吸血蠓类DNA条形码标准基因鉴定方法-第1部分

1、出入境检验检疫行业标准草案编制说明1基本信息1.1标准草案名 称中文吸血嫌类dna条形码标准基因鉴定方法第2部分：操作规程英文the molecular identification of blood-sucking midges based on dna barcodespart 2： operating procedures1.2与国际标准 和国外先进标准 一致程度情况等同修改非等效标准号英文名称中文名称1.3任务来源批准立项 的文件名 称和文件号国家认监委关于下达2012年第 五批出入境检验检疫行业标准 制（修）订计划项目的通知（国认科201286 号）计划编号2012b4671.4制（

2、修）订 情况制订修订替代的标准编号1.5起止时间2013年01月2014年12月1.6起草单位福建出入境检验检疫局、吉林出入境检验检疫局、福建农林大学1.7起草人陈敏、张建庆、刘阳、高博、史灵梅、王飞鹏、肖菲菲、陈颖、谢建勋、 吴金枝、朱鸿达1.8专业类别卫生检疫1.9标准体系表 代码1.10调整情况2背景情况2.1目的、意义吸血竦是页学昆虫的重要类群z-, -k不仅刺叮吸血，而r是乙脑等多种病 原生物的自然携带者及传播媒介。对吸血螺的鉴定和识别，是监测与控制螺传疾 病发牛的基础，是检疫、疾病预防与控制领域的核心步骤。目前，对吸血峻及其 他类群医学媒介进行分类鉴定方法是通过经验丰富的分类学专家

3、识别形态学特征 来实现的，一旦遇到近源种和形态特征掌握不全等标本鉴定就非常棘手。而且， 吸血蟒的形态鉴定需要进行玻片标本制作，步骤多，周期长，无法满足口岸“检得 快”的要求，因此，亟需寻求一种准确而新的分类方法，以满足口岸-线的需求。？dna条形码技术(dna barcoding)是通过对一个标准目的基因的dna序 列进行分析，从而快速、准确地进行物种鉴定的技术。其主要有如下优势：(1) 能快速从部分零散组织中鉴別出物种；(2)能鉴别不同生长发育时期的不同形态；(3)能准确地辨别形态近似种；(4)条形码数据库提供的大量遗传信息可构建地 球上牛物的生命之树，新种也可通过其条形码数据追寻它在生命之

4、树屮的系统位 置。近几年來，dna条形码技术已被证明是一个行之有效的生物鉴定手段，不仅 可对传统鉴定方法作强有力的补充，1仏口.因为其更客观、准确，突破以往对经验 的过度依赖，能帮助慕定物种、发现新种和隐种、重建物种和高级阶元的演化关 系等，因此，dna条形码技术与其他分类学方法结合可为生态环境建设和生物多 样性保护提供全面、准确的物种信息。作为dna条形码的标准目的基因，一方面必须足够保守，便于利用通用引物 进行大范吊1的扩增；另一方面要有足够的变异来区分不同物种。因此，鉴定不同 的物种类群需要选择有效的h的基因。忖前，在系统发育研究中广泛应用的标志 基因是核糖体12s和16s基因，但因其存

5、在大量的插入和缺失现象，不宜用做条 形编码基因。线粒体基因组中存在的13个蛋白编码基因中仅细胞色素氧化酶业基 i (cytochrome oxidase subunit i , co i )、线粒体细胞色素 b (cytb)、nd4> nd5这4个基因满足基因插入和缺失现象较少、长度在900 bp左右这两个条件， 但nd4和nd5进化太快，难以设计出通用引物，限制了它们作为全而dna鉴定 系统的目标基因。故人们最终选定co i基因中一段约648 bp的片段作为条形编 码基因。迄今为止，诸多研究证明co i棊因在鸟类、鱼类、鳞翅目昆虫、蚊类、 蚁类和弹尾目等类群的分类鉴定中行之有效。国外已

6、有学者采用基于co i基凶的dna条形码技术对不显库嫁(culicoides obsoletus)和苏格兰库螺(c. scoticus)雌虫等吸血蝮进行了准确分类，说明其亦 可作为吸血嫌的一种鉴定方法应用于实际工作中，但我国至今未见报道。因此， 木标准规定了采用co i棊因进行吸血蟻种类(种间水平)鉴定的操作流程，并提 供了国境口岸6种常见吸血蛟的co i基因序列，为口岸一线准确鉴定吸血螳类提 供必要的技术指导和依据。2.2与国内外相 关标准、文献的 关系1、通过查新，目前国内外尚无相同的国家标准和行业标准或已立项未批准 发布的检验检疫行业标准。2、按照gb/t 1.1-2009标准化工作导则

7、 第1部分：标准的结构和编写 给出的规则进行编写。3编制过程3.1准备阶段（可选项）承担单位于2012年5月-2012年10月在福建省内进行常见吸血螺类的标本 采集工作，采获的标本冷冻处死后，直接保存于95%酒精中，以备后期进 行相关实验。3.2分工情况承担单位福建出入境检验检疫局负责标准的起草，并承担吸血螺类c0i基 因鉴定技术研究的相关实验；参与单位福建农林大学负责标本的采集和制 作，参与单位吉林出入境检验检疫局负责提供技术指导。3.3标准草案编 写情况1、2013年2月由福建出入境检验检疫局作为标准制定的组织单位对标准的 制定工作进行了认真研究，根据各单位相关人员的工作量和贡献大小，确

8、定了标准起草小组成员名单，并明确标准制定工作的要求和人员分工、工 作进度及时限要求。2、标准起草小组在广泛收集相关文献的前提下，组织相关起草人员进行研 讨，确定该标准草案的基本框架和主要技术内容等，并于2013年4月-10 月进行了相关的实验研究，根据实验结果，起草形成工作组讨论稿。3、2013年11月下旬将工作组讨论稿发给小组成员征求意见，并对反馈意 见进行了研讨和修改，形成该标准的征求意见稿。3.4征求意见情 况（适用于送审 稿）3.5审定情况 （适用于报批 稿）3.6预期的管理 目标（适用于规 程类标准）或技 术指标（适用于 方法类标准）4主要技术内容的确定1、范围本标准规定了国境口岸医

9、学媒介生物实验室采用co i基因进行吸血螺种类（种间水平） 鉴定的操作流程。本标准适用于国境口岸开展吸血螺类分子鉴定的医学媒介生物实验室。2、术语和定义由于该标准为系列标准，第1部分已有相关术语和定义，本部分不再重复。3、采标情况3.1采标情况无。3.2文本编辑的依据按照gb/t 1.1-2009标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写的规则进行编写。4、技术说明本标准在国内外已报道相关文献的基础上，对c0 i基因进行吸血螺种类（种间水平）鉴 定的反应体系进行优化，形成了规范的操作流程，并提供了 6种国境口岸常见吸血螺的c0 i基因序列，为口岸一线准确鉴定吸血螺类提供必要的技术指导和依据，具有

10、较强的科学性、 指导性和实用性。5验证情况（适用于方法类标准）5.1验证单位情 况验证单位验证人员验证时间xxxx 年 xx 月 xx 0xxxx 年 xx 月 xx 0xxxx 年 xx 月 xx 0xxxx 年 xx 月 xx 0xxxx 年 xx 月 xx 0xxxx 年 xx 月 xx 0xxxx 年 xx 月 xx 05.2验证过程5.3验证数据分 析5.4验证评价5.5其他应说明 的情况6附加说明（可选项）6.1宣贯标准的 建议6.2修订和废除 现行有关标准的 建议6.3作为强制性 标准或推荐性的 建议6.4其他需要说 明的情况6.5参考文献联系人黄恩炯联系电子邮箱enj