3微生物计数培养基适用性检查验证方案

1、gmp文件湖北*药业有限公司题目微生物计数培养基 适用性试验验证方案文件编号sop-yz-6303制订人制定日期年刀日版本号b审核人审核口期年 月 日页码16/9批准人批准口期年 月口修改状态0颁发部门质量部生效日期年 月曰分发份数分发部门质量部1 概述:培养基是微生物试验的基础，直接影响微生物试验结果。适宜的培养基制备方法、贮藏条件和质量控制是提供优质培养基的保证。供试品微牛物限度检查中所使用的培养基应进行适用性检查。2验证目的：木次验证的目的是确认需氧菌总数、霉菌及酵母菌总数检查用的胰酪大豆淼琼脂培养基、胰酪大豆豚液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基的质量，以及其制备程序、保存条件等是否满足微

2、牛物限度检查用要求。3验证依据：中国药典2015年版四部“非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法”、“9203约品微牛物实验室质量管理指导原则”。4验证项目：胰酪大豆腺琼脂培养基、胰酪大豆脓液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基的适用性检查。5适用范围：成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。小组人员职务姓名签字所在部门职务组长质量部质量总监组员质量控制实验室qc主任组员质最控制实验室微牛物qc6验证周期：除另冇规定外，在实验室中，若采用已验证的配制和灭菌程序制备 培养基且过程受控，那么同一批脱水培养基的适用性检查试验可以只进行一次。如果 培养基的制备过程未经验证，那么

3、每一灭菌批培养基均要进行适用性检查试验。7. 验证小组人员及职责:7. 1验证小组人员：本文件为受控文件，仅限湖北材*药业有限公司由部使用。未经授权，不得使用、泄露或拷贝!7. 2验证人员职责及要求7. 2. 1按验证方案及相关文件实施验证。7. 2. 2认真观察并做好验证原始记录。7. 2. 3对实施验证的结果负责。7. 3验证屮各部门的职责7. 3. 1验证领导组职责7. 3. 1. 1制订验证总计划，负责全公司验证工作的管理。7. 3. 1.2确定验证项口及验证项口负责人。7. 3. 1. 3负责验证方案的批准工作。7. 3. 1. 4负责验证资料及结果的审核工作。7. 3. 1. 5负

4、责验证报告的批准工作。7. 3. 2验证项0小组职责7. 3. 2. 1负责验证方案的起草工作。7. 3. 2. 2参与验证方案的讨论、确认工作。7. 3.2.3负责验证方案的实施。7. 3. 2. 4负责验证结果的分析、统计、报告工作。7. 3. 2. 5参与验证结果的评价工作。7. 3. 3质量部职责7. 3. 3. 1负责公司验证口常管理工作。7. 3. 3. 2负责验证方案的审核工作。7. 3. 3. 3负责验证过程中仪器、仪表、计量器具的校验工作。7. 3. 3. 4负责检验仪器及检验方法的验证。7. 3. 3. 5负责验证屮各项检测工作，提供验证的检验记录、检验报告，对验证过 程中

5、的各项检验工作负责。7. 3. 3.6负责对验证人员的培训、考核工作。7. 3. 3. 7负责验证资料和报告的审核工作。7. 3. 3.8负责验证文件回收、归档管理工作。8. 合格标准：8.1被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0. 5-2范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致；8. 2被检液体培养基管与对照培养基管比较，试验菌应生长良好。9. 验证实施条件9.1验证方案培训：在验证实施前，应对参与验证的人员进行验证方案以及与验 证相关的文件进行培训，确保相关人员掌握了验证的相关要求与知识。9. 2微生物限度检测室：检验所使用的检测室应经过hvac系统确认

6、，并符合要 求。9. 3检验用水：验证过程使用的纯化水其制备系统应经过确认并符合耍求，纯化 水质量应经过检验并符合中国药典2015年版二部的要求。9. 4检验仪器设备：验证涉及的检验仪器（设备）与检验方法，应经过技术监督 局校验合格或者公司确认/验证合格。9. 5验证菌种：验证所使用的菌种，其种类与传代次数应符合中国药典的相 关要求。菌种情况见附件2:菌种确认。10. 验证过程10. 1菌液制备10. 1. 1取经30-35°c培养18-24h的铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽泡 杆菌的新鲜培养物lml加入9ml0. 9%无菌氯化钠溶液中，10倍递增稀释至lo-w8, 约为w10

7、0cfu/ml的菌悬液备用。10. 1.2取经20-25°c培养2-3天的白色念珠菌、黑曲霉的液体培养物lml,加入 9ml0. 9%无菌氯化钠溶液中，10倍递增稀释至10-5-10'8,约为wloocfu/ml的菌悬液 备用。10. 2实验操作10. 2.1胰酪大豆月东琼脂培养基：取11个无菌平皿，分别接种上述铜绿假单胞菌、 金黄色葡萄球菌、枯草芽泡杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2 jill,每皿接种lml菌液（接 种量wioocfu）,另1平皿不接种菌作为空白对照，倾注对照胰酪大豆腺琼脂培养基, 混匀，凝固后于3035°c倒置培养，培养吋间不超过3天（白色念珠菌、黑

8、曲霉培 养时间不超过5天），计数；被检培养基同法操作。10. 2. 2胰酪大豆月东液体培养基：新鲜配制10ml/支的对照月夷酩大豆月东液体培养基 7支，121°c灭菌15min,备用。取6支，分别接种上述铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球 菌、枯草芽孑包杆菌各2支，每支接种lml菌液（接种量wioocfu）,另1支不接种菌 作为空片对照；被检培养基同法操作。置3035°c培养，培养时间不超过3天，分 别观察结果。10.2.3沙氏葡萄糖琼脂培养基：取5个无菌平皿，分别接种上述白色念珠菌、 黑曲霉各2皿，每皿接种lml菌液（接种量wioocfu）,另1平皿不接种菌作为空片 对照，倾注对

9、照沙氏葡萄糖琼脂培养基，混匀，凝固后于2025°c倒置培养培养， 培养吋间不超过5天，计数；被检培养基同法操作。10. 3.检查结果：见附件5：计数用培养基适用性检查结果11 异常情况与偏差处理：当出现偏差吋，应按偏差处理管理规程进行处理。12验证结果评定、结论与建议验证小组组长负责收集各项验证、试验记录，根据验证、试验结果对验证效果进 行综合评审，起草验证报告、做出验证结论。对验证结果的评审应包括以下内容：12. 1验证试验是否有遗漏？12. 2验证实施过程中对验证方案冇无修改？修改原因、依据以及是否经过批 准？12. 3验证记录是否完整？12.4验证试验结果是否符合标准要求？偏差

10、及对偏差的说明是否合理？是否需 要进一步补充试验？13.附件13. 1附件1：验证实施条件确认13.2附件2:培养基确认13.3附件3:菌种确认13.4附件4:菌液浓度确定13. 5附件5:计数用培养基适用性检查结果13.6附件6:验证结果审批农附件1:设施设备验证确认设施设备名称验证报告编号验证结果实验室hvac系统纯化水系统ldzx-40a型立式口控电热压力psh-500a型生化培养箱303as-2型电热恒温隔水式培养sw-cj-1c型双人净化工作台确认结论:确认人：确认日期:附件2：培养基确认培养基名称来源批号有效期至胰酪人豆腺琼脂培养基胰酪大豆陈液体培养基沙氏葡萄糖琼脂培养基胰酪大豆腺

11、琼脂对照培养基胰酪大豆月东液体对照培养基沙氏匍萄糖琼脂对照培养基确认结论:确认人：确认日期:附件3：菌种确认枯草芽砲杆菌cmcc (b) 63 501铜绿假单胞菌cmcc(b)10 104金黄色葡萄球菌cmcc (b) 26 003白色念珠菌 cmcc (f) 98 001黑曲霉 cmcc (f) 98 003确认结论:确认人：确认h期:附件4：菌液浓度确定3o11o1a5 o1a6o117o1ain山in山in山in山ii山311 皿2皿s-t11 皿rnnnnnnnnnnnnnr大肠 埃希 菌11 皿2皿3皿2皿11 皿2皿色珠助> 白念菌氏11 皿ec融霉11 皿2皿黑曲 霉(沙氏

12、) 亠1l2il检验人检验时间年 月 日-年 月曰复核人复核时间年 月曰人肠埃希菌：稀释白色念珠菌（沙氏）：稀释铜绿假单胞菌:稀释金黄色衙萄球惭：稀释枯草芽抱杆菌:稀释白色念珠菌（胰酪）:稀释黑曲霉（胰酪）:稀释黑曲霧（沙氏）：稀释结论:根据要求,菌数要控制在每51中含菌数在wioocfu,因此,我们确定菌液制备:附件5：计数用培养基适用性检查结果培养基验证菌株皿号被检培养基 cfu/ml对照培养基 cfu/ml比值0. 5-2菌落形态 大小生长悄况胰酪大豆月东琼脂培 养基（30 35°c,w3 天） *白色念珠菌、黑曲 霉w5天铜绿 假单胞菌12平均金黄色葡萄球12平均枯草芽砲杆菌12平均白色念珠菌12平均黑曲後12平均空口1胰酪人豆腺液体培 养基（30 35°c,w3 天）铜绿 假单胞菌12金黄色葡萄球12枯草 芽他杆菌12空白1沙氏葡萄糖琼脂培养基白色念珠菌12(2328°c, 72h)平均黑曲霉12平均空白1检验人检验时间年 月 日-年 月