微生物的实验室培养 ]

1、硝酸盐硝酸盐亚硝酸盐亚硝酸盐还原还原氧化氧化细菌等微生细菌等微生物物维生素维生素C、E和酚类物质和酚类物质亚硝胺亚硝胺特特定定条条件件发酵初期，泡菜中的微生物生长很快，微生物将蔬菜中的硝酸盐还发酵初期，泡菜中的微生物生长很快，微生物将蔬菜中的硝酸盐还原成亚硝酸盐，与此同时，蔬菜中的酚类物质和维生素原成亚硝酸盐，与此同时，蔬菜中的酚类物质和维生素C等物质也等物质也会将亚硝酸盐氧化，但总体来说，生成的亚硝酸盐大于被还原的亚会将亚硝酸盐氧化，但总体来说，生成的亚硝酸盐大于被还原的亚硝酸盐，因此，随着发酵时间的进行，硝酸盐，因此，随着发酵时间的进行，亚硝酸盐的含量会逐步上升亚硝酸盐的含量会逐步上升。随

2、着微生物代谢活动的持续，氧气被消耗殆尽，泡菜坛中的环境不随着微生物代谢活动的持续，氧气被消耗殆尽，泡菜坛中的环境不利于除乳酸菌以外的其他微生物的生长。与此同时，蔬菜中的亚硝利于除乳酸菌以外的其他微生物的生长。与此同时，蔬菜中的亚硝酸盐含量由于被氧化而减少，因此，酸盐含量由于被氧化而减少，因此，亚硝酸盐的含量会逐渐下降并亚硝酸盐的含量会逐渐下降并趋于一个相对稳定的数值。趋于一个相对稳定的数值。 . 测定亚硝酸盐含量时，要配制标准显色液，即吸取测定亚硝酸盐含量时，要配制标准显色液，即吸取0.20 mL、0.40 mL、0.60 mL、0.80 mL、1.00 mL和和1.50 mL亚硝酸钠亚硝酸钠

3、溶液，分别置于溶液，分别置于50 mL比色管中，再另取比色管中，再另取1支空比色管。向各管支空比色管。向各管中分别加入中分别加入2.0 mL对氨基苯磺酸溶液，混匀，静置对氨基苯磺酸溶液，混匀，静置35 min后，后，各加入各加入1.0 mL的的N1萘基乙二胺盐酸盐溶液，最后加蒸馏水萘基乙二胺盐酸盐溶液，最后加蒸馏水补足补足50 mL。. 用样品处理液代替亚硝酸钠溶液做一个用样品处理液代替亚硝酸钠溶液做一个50 mL的样品显色管，的样品显色管，15 min后与标准管对比。后与标准管对比。 （1）本实验所用测定亚硝酸盐含量的方法为）本实验所用测定亚硝酸盐含量的方法为 。 （2）中空比色管起中空比色

4、管起 作用。作用。 （3）关于亚硝酸盐含量测定原理的正确描述是（）关于亚硝酸盐含量测定原理的正确描述是（ ）A. 重氮化重氮化酸化酸化显色显色比色比色 B. 重氮化重氮化酸化酸化比色比色显色显色C. 酸化酸化重氮化重氮化显色显色比色比色 D. 酸化酸化重氮化重氮化比色比色显色显色请分析完成下列问题：请分析完成下列问题：比色法比色法对照对照C泡菜的制作过程中，许多乳酸菌产生大量乳酸，共同抑泡菜的制作过程中，许多乳酸菌产生大量乳酸，共同抑制其它菌的生长，乳酸积累过多，又会抑制乳酸菌自身制其它菌的生长，乳酸积累过多，又会抑制乳酸菌自身的生长，以上体现出的生物关系依次是的生长，以上体现出的生物关系依次

5、是A种内互助、种内斗争、种间斗争种内互助、种内斗争、种间斗争 B种内互助、种间斗争、种内斗争种内互助、种间斗争、种内斗争 C种内斗争、种间斗争、种内互助种内斗争、种间斗争、种内互助 D种间斗争、种内斗争、种内互助种间斗争、种内斗争、种内互助答案答案B酵母菌，酵母菌，真菌，兼真菌，兼性厌氧性厌氧醋酸菌，醋酸菌，细菌，好细菌，好氧菌氧菌毛霉，真毛霉，真菌，好氧菌，好氧乳酸菌，细乳酸菌，细菌，厌氧菌菌，厌氧菌酵母菌的酵母菌的无氧呼吸无氧呼吸产生酒精产生酒精2020，无，无氧氧重铬酸钾重铬酸钾与其反应与其反应呈灰绿色呈灰绿色醋酸菌的醋酸菌的有氧呼吸有氧呼吸产生醋酸产生醋酸30353035，通，通入氧气

6、入氧气品尝、品尝、pHpH试纸试纸检测检测毛霉产生毛霉产生蛋白酶和蛋白酶和脂肪酶脂肪酶15151818接接种，酒精含种，酒精含量控制在量控制在1212左右左右乳酸菌无乳酸菌无氧呼吸产氧呼吸产生乳酸生乳酸常温，无常温，无氧条件氧条件pHpH检测，亚检测，亚硝酸盐的检硝酸盐的检测方法测方法专题专题2 :2 :微生物的培养与应用微生物的培养与应用培养基培养基 1. 定义定义 是由人工方法配制而成的，专供微生物生长是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。繁殖使用的混合营养液。 固体培养基固体培养基按物理状态分：按物理状态分： 液体培养基液体培养基 半固体培养基半固体培养基。按功能分

7、：按功能分：选择培养基选择培养基和和鉴别培养基鉴别培养基。按成分分：按成分分：天然培养基天然培养基和和合成培养基合成培养基。 2. 2. 类型类型用于微生物的分离、计数固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基表面生长表面生长均匀混浊生长均匀混浊生长沉淀生长沉淀生长半半固固体体培培养养基基碳源氮源生长因子无机盐水3.培养基的营养构成培养基的营养构成 另外另外、还需要满足微生物生长对还需要满足微生物生长对pH、氧气、氧气、二氧化碳、渗透压等的要求二氧化碳、渗透压等的要求4.培养基配制原则培养基配制原则：（1）目的要明确目的要明确：根据微生物的种类、培养目：根据微生物的种类、培养目的等确定配制培养基

8、的种类，因为不同的微生的等确定配制培养基的种类，因为不同的微生物对培养物质的需求不同。物对培养物质的需求不同。（2）营养要协调营养要协调：注意各种营养物质的浓度和：注意各种营养物质的浓度和比例。比例。（3）pH要适宜要适宜：各种微生物适宜生长的：各种微生物适宜生长的pH范围范围不同。不同。 细菌细菌pH为：为：6.5-7.5； 放线菌放线菌pH为：为：7.5-8.5； 真菌真菌pH为：为：5.0-6.0。消毒和灭菌的区别消毒和灭菌的区别条件条件结果结果常用的方法常用的方法消消毒毒较为温和的较为温和的物理或化学物理或化学方法方法仅杀死物体表面仅杀死物体表面或内部一部分对或内部一部分对人体有害的微

9、生人体有害的微生物物(不包括芽孢不包括芽孢和孢子和孢子)煮沸消毒法、巴氏消煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药物消毒毒法、化学药物消毒法法灭灭菌菌强烈的理化强烈的理化因素因素杀死物体内外所杀死物体内外所有的微生物，包有的微生物，包括芽孢和孢子括芽孢和孢子灼烧灭菌、干热灭菌灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌、高压蒸汽灭菌 有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做形的休眠体，叫做芽孢芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽

10、孢，煮沸芽孢，煮沸3 3小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌孢又可以萌发，形成一个细菌. .(1.(1.器具的灭菌器具的灭菌 配制配制(2.(2.培养基培养基 灭菌灭菌 倒平板倒平板(3.(3.微生物接种微生物接种(4.(4.恒温箱中培养恒温箱中培养(5.(5.菌种的保存菌种的保存视频 1. 1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到50 50 左右时，左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的才能用来倒平板。你用什么办

11、法来估计培养基的温度？温度？ 答：答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。以进行倒平板了。2.2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。污染培养基。3.3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个

12、平板还能用来培养微生物吗？为什么？还能用来培养微生物吗？为什么？ 答：答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。培养微生物。原理：原理：在培养基上将细菌稀释或分

13、散成单个细胞，使其长成单个在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落菌落。方法：方法：平板划线法、稀释涂布平板法。平板划线法、稀释涂布平板法。纯化大肠杆菌纯化大肠杆菌 平板划线法平板划线法：线条末端细菌的数目比线条起始处要少，能使细菌的线条末端细菌的数目比线条起始处要少，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终得到由单个细菌繁殖而数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落来的菌落。菌落特征因种而异菌落特征因种而异菌落单个或少数细菌在固体培养基上大单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时

14、，就会形成一个肉眼可见的，具有一定量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落形态结构的子细胞群体，叫做菌落。菌落是鉴定菌种的重要依据。菌落是鉴定菌种的重要依据。1.1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？为什么？ 答：答：操作的第一步灼烧接种环操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；环上可能存在的微生物污染培养物； 每次划线前灼烧接种环每次划线前灼烧接种环是为了杀死接种

15、环上是为了杀死接种环上残留的菌种；使下一次划线时，接种环上的菌种直残留的菌种；使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。菌落。 划线结束后灼烧接种环划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 2.2.在灼烧接种环之后，为什么要等其在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？冷却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌

16、种。答：以免接种环温度太高，杀死菌种。 3.3.在作第二次以及其后的划线操作时，在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 答：划线后，线条末端细菌的数目比线答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。的菌落。稀释涂布平板法稀释涂布平板法课题成果评价课题成果评价 （一）培养基的制作是否合格（一）培养基的制作是

17、否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中保温如果未接种的培养基在恒温箱中保温1 12 d2 d后无后无菌落生长（菌落生长（？），说明培养基的制备是成功的，否则需），说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。要重新制备。 （二）接种操作是否符合无菌要求（二）接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原

18、因，接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。再次练习。 （三）是否进行了及时细致的观察与记录（三）是否进行了及时细致的观察与记录 培养培养12 h12 h与与24 h24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。良好的科学态度与习惯。 1 1、临时保藏：、临时保藏：接种到固体斜面培接种到固体斜面培养基，菌落长成后养基，菌落长成后置于置于44冰箱保存。冰箱保存。 2 2、长期保存：、长期保存：甘油冷冻管藏法甘油冷冻管藏法1.1.下面对发酵工程中灭菌的理解下面对发酵工程中灭菌的理解的（的（ ）A.A.防止杂菌污染防止杂菌污染 B.B.消灭杂菌消灭杂菌C.C.培养基和发酵设备都必须灭菌培养基和发酵设备都必须灭菌 D.D.灭菌必须在接种前灭菌必须在接种前B 2.产生标准菌落的细菌的最初数目和培养基分别是产生标准菌落的细菌的最初数目和培养基分别是 () A一个细菌，液体培养基一个细菌，液体培养基 B许多细菌，液体培养基许多细菌，液体培养基 C一个细