共轭吸附才干大芳香族由于共轭吸附才干大由海洋生物琼脂提获得到的主要成分由海洋生物琼脂提获得到的主

20、要成分 中性不带电中性不带电水溶性线状多糖水溶性线状多糖高亲水性，含大量羟基高亲水性，含大量羟基能制成多孔性凝胶，分别大分子能制成多孔性凝胶，分别大分子制备：制备： 去除带电琼胶成分去除带电琼胶成分 将溶化的琼脂糖采用悬浮将溶化的琼脂糖采用悬浮, ,乳化或喷珠的方法制乳化或喷珠的方法制 得珠状介质。得珠状介质。 采用交联剂添加介质的机械强度采用交联剂添加介质的机械强度4琼脂糖5葡聚糖 l-1,6 相连的葡萄糖聚合物，由环氧氯丙烷交联得到相连的葡萄糖聚合物，由环氧氯丙烷交联得到珠粒。珠粒。l性质：性质：l1亲水性比琼脂糖高羟基数多亲水性比琼脂糖高羟基数多l2化学稳定性及热稳定性好化学稳定性及热稳

21、定性好l3孔度与机械强度与交联度有关孔度与机械强度与交联度有关l4用于凝胶过滤分子筛用于凝胶过滤分子筛l运用：水溶液中分别蛋白质等运用：水溶液中分别蛋白质等6纤维素l-1,4 相连的相连的D-葡萄糖偶而有葡萄糖偶而有1，6 键合线性键合线性天然高聚物。天然高聚物。l1亲水亲水l2微晶与无定型两部分组成，缺乏孔度微晶与无定型两部分组成，缺乏孔度l大孔珠状纤维素大孔珠状纤维素l1高孔度高孔度l2高机械强度高机械强度l3 ) 亲水性强亲水性强 l运用：离子交换分别蛋白质介质运用：离子交换分别蛋白质介质性质：性质： 1丙烯酰胺与交联剂丙烯酰胺与交联剂N, N-甲叉双丙烯酰甲叉双丙烯酰 胺共聚。胺共聚。

22、2烷烃骨架与酰胺侧链烷烃骨架与酰胺侧链3控制交联剂比例可控制网格孔度控制交联剂比例可控制网格孔度4亲水好，但不如多糖介质亲水好，但不如多糖介质 (5) 机械强度差机械强度差运用：运用：1凝胶过滤凝胶过滤 2 电泳介质电泳介质7聚丙烯酰胺4、流动相及其选择l(1)流动相洗脱过程的本质：流动相分子与被分别的溶质分子竞流动相洗脱过程的本质：流动相分子与被分别的溶质分子竞争占据吸附剂外表活性中心的过程。强极性组分选强极性的流争占据吸附剂外表活性中心的过程。强极性组分选强极性的流动性洗脱，反之相反。动性洗脱，反之相反。 l(2)功能团极性：功能团极性：l 有机分子根本母核一样时，取代基极性加强，整个分子

23、极性有机分子根本母核一样时，取代基极性加强，整个分子极性加强；极性基团增多，整个分子极性加强。分子中双键多，吸加强；极性基团增多，整个分子极性加强。分子中双键多，吸附力强；共轭双键多，吸附力强。分子构成内氢键，吸附力弱附力强；共轭双键多，吸附力强。分子构成内氢键，吸附力弱于不能构成内氢键的化合物。于不能构成内氢键的化合物。 烷烃烷烃CH3 ，CH2 烯烃烯烃CH= CH醚类醚类OCH3，OCH2硝基化合物硝基化合物NO2二甲胺二甲胺酯类酯类COOR酮类酮类 C=O醛类醛类CHO 硫醇硫醇SH胺类胺类NH2 酰胺酰胺 醇类醇类OH酚类酚类ArOH羧酸类羧酸类COOH3常用流动相极性：常用流动相极

24、性： 石油醚环己烷二硫化碳石油醚环己烷二硫化碳CCl4三氯三氯乙烯苯甲苯二氯甲烷氯仿乙醚乙烯苯甲苯二氯甲烷氯仿乙醚乙酸乙酯乙酸甲酯丙酮正丙醇乙醇乙酸乙酯乙酸甲酯丙酮正丙醇乙醇甲醇吡啶酸甲醇吡啶酸在某些情况下可用混合流动相在某些情况下可用混合流动相聚酰胺柱层析可采用水溶液：乙醇水溶液，丙聚酰胺柱层析可采用水溶液：乙醇水溶液，丙酮水溶液等酮水溶液等溶解试样用的溶剂极性应与流动相相近溶解试样用的溶剂极性应与流动相相近 5. 洗脱方法及流出曲线洗脱方法及流出曲线 有色物质分别的洗脱方法有色物质分别的洗脱方法 推出法：有色物质分别后，将吸推出法：有色物质分别后，将吸附剂从柱中推出，用刀按层切开，分附剂从

25、柱中推出，用刀按层切开，分层洗脱再定量。层洗脱再定量。 无色物质分别的洗脱方法及流出曲无色物质分别的洗脱方法及流出曲线线 无色物质分层后，可采用流出曲线无色物质分层后，可采用流出曲线加以判别。加以判别。 流出曲线：以物质浓度为纵座标，流出曲线：以物质浓度为纵座标，以搜集的洗脱液体积为横座标，得出以搜集的洗脱液体积为横座标，得出的曲线。的曲线。 柱层析的洗脱方法柱层析的洗脱方法 洗脱普通有三种方法：洗脱普通有三种方法：恒定洗脱法：恒定洗脱法：逐次洗脱法：逐次洗脱法：梯度洗脱法：梯度洗脱法：梯度洗脱法是目前最常用的洗脱法。梯度洗脱法是目前最常用的洗脱法。Elution (ml)Protein (m

26、g/ml)NaCl (mol/L)00.20.40.60.800.20.40.60.8104080120160200240Na ClProtein恒定洗脱恒定洗脱 Volume (ml)Protein (mg/ml)NaCl (mol/L)00.10.20.30.400.20.40.60.804080120160200240NaClProtein分分 步步 洗洗 脱脱 Volume (ml)Protein（mg/ml)NaCl (mol/L)00.10.20.30.40.50.600.10.20.30.40.50.60.704080120160200240ProteinNaCl梯梯 度度 洗洗

27、 脱脱 洗脱剂的选择 样品在溶剂中具有一定溶解度。样品在溶剂中具有一定溶解度。 普通采用无水溶剂，且与水不互溶。普通采用无水溶剂，且与水不互溶。 溶剂沸点适宜。溶剂沸点适宜。 纯度要高，无杂质。纯度要高，无杂质。 二、分配柱层析二、分配柱层析l分配柱层析是根据欲分别组分在两种互不混溶分配柱层析是根据欲分别组分在两种互不混溶或部分混溶的溶剂间的溶解度差别来实现分别或部分混溶的溶剂间的溶解度差别来实现分别的。的。l这两种互不混溶的溶剂一个是流动相，另一个这两种互不混溶的溶剂一个是流动相，另一个被吸收在载体中，被称为固定相。被吸收在载体中，被称为固定相。l流动相载着试样中的各种组分沿着层析柱流动流动

28、相载着试样中的各种组分沿着层析柱流动时，试样中的各种组分就在流动相和固定相间时，试样中的各种组分就在流动相和固定相间进展分配，当不同组分的分配系数有差别时，进展分配，当不同组分的分配系数有差别时，它们在层析柱中的前进速度就不一样，于是得它们在层析柱中的前进速度就不一样，于是得以分别。以分别。 二、分配柱层析1. 原理原理 分配层析是根据混合物中各组分在两种不相混溶的溶剂分配层析是根据混合物中各组分在两种不相混溶的溶剂间溶解度即分配系数的不同，使各组分得以分别。间溶解度即分配系数的不同，使各组分得以分别。 分配系数分配系数K：当溶质在两种不相混溶的溶剂中到达平衡：当溶质在两种不相混溶的溶剂中到达

29、平衡时，溶质在两种溶剂即两相中的浓度比值为一常数，时，溶质在两种溶剂即两相中的浓度比值为一常数，称分配系数。称分配系数。 各种组分具有各自的分配系数各种组分具有各自的分配系数K，同一物质，温度不同，同一物质，温度不同时，时，K不同。不同。 在分配的各组分中，某组分在分配的各组分中，某组分K ，那么固定相中浓度，那么固定相中浓度 ， K ，后出柱。，后出柱。 CK固流固定相中溶质的浓度流动相中该溶质的浓度C 2. 固定相与流动相固定相与流动相 固定相：由载体和一种溶剂固定相：由载体和一种溶剂多为水组成。多为水组成。 流动相：普通是与水互不相流动相：普通是与水互不相溶的有机溶剂溶的有机溶剂 。 当

30、流动相是水或水溶液，固定相当流动相是水或水溶液，固定相液体是有机溶剂时，称为反相分液体是有机溶剂时，称为反相分配层析。配层析。 分配柱层析分配柱层析l常用的载体有：硅胶、纤维素、硅藻土等；常常用的载体有：硅胶、纤维素、硅藻土等；常用的固定相有：水、稀硫酸、甲醇、甲酰胺等用的固定相有：水、稀硫酸、甲醇、甲酰胺等强极性溶剂。强极性溶剂。l流动相普通是与水互不相溶的有机溶剂，如正流动相普通是与水互不相溶的有机溶剂，如正丁醇、正戊醇等。丁醇、正戊醇等。l分配柱色谱常用来分别极性极强的、亲水性的分配柱色谱常用来分别极性极强的、亲水性的物质，如脂肪酸、多元醇、水溶性氨基酸等。物质，如脂肪酸、多元醇、水溶性

31、氨基酸等。 3. 挪动速率 主要是用于比较各组分挪动速度的大小，即在同一时间内，各组分挪动间隔的大小，作为定性之用。 = = fRfRR 色带中心（浓度中心）移动速率洗脱剂上层液面移动速率色带中心（浓度中心）移动距离洗脱剂上层液面移动距离ACLL特点：微量操作技术，简便、分别效率高，特点：微量操作技术，简便、分别效率高，但分别速度慢。但分别速度慢。纸层析纸层析(Paper chromatography) 是在滤纸上进展的色谱分是在滤纸上进展的色谱分析法。析法。 一、定义一、定义 将固定相放在纸上，以纸做载体进展点样、展将固定相放在纸上，以纸做载体进展点样、展开、定性和定量的液开、定性和定量的液

32、-液分配层析法。液分配层析法。 纸层析和萃取一样，也是根据不同物质在两相纸层析和萃取一样，也是根据不同物质在两相间的分配比不同而进展分别的相当于逆流萃间的分配比不同而进展分别的相当于逆流萃取。取。在展开剂中分配系数小的，在纸条上挪动速度慢，停留在纸条的接近原点端。1.层析缸层析缸 2.滤纸滤纸 3.原点原点 4.展开剂展开剂 5.前沿前沿 6.7.斑点斑点123456731. 纸色谱的根本原理纸色谱的根本原理xyRf的计算2. 比移值比移值Rf组份分别后,它们在滤纸上的位置用比移值Rf 表示。定义:比移值比移值RfRf的大小取决于各组分在二相间的分配系的大小取决于各组分在二相间的分配系数数及滤

33、纸的性质。不同的组分具有不同的分配系数及滤纸的性质。不同的组分具有不同的分配系数, , 因此也就有不同的因此也就有不同的RfRf。这就是定性的根据。这就是定性的根据。3. 影响影响Rf的要素的要素(1)欲分别物的性质欲分别物的性质:物质在两相的分配系数物质在两相的分配系数,决议了决议了它的它的Rf大小大小;；(2)展开剂展开剂:同一组分在不同溶剂中同一组分在不同溶剂中Rf不同。通常应不同。通常应选这样的层析剂，使溶质的选这样的层析剂，使溶质的Rf在在0.05 0.85之间之间,不不同组分的同组分的Rf差值差值 0.05。(3)pH:影响它们的存在形状。影响它们的存在形状。(4)滤纸滤纸:质地均

34、一、厚薄适当、具有一定机械强度、质地均一、厚薄适当、具有一定机械强度、不含杂质不含杂质(5). 温度温度:在层析缸中用红外灯照射。温度会影响溶在层析缸中用红外灯照射。温度会影响溶质的分配系数及流动相的分散速度。层析操作应在质的分配系数及流动相的分散速度。层析操作应在恒温下进展，温度不超越恒温下进展，温度不超越 0.5oC。(6). 展开方式展开方式:展开方式不同展开方式不同,Rf也不同。下行法的也不同。下行法的Rf最大，上行法的最大，上行法的Rf较小，环行法的较小，环行法的 Rf也不大。也不大。 2层析滤纸的性能与规格层析滤纸的性能与规格型号杯重G /m2厚度(mm)吸水性( 30min内水上

35、升mm)灰分G /m2性能1900.17150 1200.08快速2900.17120 900.08中速3900.1590 600.08慢速41800,34151 1210.08快速51800.32120 910.08中速61800.3090 600.08慢速3滤纸的处置滤纸的处置 以以0.1 0.4 mol/L HCl (或或 2 mol/L HAc)浸泡浸泡数小时数小时, 除去无机杂质后除去无机杂质后, 取出用蒸馏水洗净取出用蒸馏水洗净, 再将滤纸放在丙酮再将滤纸放在丙酮-乙醇乙醇( 1 : 1 )中浸泡一周时间中浸泡一周时间, 除去有机杂质除去有机杂质, 再取出风干备用。再取出风干备用。

36、 2、固定相 纸层析以吸着在纤维素上的水作固定相。反相纸层析用甲酰胺、二甲基甲酰胺、丙二醇等作固定相。假设分别芳香油等非极性物，以石蜡油、硅油作固定相。 3、 试样试样1试样的溶解试样的溶解 尽量防止用水。普通用乙醇、丙酮、氯仿等尽量防止用水。普通用乙醇、丙酮、氯仿等，最好采用与展开剂极性类似的溶剂。液体样，最好采用与展开剂极性类似的溶剂。液体样可直接点样。可直接点样。四、操作技四、操作技术术2点样方法点样方法a、先用铅笔在距纸条一端、先用铅笔在距纸条一端2 3 cm处划一条直线起始处划一条直线起始线并在线上隔一定间隔划一线并在线上隔一定间隔划一“x号表示点样位置；见号表示点样位置；见下表示图

37、：下表示图：b 点样工具：微量注射器、毛细滴管点样工具：微量注射器、毛细滴管0.5 mm) c.点样方法：用点样工具汲取试液悄然与“x号接触，使点样的斑点直径为0.2 0.5 cm, 每次点样2 20 m于滤纸上，以冷风吹干；d. 干后，将纸的两边用线缝好，以圆筒方式置于层析缸中展开。4、 展开展开 1展开剂的选择展开剂的选择欲分别物在两相中的溶解度；欲分别物在两相中的溶解度；展开剂的极性展开剂的极性展开剂与欲分别物间应无化学反响展开剂与欲分别物间应无化学反响欲分别物在展开剂中的分配系数最好不受温度欲分别物在展开剂中的分配系数最好不受温度的影响的影响欲分别物在两相间能瞬间到达分配平衡欲分别物在

38、两相间能瞬间到达分配平衡常用的展开剂常用的展开剂水、饱和的正丁醇、正戊醇、酚、四氯化碳、水、饱和的正丁醇、正戊醇、酚、四氯化碳、氯仿、苯、丁酮、丙酮、有机酸、有机碱，氯仿、苯、丁酮、丙酮、有机酸、有机碱，有时也参与一定比例的无机酸、无机碱、甲有时也参与一定比例的无机酸、无机碱、甲醇、乙醇等。醇、乙醇等。2展层方法展层方法 展层前，层析缸与已点样滤纸必需预先经水蒸汽、展层前，层析缸与已点样滤纸必需预先经水蒸汽、溶剂蒸气饱和。溶剂蒸气饱和。 方法：将溶剂和水置于分液漏斗中充分振荡，分层方法：将溶剂和水置于分液漏斗中充分振荡，分层后，将水层放入小烧杯内，置于层析缸中平衡一段时后，将水层放入小烧杯内，

39、置于层析缸中平衡一段时间，使滤纸吸饱蒸汽，然后移去小烧杯，将溶剂倒入间，使滤纸吸饱蒸汽，然后移去小烧杯，将溶剂倒入溶剂槽中，立刻将点好样的滤纸的一端浸入溶剂槽内溶剂槽中，立刻将点好样的滤纸的一端浸入溶剂槽内展层。展层。 A .上行展开上行展开法法将点有试样的滤纸条的下端浸入溶剂但不能浸没点样处上端固定在层析缸的上部，坚持垂直，将缸密闭，使溶剂沿下端上升而展层。待溶液上升到间隔纸上端3 4 cm 时，将滤纸取出，用铅笔在溶剂前沿处画线作记号见右图。对于对于 Rf 非常接近的物质可采取延续挥发的色谱法。非常接近的物质可采取延续挥发的色谱法。纸条的上端暴露在层析缸外，纸条的上端暴露在层析缸外，以便令

40、上升的溶剂挥发；以便令上升的溶剂挥发；只需坚持纸条下端与溶剂面只需坚持纸条下端与溶剂面接触，溶剂便能不断地上升接触，溶剂便能不断地上升而挥发，展层过程就自动延而挥发，展层过程就自动延续地进展；续地进展；假设溶剂沸点假设溶剂沸点100oC100oC，那，那么可在纸条暴露部分用红外么可在纸条暴露部分用红外灯烘烤，促使溶剂挥发；灯烘烤，促使溶剂挥发； 该法不能丈量前沿，但可该法不能丈量前沿，但可达分别的目的。达分别的目的。玻片玻璃棒原点玻皿剪成锯齿状，剪成锯齿状，便于溶剂滴下便于溶剂滴下B.下行展开法下行展开法 溶剂自滤纸条的上端向下降借助于重力的作用，具有分别速度快及延续挥发色谱的优点。C. 环行

41、法环行法 又叫径向展开法。这是一种既快又方便的方法。又叫径向展开法。这是一种既快又方便的方法。取一张圆形滤纸在直径的两边各画两根平行线，用剪取一张圆形滤纸在直径的两边各画两根平行线，用剪刀沿这两根线剪至圆心处，在纸的中央滴上试液，干刀沿这两根线剪至圆心处，在纸的中央滴上试液，干后，将滤纸夹在两个大小一样培育皿之间，使剪开的后，将滤纸夹在两个大小一样培育皿之间，使剪开的纸条的尾端浸入流动相。纸条的尾端浸入流动相。D.双向展开法双向展开法有时用一种溶剂不能将样品中组份分开时，可以试用双向展开法。该法是用正方形或长方形滤纸，在纸的一角上点样，先用一种展开剂朝一个方向展开，展开终了，待溶剂挥发后，再用

42、另一种展开剂朝与原来垂直的方向进展第二次展层。假设前后二次展开剂选择适当，可使各种组份完全分别。例如，氨基酸的分别可用此法。双向展开法也可以二次运用同一种展开剂展层。5、 显色显色展层后，将滤纸从层析缸中取出，用铅笔在溶剂前沿作展层后，将滤纸从层析缸中取出，用铅笔在溶剂前沿作记号。记号。a. 有色物：直接察看各个色斑 无色物：无色物： 物理法显色：用紫外灯照，察看有无吸收物理法显色：用紫外灯照，察看有无吸收或发出各种不同颜色的荧光斑点，并用铅或发出各种不同颜色的荧光斑点，并用铅笔画下斑点的位置及大小。笔画下斑点的位置及大小。6、分析、分析A.定性分析：各组分有各自的定性分析：各组分有各自的Rf

43、。为了查明未。为了查明未知物的组成，最好是在同样条件下与知的纯物知物的组成，最好是在同样条件下与知的纯物质做对照实验。质做对照实验。化学法显色：利用各种物质的特性反响，喷洒适当的化学法显色：利用各种物质的特性反响，喷洒适当的显色剂，假设被分别的物质含有羧酸，可喷酸碱指示剂显色剂，假设被分别的物质含有羧酸，可喷酸碱指示剂溴甲酚绿，当斑点呈黄色，阐明羧酸确实存在；假设被溴甲酚绿，当斑点呈黄色，阐明羧酸确实存在；假设被分别的物质含有氨基酸，那么可喷茚三酮，多数氨基酸分别的物质含有氨基酸，那么可喷茚三酮，多数氨基酸呈紫色，个别氨基酸呈黄色。其它化合物所用显色剂可呈紫色，个别氨基酸呈黄色。其它化合物所用

44、显色剂可从手册里查阅。从手册里查阅。xyRf 的计算:Rf = x / yx1x2yRf 的计算的计算:Rf 1= x1 / yRf2 = x2 / y这样每一个斑点用两这样每一个斑点用两个个Rf 来描画。来描画。 B.定量分析定量分析 剪洗法：将斑点剪下，用适当的溶剂洗脱，剪洗法：将斑点剪下，用适当的溶剂洗脱，然后用各种仪器方法如红外、紫外、原子然后用各种仪器方法如红外、紫外、原子吸收、发射光谱测吸光度，也可将斑点剪吸收、发射光谱测吸光度，也可将斑点剪下灰化，再用适当的溶剂溶解，测之。下灰化，再用适当的溶剂溶解，测之。 比较法：经纸色谱将各种组份分开后，可在比较法：经纸色谱将各种组份分开后，

45、可在一样条件下，制得规范系列图谱，与待测斑一样条件下，制得规范系列图谱，与待测斑点颜色、面积进展比较，确定其能够的含量。点颜色、面积进展比较，确定其能够的含量。例氨基酸的分别固定相为水例氨基酸的分别固定相为水流动相流动相分离情况分离情况 正丁醇：正丁醇：2 mol/L HAc = 1 : 1酪氨酸、二碘酪氨酸酪氨酸、二碘酪氨酸用水饱和的苄醇用水饱和的苄醇亮氨酸、异亮氨酸亮氨酸、异亮氨酸叔丁醇：甲乙酮：甲酸：水叔丁醇：甲乙酮：甲酸：水16 : 16 : 0.1 : 3.9亮氨酸、异亮氨酸亮氨酸、异亮氨酸流动相分离情况丁醇：醋酸：水32 : 2 :22甲状腺素、二碘酪氨酸流动相：丁醇：HAc :H

46、2O = 4 : 1 :5流动相：M甲酚酚：pH = 9.33硼酸缓冲液 = 1 : 1亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、酪氨酸、丙氨酸、脯氨酸、谷氨酸、苏氨酸、门冬氨酸、谷氨酰酸、门冬酰氨、精氨酸、组氨酸、赖氨酸、胱氨酸等例例2. 糖的分别糖的分别(固定相为水固定相为水)流动相分离情况醋酸乙脂:吡啶:水= 2 : 1 : 1木糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖丁醇:吡啶:水= 45 : 25 : 40乳糖、半乳糖、葡萄糖丁醇:乙醇:水: NH3 = 40 : 10 : 49 : 1尿中葡萄糖丁醇:乙醇:水= 10 : 1 : 2蜜二糖、果糖、葡萄糖、流动相分离情况流动相：酚流动

47、相：丁醇:醋酸:水= 1 : 1 : 1鼠李糖、核糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖、乳糖、半乳糖醛酸丁醇:乙醇:水= 4 : 1 : 5低聚糖75% 2丙醇：醋酸9 : 1直链淀粉丁醇:吡啶:水：苯= 50 : 30 : 3 : 45棉子糖例脂肪酸的分别固定相为水例脂肪酸的分别固定相为水流动相分离情况95%乙醇：浓氨水100 : 1同系的直链脂肪酸正己醇： 1.5 mol/L 氨水1 : 1烷氧基酸流动相1:乙醇：浓氨水 : H2O = 80 : 5 : 15流动相2：乙二醇乙醚：桉树脑：88%甲酸 = 5 : 5 : 2草酸、酒石酸、柠檬酸、苹果酸、羟基醋酸、顺丁烯二酸、丙二酸、乳

48、酸、琥珀酸、乌头酸、己二酸、延胡索酸、葵二酸流动相分离情况丁醇：醋酸：水 4 : 1 : 5甲胺、乙胺、丙胺、丁胺、戊胺、苯苄胺甲醇：戊醇：苯：水4 : 2 : 2 : 2萘胺、间苯二胺、对苯二胺、苯胺丁醇：1.5 mol/L 氨水1 : 1C7以下的脂肪酸例例4. 胺类的分别固定相为水胺类的分别固定相为水例例5. 醇、酚的分别固定相为水醇、酚的分别固定相为水流动相分离情况丁醇：5%NaHCO3 1 : 1甲醇、乙醇、异丙醇、异丁醇、异戊醇、辛醇己烷饱和甲醇乙醇、异丙醇、丙醇、异丁醇、正丁醇丁醇：乙醇：水 4 : 1.1 : 1.9乙二醇、丙三醇、甘露糖醇、山梨醇、肌醇流动相分离情况丁醇：醋酸

49、：水 4 : 1 : 5苯甲酸、儿茶酚、肉桂酸、邻苯甲酸、儿茶酚、肉桂酸、邻香豆酸、没食子酸、间羟基苯香豆酸、没食子酸、间羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸、甲酸、对羟基苯甲酸、5-甲基甲基苯二酚、间苯三酚、苯二酚、间苯三酚、2,4,6三三羟基苯甲酸、羟基苯甲酸、2,4二羟基苯甲二羟基苯甲酸、酸、1,2,3苯三酚、对苯二酚、苯三酚、对苯二酚、间苯二酚、间苯二酚、羟基苯甲酸、邻羟基苯甲酸、邻羟基苯甲酸、香草酸羟基苯甲酸、香草酸例例 核酸降解物核苷酸、嘌呤、嘧啶碱基的分别核酸降解物核苷酸、嘌呤、嘧啶碱基的分别固定相为水固定相为水流动相分离情况饱和(NH4)2SO4：水：2丙醇 79 : 10 : 2鸟嘌呤、

50、腺嘌呤、胞苷正丁醇：水：乙二醇：醋酸5 : 1 : 5 : 2AMP、 ADP、 ATP正丁醇：二苷酸：0.1 mol/L HCl4 : 1 : 1黄嘌呤、鸟嘌呤正丁醇：二苷酸：水4 : 1 : 1腺嘌呤、次黄嘌呤例例. 其它类的分别固定相为水其它类的分别固定相为水流动相分离情况正丁醇：浓氨水：水4 : 1 : 5磺胺嘧啶、磺胺噻睉、Sulfamerzine、p,p-sulfonyldianiline正丁醇：醋酸：水 4 : 1 : 5对胺基苯甲酸、维生素C、N甲基菸酰胺、菸碱酰胺、菸酸、潘妥宁、泛酸、VB6、VB1VB甲苯：石油醚：乙醇：水200 : 100 : 30 : 70雌酮、雌二酮、

51、雌三酮、马烯雌酮、脱氢皮质甾酮酸、孕甾酮、顺式睾丸甾酮流动相分离情况丁醇：浓盐酸98 : 2阿托品、莨菪胺、后马托品、莨菪碱、d古苛碱、d假古苛碱、托把柯卡因、金雀花碱、高金雀花碱、吗啡、可待因、蒂巴因、海洛因、那可叮、可它宁、北美黄莲碱、马钱子碱、二甲马钱子碱、奎咛、辛可宁、辛可宁啶、毛果碱、异毛果碱、毛果心碱、菸碱、吡啶、胆碱、乙酰胆碱、波尔啶碱、槟榔碱例例8无机运用固定相为水无机运用固定相为水流动相分离情况12 mol/LHCl：甲醇：丁醇：甲基异丁酮55 : 35 : 5 : 5K+、Rb + 、Cs +乙醇：水80 : 20Li + 、Na + 、K +10% HCl的水饱和丁醇Zn

52、 2+Ga 3+In 3+ Al 3+苯酚：甲醇：HCl 5 : 3 : 2Al 3+ Ga 3+ In 3+ Tl 3+流动相分离情况丁醇：HAc：乙酸乙脂：水10 : 2 : 1 : 7从Fe、Al、Ti中分离出Ga乙酸乙脂：水：HNO385 : 10 : 5从稀土、Zr、Ti、Th中分离出Sc乙醚：浓HNO3 87.5 : 12.5HfZr4 mol/L HCl 饱和丁醇 UO2Th例例9生物学运用生物学运用FeCuCoNiNiNiNiTiMo黑毛红毛黄毛白毛 兔毛的色谱图以兔毛作实验，分别结果如右图。取不同颜色兔毛取不同颜色兔毛(300 500 mg), 干法灰化干法灰化, 溶于稀溶于

53、稀HCl 中中,用用丙酮丙酮 : 丁醇丁醇 : HCl = 10 : 4 : 2, 展开后展开后,显色显色薄层层析 薄层层析：把固定相吸附剂铺在玻璃板上铺薄层层析：把固定相吸附剂铺在玻璃板上铺成均匀的薄层，层析就在玻璃板上的薄层中成均匀的薄层，层析就在玻璃板上的薄层中进展。进展。 把试样点在层析板的一端，把层析板放入层把试样点在层析板的一端，把层析板放入层析缸中，使点有样品的一端浸入流动相展开析缸中，使点有样品的一端浸入流动相展开剂中，试样中的各种组分沿着薄层在固定相剂中，试样中的各种组分沿着薄层在固定相和流动相之间不断地发生溶解、吸附、再溶和流动相之间不断地发生溶解、吸附、再溶解再吸附的分配

54、过程，以致相互分开。解再吸附的分配过程，以致相互分开。一、薄层层析的特点一、薄层层析的特点优点 快速：只需10-60 min 分别效率高，灵敏度高 安装简、操作方便 样品负荷量大、斑点分散少缺陷Rf值的反复性差抑制方法标样和试样在同一块板上展开二、固定相吸附剂二、固定相吸附剂 决议吸附性能的要素：吸附剂的化学组成、决议吸附性能的要素：吸附剂的化学组成、活性、外表积。活性、外表积。要求：要求：适宜的吸附力适宜的吸附力与展开剂、被吸附物质均不起化学反响与展开剂、被吸附物质均不起化学反响粒度细小而且均匀范氏方程，减少涡流分散粒度细小而且均匀范氏方程，减少涡流分散项项(1). 氧化铝氧化铝 氧化铝呈微

55、弱碱性，酸性较强的化合物在氧化铝呈微弱碱性，酸性较强的化合物在氧化铝上吸附的很牢所以，酸性物质分别不氧化铝上吸附的很牢所以，酸性物质分别不好，故通常用于分别碳氢化合物、生物碱类好，故通常用于分别碳氢化合物、生物碱类和对碱性物质比较稳定的中性物质、碱性物质和对碱性物质比较稳定的中性物质、碱性物质。普通要求薄板用的活性为普通要求薄板用的活性为 级级氧化铝的活性与含水量亲密相关含一定量的水份时，吸附剂外表的吸附中心回被水分子占据。活性活性 含水量（）含水量（） 故加热驱除水故加热驱除水活化；吸附一定量的水活化；吸附一定量的水失活失活100 150oC, 除去Al2O3中与羟基结合的部分水份，使Al2

56、O3有一定的活性；150 300oC， Al2O3活性达 级；300 400oC，Al2O3活性达 级； 600oC， Al2O3进一步脱水并开场烧结。 由于脱水过程遭到许多要素的影响，因此，每批消费的Al2O3 ，其外表积和外表孔穴构造并不一致，活性也不一样。 Al2O3活性的测定：取20 L染料溶液偶氮苯30 mg、对甲氧基偶氮苯、苏丹黄、苏丹红、和对氨基偶氮苯各20 mg ，溶解于50 mL CCl4中，加到薄板上，用CCl4展层，根据下表确定活性。活性 Rf,偶氮苯 0.59 0.74 0.85 0.95Rf,对-甲氧基偶氮苯 0.16 0.49 0.69 0.89Rf,苏丹黄 0.0

57、1 0.25 0.57 0.78Rf,苏丹红 0.00 0.10 0.33 0.56Rf,偶氮苯 0.00 0.03 0.08 0.19市售的供薄层色谱用的市售的供薄层色谱用的Al2O3有有:Al2O3 H氧化铝中无粘合剂氧化铝中无粘合剂Al2O3 G氧化铝中含煅石膏普通氧化铝中含煅石膏普通5煅石膏煅石膏 煅石膏煅石膏CaSO4，作为粘合剂，作为粘合剂Al2O3 HF254氧化铝中不含煅石膏，仅含荧光指示氧化铝中不含煅石膏，仅含荧光指示剂剂 在在254 nm下呈黄绿色荧光下呈黄绿色荧光Al2O3 GF254氧化铝中既含煅石膏又含荧光指示剂氧化铝中既含煅石膏又含荧光指示剂 在在254 nm下呈黄

58、绿色荧光下呈黄绿色荧光上述商品可以直接调料涂敷上述商品可以直接调料涂敷1份料，份料，2份水调和份水调和硅胶吸附性较硅胶吸附性较Al2O3弱弱硅胶是微酸性吸附剂，且适用于酸性、中性物质的分别如有机酸、氨基酸、萜类、甾体。碱性物质那么能与硅胶作用当用中性溶剂展层，碱性物质有时停留在原点不动，或者得到拖尾的斑点，而不能很好的分别。活性 含水量（） 0 5 15 25 35注:硅胶薄层的活化温度不能高于200oC硅胶的构造为硅胶的构造为:HOSi( OSi) OSiOHOHOHOHOHOHOH n硅胶活性的测定：称取二甲黄、苏丹红、靛酚蓝各40mg溶于100 mL 苯中，将此混合液滴加于薄层上，用石油

59、醚展开10 cm，混合物应不动；如用苯展开，那么应分成三个斑点，其Rf值分别为：二甲黄0.58，苏丹红0.19，靛酚蓝0.08展层时间30 45 min，那么以为此硅胶合格。经本法测定的活性与Al2O3活性 级相当。薄层用商品硅胶有：薄层用商品硅胶有：硅胶硅胶H H不含粘结剂不含粘结剂硅胶硅胶G G含粘结剂煅石膏含粘结剂煅石膏硅胶硅胶HF254HF254含荧光物质的硅胶含荧光物质的硅胶硅胶硅胶GF254GF254含有煅石膏和荧光剂含有煅石膏和荧光剂此外，硅藻土、硅酸盐、杂多酸盐、聚酰胺、纤维素也可用作吸附剂。选择吸附剂的规律：选择吸附剂的规律：v极性物质极性物质 被被 极性外表的吸附剂吸附；极

60、性外表的吸附剂吸附；v亲水性的吸附剂适用于在非水溶液中吸附物亲水性的吸附剂适用于在非水溶液中吸附物质质v疏水性的吸附剂适用于在水溶液中吸附物质疏水性的吸附剂适用于在水溶液中吸附物质三、铺层方法三、铺层方法1干法铺层“干板或软板 适用于颗粒粗，分别效率差。氧化铝常用此法，2湿法铺层：加水或其它溶液调糊状“硬板倾倒法：根据玻璃面积及铺层厚度称取一定量吸附剂，按比例加水或其它溶液调糊状，立刻倾倒在玻璃上大致推开，悄然颠动玻璃板，使其自动 成均匀薄层，程度放置1020min 结后阴干备用或活化后备用刮层法1制板制板A、玻璃板、玻璃板 a .平整、去油、去污可用浓平整、去油、去污可用浓H2SO4-K2C