《生化鉴定原理》PPT课件

1、致病菌检测生化鉴定原理及运用致病菌检测生化鉴定原理及运用 三糖铁琼脂实验三糖铁琼脂实验 靛基质实验靛基质实验 ONPG实验实验 甲基红甲基红MR实验实验 VP实验实验 尿素酶实验尿素酶实验 赖氨酸脱羟酶实验赖氨酸脱羟酶实验 淀粉水解酶实验淀粉水解酶实验 胆汁七叶苷水解实验胆汁七叶苷水解实验 糖醇、苷类发酵糖醇、苷类发酵实验实验 甘油复红实验甘油复红实验 葡萄糖酸氧化实验葡萄糖酸氧化实验 氧化发酵实验氧化发酵实验 枸橼酸盐利用实验枸橼酸盐利用实验 呼吸酶类实验呼吸酶类实验 硝酸盐复原实验硝酸盐复原实验；三糖铁琼脂实验三糖铁琼脂实验 本培育基适宜于肠杆菌科的鉴定。用于察看细菌对糖的利用和硫化氢变黑

2、的产生。 该培育基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为10:10:1，只能利用葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培育基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧形状下，酸类不被氧化，所以仍坚持黄色。而发酵乳糖的细菌(e.coli)，那么产生大量的酸，使整个培育基呈现黄色。如培育基接种后产生黑色沉淀，是由于某些细菌能分解含硫氨基酸，生成硫化氢，硫化氢和培育基中的铁盐反响，生成黑色的硫化亚铁沉淀。；三糖铁琼脂实验三糖铁琼脂实验 志贺氏菌都能分解葡萄糖，产酸不产气，大多不发酵乳糖，不产生H2S。大肠杆菌，能分解葡萄糖产酸

3、产气，大多数能分解乳糖，不产生H2S。沙门氏菌，能分解葡萄糖，不发酵乳糖，大多数产生H2S，多数产气。；靛基质实验靛基质实验 某些细菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨水中的色氨酸生成吲哚靛基质，当参与吲哚试剂对位二甲氨基苯甲醛后那么构成红色的玫瑰吲哚。 ；半乳糖苷酶实验半乳糖苷酶实验ONPG实验实验 原理：乳糖发酵过程中需求乳糖通透酶和半乳糖苷酶才干快速分解。有些细菌只需半乳糖苷酶，因此只能缓慢发酵乳糖，一切乳糖快速发酵和缓慢发酵的细菌均可快速水解邻硝基酚-D-半乳糖苷O-nitrophenyl-D-galactopyranoside,ONPG而生成黄色的邻硝基酚。用于枸橼酸菌属、亚利桑那菌属与沙门

4、菌属的鉴别。 运用：可用于缓慢发酵乳糖细菌的快速鉴定，本法对于迅速及缓慢分解乳糖的细菌均可短时间内呈现阳性。埃希菌属、枸橼酸杆菌属、克雷伯菌属、哈夫尼亚菌属、沙雷菌属和肠杆菌属等均为实验阳性，而沙门菌属、变形杆菌属和普罗威登斯菌属等为阴性。；甲基红甲基红MR实验实验 原理：某些细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸进一步被分解为甲酸、乙酸和琥珀酸等，使培育基pH下降至4.5以下时，参与甲基红指示剂呈红色。如细菌分解葡萄糖产酸量少，或产生的酸进一步转化为其它物质如醇、醛、酮、气体和水，培育基pH在 5.4以上，参与甲基红指示剂呈桔黄色。 运用：常用于肠杆菌科内某些种属的鉴别，如大肠埃希

5、菌和产气肠杆菌，前者为阳性，后者为阴性。肠杆菌属和哈夫尼亚菌属为阴性，而沙门菌属、志贺菌属、枸橼酸杆菌属和变形杆菌属等为阳性。；VP实验实验 原理：测定细菌产生乙酰甲基甲醇的才干。某些细菌如产气肠杆菌，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸进一步脱羧构成乙酰甲基甲醇。在碱性条件下，乙酰甲基甲醇被氧化成二乙酰，进而与培育基中的精氨酸等含胍基的物质结合构成红色化合物。即V-P实验阳性。 运用：主要用于大肠埃希菌和产气肠杆菌的鉴别。本实验常与MR实验一同运用，普通情况下，前者为阳性的细菌，后者常为阴性，反之亦然。但肠杆菌科细菌不一定都这样规律，如蜂房哈夫尼亚菌和奇特变形杆菌的VP实验和MR实验常同为阳性。；尿

6、素酶实验 原理：某些细菌具有尿素酶，在含有尿素的培育基中，分解尿素产生氨，使培育基呈碱性，此时培育基中的酚红指示剂显红色。；赖氨酸脱羟实验 赖氨酸脱酸主要用于肠杆菌科细菌的鉴定，也可用于某些非发酵菌。实验关培育基中含有赖氨酸和葡萄糖，酸碱指示剂为溴甲酚紫中性和碱性时紫色，酸性黄色，未用时为紫色。假设待测细菌将赖氨酸脱羧，那么产生胺，为碱性，溴甲酚紫坚持紫色，假设不脱羧，肠杆菌科的细菌都能分解葡萄糖，产酸，溴甲酚紫变为黄色。氨基酸脱羧的对看管其实就是一个葡萄糖发酵管，不含氨基酸。由于实验结果阳性的为坚持紫色不变，阴性结果为黄色，为保证结果的可靠性，须同时接种对看管，如对看管变为黄色，阐明细菌接种

7、胜利，证明实验管紫色不变色却为阳性，而非未接种好细菌。此外，由于氨基酸脱羧的产物为尸胺、腐胺等，遇氧不稳定，故各管接种完细菌后，需参与几滴液体石蜡隔绝空气，坚持胺的稳定性。；淀粉水解实验淀粉水解实验 原理：产生淀粉酶的细菌能将淀粉水解为糖类，在培育基上滴加碘液时，可在菌落周围出现透明区。 运用：用于白喉棒状杆菌生物型的分型，重型淀粉水解实验阳性，轻、中型阴性；芽胞杆菌属菌种和厌氧菌某些种的鉴定。；胆汁七叶苷水解实验胆汁七叶苷水解实验 原理：在10%40胆汁存在下，测定细菌水解七叶苷的才干。七叶苷被细菌分解生成的七叶素，七叶素与培育基中的枸橼酸铁的二价铁离子发生反响构成黑色化合物。 运用：主要用

8、于鉴别D群链球菌与其它链球菌的区别，以及肠杆菌科的某些种、某些厌氧菌如脆弱拟杆菌等的初步鉴别。D群链球菌本实验为阳性。；糖醇、苷类发酵实验糖醇、苷类发酵实验 原理：不同种类细菌含有发酵不同糖醇、苷类的酶，因此对各种糖醇、苷类的代谢才干也有所不同，即使能分解某种糖醇、苷类，其代谢产物可因菌种而异。检查细菌对培育基中所含糖醇、苷降解后产酸或产酸产气的才干，可用以鉴定细菌种类。 运用：糖醇、苷类发酵实验，是鉴定细菌的生化反响实验中最主要的实验，不同细菌可发酵不同的糖醇、苷类，如沙门菌可发酵葡萄糖，但不能发酵乳糖，大肠埃希菌那么可发酵葡萄糖和乳糖。即使是两种细菌均可发酵同一种糖类，其发酵结果也不尽一样

9、，如志贺菌和大肠埃希菌均可发酵葡萄糖，但前者仅产酸，而后者那么产酸、产气，故可利用此实验鉴别细菌。；甘油复红实验甘油复红实验 原理：甘油可被细菌分解生成丙酮酸，丙酮酸脱去羧基为乙醛，乙醛与无色的复红生成醌式化合物，呈深紫红色。 运用：主要用于沙门菌属内各菌种间的鉴别。伤寒沙门菌、甲丙型副伤寒沙门菌、猪霍乱沙门菌、孔道夫沙门菌和仙台沙门菌本实验为阴性，乙型副伤寒沙门菌结果不定，其它不常见沙门菌多数为阳性。；葡萄糖酸氧化实验葡萄糖酸氧化实验 原理：某些细菌可氧化葡萄糖酸钾，生成-酮基葡萄糖酸。-酮基葡萄糖酸是一种复原性物质，可与班氏试剂起反响，出现棕色或砖红色的氧化亚铜沉淀。 运用：主要用于假单胞

10、菌的鉴定和肠杆菌科菌分群。；氧化发酵实验氧化发酵实验 原理：细菌在分解葡萄糖的过程中，必需有分子氧参与的，称为氧化型；能进展无氧降解的为发酵型；不分解葡萄糖的细菌为产碱型。发酵型细菌无论在有氧或无氧环境中都能分解葡萄糖，而氧化型细菌在无氧环境中那么不能分解葡萄糖。本实验又称氧化发酵O/F或HughLeifson，HL实验，可用于区别细菌的代谢类型。 运用：主要用于肠杆菌科与其它非发酵菌的鉴别。肠杆菌科、弧菌科细菌为发酵型，非发酵菌为氧化型或产碱型。也可用于鉴别葡萄球菌发酵型与微球菌氧化型。；枸橼酸盐利用实验枸橼酸盐利用实验 原理：枸橼酸盐培育基系一综合性培育基，其中枸橼酸钠为碳的独一来源，磷酸

11、二氢铵是氮的独一来源。有的细菌能利用枸橼酸钠为碳源，能在培育基上生长，并且能分解枸橼酸盐，最后产生碳酸盐，使培育基变为碱性。培育基中的溴麝香草酚蓝指示剂由绿色变为深蓝色。不能利用枸橼酸盐为碳源的细菌在该培育基上不生长，培育基不变色。；呼吸酶类实验呼吸酶类实验 氧化酶实验原理：某些细菌具有氧化酶，能将二甲基对苯二胺或四甲基对苯二胺试剂氧化先使细胞色素C氧化，电子传送体成红色醌类化合物。 该实验用于分辨革兰氏阴性杆菌中的肠杆菌科阴性与弧菌科阳性。 触酶活力实验原理：具有触酶的细菌能催化过氧化酶，放出生态氧，继而构成氧分子，出现气泡。方法：取3%过氧化氢0.5ml，滴加到不含血液的被检细菌琼脂培育物上，或滴加到不含血液的肉汤培育物中，察看结果。结果：培育物出现气泡者为阳性。；硝酸盐复原实验硝