培养基适用性检查方法的验证

1、培养基适用性检查方法的验证文件编号制订日期审核日期批准日期a：验证方案方案制订 制订日期 方案编号 方案审核 审核日期 方案批准 批准日期1. 验证项目名称2. 验证组织3. 概述4. 验证目的5. 参照标准6. 验证程序7. 验证报告、评价及批准1. 验证项口名称：培养基适用性检查方法的验证2. 验证组织：姓名部门职务分工3概述:通过验证以确认所采用的方法适合于培养基适用性检 查。根据培养基及菌的特性制订检验方法和检验条件，按 制定的方法进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标 准。若符合，按验证的方法和条件进行培养基适应性检查; 若不符合，重新建立制订检验方法和检验条件，再进行验 证，直至

2、验证结果符合设立的验证标准。4. 验证目的：细菌、霉菌及酵母菌计数用培养基应进行培养基的适用性检查。验证的目的是确认营养琼脂培养基和玫瑰红钠 琼脂培养基适合细菌、霉菌及酵母菌数测定。（确认所采用的方法适合于培养基适应性检查,为了保证检验结果的准确性，对现有的检验方法进行验证。）5. 参照标准：2010年版小国药典二部附录xij计数培养基的 适用性检查。6. 验证程序：6.1适用范围：适用于培养基适用性检查。6. 2被验证产品：营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基。6. 3试验材料：6. 4试验菌株：6. 5合格标准：被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养 基上的菌落平均数的70%,且菌落形态大小

3、与对照培养基上 的菌落一致。6. 6验证方法：培养基在使用前应进行适用性的检查，通过对被检培养 基上的菌落与对照培养基上的菌落比较，以确认所采用方法 的可行性。6. 6.1菌液的制备：6. 6. 1. 1接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽砲杆 菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，于3035°c培养18 24小时。取上述营养肉汤新鲜培养物lml加入9ml0. 9%无菌 氯化钠溶液中，10倍稀释至kt'ict约为50100cfu/ml 的菌悬液备用。6. 6.1. 2接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，于2328°c培养2448小时。取上述改良马丁新鲜液 体

4、培养物lml加入9ml0. 9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至 10恋约为50100cfu/ml的菌悬液备用。6. 6. 1. 3接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养 基上，于2328°c培养57天，加入35 ml含0.05%（ml/nil）聚山梨酯80的0. 9%无菌氯化钠溶液，将抱子洗脱。 然后，采用适宜的方法吸出抱子悬液至无菌试管内，用0. 05%（ml/ml）聚山梨酯80的0. 9%无菌氯化乍内溶液制成每lml含 抱了数5000cfu/m的抱了悬液备用。6. 6.2菌液的计数：（每种菌液接种2个平皿）6. 6. 2. 1分别接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽抱 杆

5、菌各2皿，每皿接种lml菌液（含菌50loocfu）,倾注 营养琼脂培养基，凝固后于3035°c倒置培养48小时。6. 6. 2. 2分别接种白色念珠菌2皿，每皿接种lml菌液（含 菌50loocfu）,倾注玫瑰红钠琼脂培养基，凝固后于23 28°c倒置培养72小时。6. 6.2.3菌落计数结果（2个平皿计数取平均值）见下表：菌落计数结果(cfu/ml)试验次数10-510"10 712平均12平均12平均大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽抱杆菌白色念珠菌6. 3适用性检查6. 3. 1营养琼脂培养基6. 3. 2玫瑰红钠琼脂培养基6. 3. 3胆盐乳糖培养基6. 3. 4结果(见下表)6.4结论培养基适用性检查验证记录试验时间 年 月 f1试验时间年 月 f1试验菌株平皿号供试品组 cfu/ml对照培养基组 cfu/ml冋收率应$70%大肠埃希菌（培养3天计数）12平均