煤制乙二醇翻译

1、 乙二醇的应用，冷水和乙二醇对嗜冷菌中蛋白质的冲击与驯化Michael S. Colucci , William E. Inniss加拿大，安大略省，滑铁卢市，滑铁卢大学生物系， N2L 3G1。摘要嗜冷荧光假单胞菌分离，其利用乙二醇作为唯一碳源，在25和5下，在20和55天中分别有98和96去除效率。使用二维SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳)和计算扫描激光光密度的微生物对环境变化的响应的影响。在25至5的冷水冲击下，微生物引起的冷十休克蛋白。在5的条件下是不断增长的，合成了五冷驯化蛋白。乙二醇冲击下产生了14乙二醇休克蛋白。被发现有10乙二醇驯化的蛋白质。休克蛋白和驯化蛋白

2、在冷休克与驯化和乙二醇休克与驯化之间的相似性可能暗示这些蛋白质在一个新的环境意义都震荡回升以及不断成长。 嗜冷微生物能够生长在相对宽的温度范围从0或更低，以大于20，并且通常为30。这一特性表明耐冷是在不同环境温度下生物体吸收性应用相当大的价值，如乙二醇，其中，例如，是相当大的环境关注用于飞机除冰时的生物修复。此外，耐冷已经表现出与生产冷休克蛋白（CSPS冷休克蛋白）15，21响应冷休克条件的能力。他们还生产冷驯化蛋白（CAPS），在其低温条件下这可能有助于稳定增长。 各种已进行了该报告的在高或低溶氧或者高盐度条件下的乙二醇的生物降解的研究5，6，9，10，18。然而，乙二醇生物降解在低温下由

3、于单一品种很少受到关注。 在本研究中，乙二醇通过一个适冷假单胞菌利用荧光在5和25下进行测定。为了检测微生物在变化的环境条件的生理反应，从25至5的冷休克的效果还有乙二醇休克在二维聚丙烯酰胺凝胶电泳下进行了调查。该生产驯化蛋白在5或者1的乙二醇的条件下不断增长也进行了检查。材料和方法增长与利用 该微生物在5的乙二醇溶液培养的环境中最初分离。微生物生长在一个基础盐培养基（1 LH2 O4.3克K 2 HPO43.4克KH2 PO4，2G（NH4）2 SO4，340mgMgCl2·6H2 O，1mgMnCl2·4H2 O，0.6毫克的FeSO4·7H2 O，26毫克氯

4、化钙2·2H2 O，2毫克NaMoO4 ·2H 2 O，将pH调至7.0），补充有1的乙烯乙二醇（1EG-BSM）。生长测定分光光度法在650 纳米。所有生长研究在含有50毫升培养基的250毫升锥形瓶中以适当的温育温度在以150转/分的水浴摇床上进行培养。乙二醇的微生物利用分光光度法测量。7冲击和驯化蛋白放射性标记放射性标记，150微居里/毫升的L - 35 S蛋氨酸加入到每个200微升样品，混合，并温育在适当的温度下进行1小时。然后将样品微量离心2分钟，收集上清液。冷休克和乙二醇冲击，细胞生长在25和1葡萄糖的BSM中。冷休克是由转印单元25毫升至预冷的5烧瓶发起，然后在

5、第1,4和10小时除去样品的放射性标记。对于乙二醇休克加入40ml细胞进行以10,000g离心10分钟。将沉淀物洗涤两次，然后在1的EG-BSM（乙二醇溶液）重悬。样品在1,10和21小时在1,10和21小时放射性标记。所选择的时间是根据揭示了其中的蛋白质的最大数目被诱导的时间的时间进程研究。以确保其在乙二醇休克发生的诱导不是由于该过程的物理方面诱导的，类似的实验也，但进行了不同的是由葡萄糖代替了乙二醇。 冷驯化和乙二醇驯化。冷驯化和乙二醇驯化。对于冷驯化，1葡萄糖BSM增长建立在5条件下。在对数中期的两个放射性标记的样本除去之前细胞至少通过12代的保持（OD65050.7）。对于乙二醇驯化，

6、类似的过程，只是将细胞在25和1的EG-BSM条件下生长。细胞裂解和电泳条件 在细胞裂解过程和电泳条件基本上所概述Roberts和Inniss21。唯一的修改程序是在加入每凝胶200000的cpm。所有的SDS-PAGE实验中，至少一式四份进行，并诱导被记为与各自对照相比的相对增加。 相对增加 冷休克蛋白图1。从25到5的冷休克之后的冷休克蛋白的相对合成。在1小时中，4小时中，和10小时后，诱导的的的相对水平通过计算扫描激光光密度测定。 结果与讨论 该嗜冷荧光假单胞菌分离和研究，发现在5下利用乙二醇作为唯一碳源，在55天内正使用的乙二醇的96以上。在25°C，在20天之内获得了超过9

7、8的利用率。在25时显示出生长时间为11小时，与黄杆菌4的3.4 小时和同一个物种的假单胞菌10的16小时的生长时间相比较。 在自然环境中嗜冷微生物可能会遇到的降档中的温度，并且因此冷休克的影响进行了研究。冷休克1小时后，10组 CSPS被诱导（24，26，28，30，46，71，74，77A，77B，和82 kDa的）。冷休克的4小时后，9组CSPS被诱导，相同的一组CSP1小时后被发现诱导。一种蛋白质（77A kDa）的水平降低至对照值。 10小时后，仅6组的CSPS保持(被诱导)（24，30，46，74，77B，和82 kDa的）。感应的相对水平通过计算平扫描激光光密度定量(图1)。 所

8、有的CSPS在温度降档后的滞后期过程中被诱导生长。在4小时后，这些蛋白质发生的最大数目诱导，在继续按指数增长之前。类似的趋势被琼斯等人在大肠杆菌（研究）中被观察到14。在3小时后发生该最大蛋白诱导，随后蛋白质合成和生长的恢复在4小时以后。这些观察结果可能还提供一个定量的响应，让某些酶的浓度增加时，在较低温度下可以补偿酶降低的活性。它是在温度所建立的最佳已知的耐冷合成蛋白质的最大量8，12，17。 下面的滞后期，指数恢复增长，具有适用于冷休克温度降低新增长速度。生长的恢复类似于被Broeze等人报道的一种嗜冷荧光假单胞菌的响应2。在本研究中的微生物续5小时的滞后时间后的指数增长，鉴于Broeze

9、等人报道的微生物。在4小时后重新建立指数增长。在指数增长阶段，出现了CSPS的数目的减少，这可能反映成功适应新的温度。它已经观察到嗜冷微生物能够蛋白质周转的快速速率，这可以解释为许多的CSPS20的瞬时行为。其余的功能蛋白质是不确定的，但假定它们是在较低温度下相关的持续增长。 所述微生物的在5下恒定生长产生5组caps（39，71，74，77B，和82 kDa的;图2），其中4组也被指定为 CSPS（71，74，77B和82 kDa的）。这三种蛋白质（74，77B，82 kDa的）仍然存在于冷休克后的10小时中。在获得持续病毒学生长在低温条件下冷驯化蛋白的出现。不像植物11，13，16，19和

10、动物3，caps中的微生物的功能是未知的。然而，在此期间，在0时，嗜冷菌弧菌不断增长。与在13下的增长相比较，ANT-300已被证明能增加28蛋白的合成1。此外，嗜冷杆菌在0°，5°和10下分别不断增长，期间生产了11，10，和4个caps（冷适应蛋白），22。怀特和Inniss22也指出，一些 csps（冷休克蛋白）也同时被指定为caps（冷适应蛋白）。 邻近区域的环境下使用乙二醇，例如作为一个除冰剂，可能会暴露在浓度尖峰;因而，乙二醇冲击对嗜冷菌的影响进行了研究。乙二醇休克1小时后，12乙二醇休克蛋白（egsps）诱导（36，37A，37B，39，45，47，53A，5

11、3B，62，71，81，和90 kDa的）。 10小时后，12 egsps（乙二醇休克蛋白，下同）仍然引起。然而，81-和90-kDa的egsps的合成下降。10小时后，12 egsps 仍然被诱导。然而，81-和90-kDa的egsps的合成下降至与对照水平，而其他两个蛋白质被生产（42和44 kDa的）。经过21小时，所有的10小时后观察到的egsps的存在除了45 kDa的egsps。感应的相对增加进行定量计算扫描激光光密度（图3）。至于发现的CSP生产，多数egsps期间跟随冲击的滞后期进行生产。 相对增加 冷适应蛋白图2.冷驯化蛋白相对合成在5时持续增长。诱导的相对水平通过计算扫描激

12、光光密度测定。 相对增加 乙二醇休克蛋白图3。在碳源从葡萄糖转移到乙二醇后乙二醇休克蛋白的相对合成。在1小时中，10小时中，和21小时后，诱导的相对水平通过计算激光扫描密度测定。 相对增加 乙二醇适应（驯化）蛋白图4。在1EG-BSM中乙二醇驯化蛋白质相对合成不断增长。诱导的相对水平通过计算扫描激光光密度测定。 目前，尽管对于这些蛋白质合成增加的原因是未知的，这是可能由于其中的一些蛋白质负责乙二醇，生物降解的酶，如乙二醇氧化酶。egsps的诱导也可以是响应于应力乙二醇赋予经微生物。一旦适应实现时，负责该蛋白蜂窝修改降低，从而解释他们的瞬态行为。 有人认为，用于交换的碳源的程序可能是潜在的压力。然而，洗涤的细胞成1葡萄糖的BSM代替1的EG-BSM再悬浮没有导致任何蛋白质的诱导。因此，该程序是通过实验证明不会向蛋白质诱导期间乙二醇休克指出。 期间乙二醇休克中观察到的蛋白质，第8组还存在以下乙二醇驯化，其中共有10组蛋白质被生产。这些蛋白质分子有36，37A，37B，39，47，53A，53B，和71 kDa的。这两个这就出现了分子量为42和57 kDa的外加蛋白质。这些蛋白质的相对诱导进行定量计算扫描激光光密度（图4）。由