复方氨酚那敏颗粒微生物限度检查方法验证方案

1、复方氨酚那敏颗粒微生物限度检查方法验证方案复方氨酚那敏颗粒微生物限度检查方法适用性验证方案目 录1. 概述2. 验证目的和范围3. 组织及职责4. 验证进度计划表5. 验证所需耍的仪器设备及相关文件的确认6. 验证所需要的菌种、培养基、检验样品的确认7验证项目和验证方法7.1试验菌株7.2需氧菌总数检查、霉菌和酵母菌总数检查方法验证的菌液制备7.3需氧菌总数检查、霉菌和酵母菌总数检查方法验证-常规倾注平皿7.4控制菌检查方法验证一常规倾注平皿法8.偏差与漏项控制9 验证报告会审1.概述我公司牛产詁种复方氨酚那敏颗粒，产品微牛物限度检查项目为需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数、以及大肠埃希菌检查和沙门

2、菌检查。参照中 国药典2015版四部附录1105：微生物计数法，以及1106：控制菌检查 法的规定，本公司对该产品的微生物限度检查方法予以验证。通过验证以 确认所采用的微生物限度检查方法适用。本验证方案根据样品特性制定微生物限度检查方法和检验条件，按制 定的方法进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准。2验证冃的 和范围验证该产品的微生物限度检查方法的适用性，对其有效性进行评价, 保证检验结果的可靠性。本验证方案采用3批按gmp要求组织生产的复 方氨酚那敏颗粒，进行微生物限度检查方法的验证。3组织及职责3.1验证方案和验证报告的起草、审核、批准验证方案由质量部qc组负责起草，由质量部审核，最

3、终由质量部经 理批准。验证方案实施完成后，由qc组负责汇总微生物限度检查法验证 的结果、撰写报告，由质量部审核，最终由质量部经理批准报告。3.2验证方案实施过程中的变更和偏差验证方案实施过程中如有变更和偏差，质量部经理应当组织进行评估并采取相应的控制措施。3.3验证工作小组成员表4.验证进度计划表本次微生物限度检查方法验证的计划安排时间是 年 月至 年 月。5.验证所需要的仪器设备及相关文件的确认5丄主要检验仪器设备 确认表检查人/日期：复核人/日期：52验证所需文件的确认表检查人/日期：复核人/日期：6.验证所需要的菌种、培养基、检验样品的确认6.1试验菌 种检查表检查人/日期：复核人/日期

4、：6.2试验所需的培养基检查检查人/日期：复核人/fi期：6.3.检验样品确认表检查人/日期：复核人/日期：7验证项目和验证方法7.1试验菌株复方氨酚那敏颗粒需氧菌总数检查、霉菌和酵母菌总数检查方法验证 所用的菌株为金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽抱杆菌、白色念珠 菌、黑曲霉；控制菌检查方法验证所用的菌株为大肠埃希菌、乙型副伤寒 沙门菌。试验菌株的传代次数不得超过5代，并采用适宜的菌种保藏技术 进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。7.2需氧菌总数检查、霉菌和酵母菌总数检查方法验证的菌液制备分别接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽砲杆菌的新鲜培养 物至100ml胰酪大豆腺液体培养基屮，

5、3035°c培养1824小时，取此 培养液lml加0.9%无菌氯化钠溶液9ml,采用10倍递增稀释法，稀释至1010,制成50100cfu/ml的菌悬液备用。接种口色念珠菌的新鲜培养物至100ml沙氏葡萄糖液体培养基中，2025°c培养23天，取此培养液lml加0.9%无菌氯化钠溶液9ml,采 用10倍递增稀释法，稀释至10-10,制成50100cfu/ml的菌悬液备用。接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面上，2025°c培养57天,直到获得丰富的抱子。加入35ml含有0.05%聚山梨酯80的0.9% 无菌氯化钠溶液，将抱子洗脱，吸至无菌试-5-7-s-7管

6、中，取lml加含有 0.05%聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液9ml,采用10倍递增稀释法， 稀释至10-5-10-7,制成50100cfu/m的抱子悬液备用。菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在28°c, 可在24小时内使用。黑曲霉抱子悬液可保存在28°c，在验证过的贮存 期内使用。验证时，对各试验菌的回收率逐一进行验证。73需氧菌总数检查、霉菌和酵母菌总数检查方法验证-常规倾注平 皿法7.3.14*试液的制备取供试品:lo.og,加ph7.0氯化钠蛋白腺缓冲液至100ml,振摇，制成1： 10的供试液。732试验组取:l 10的供试液lml和7.2项

7、下制备的50loocfu的试验菌，分别 注入平皿屮，立即倾注不超过45°c的胰酪大豆月东琼脂培养基20ml混匀, 每株试验菌株平行制备2个平皿。置3035°c培养箱中培养3天（金黄色 葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽泡杆菌），或培养5天（白色念珠菌、 黑曲霉），点计菌落数。另取1： 10的供试液1ml和7.2项下制备的50100cfu的白色念珠菌、 黑曲霉，分别注入平1111中，立即倾注不超过45°c的沙氏葡萄糖琼脂培养基 20ml混匀，每株试验菌株平行制备2个平皿。置2025°c培养箱中培养5 天，点计菌落数。733.供试甜对照组取10的供试液lml注入

8、平皿中，立即倾注不超过45°c的胰酪人豆 腺琼脂培养基20nr）l混匀，平行制备2个平皿。置3035°c培养箱中培养 5天，点计菌落数。另取10的供试液lml注入平皿屮，立即倾注不超过45°c的沙氏葡 萄糖琼脂培养基培养基20ml混匀，平行制备2个平皿。置2025°c培养 箱中培养5天，点计菌落数。7.3.4.菌液对照组取ph7.0氯化钠蛋白腺缓冲液lml和7.2项下制备的50100cfu的试 验菌，分别注入平皿中，立即倾注不超过45°c的胰酪大豆月东琼脂培养基 20ml混匀，每株试验菌株平行制备2个平皿。置3035°c培养箱中培养3

9、 天（金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽抱杆菌），或培养5天（白 色念珠菌、黑曲霉），点计菌落数。另取ph7.0氯化钠蛋白腺缓冲液lml和7.2项下制备的50100cfu的 白色念珠菌、黑曲霉，分别注入平皿屮，立即倾注不超过45°c的沙氏葡萄 糖琼脂培养基培养基20ml混匀，毎株试验菌株平行制备2个平皿。置2025°c培养箱中培养5天，点计菌落数。7.3.5.常规倾注平皿法方法验证的接受标准试验组菌落数减去供试品对照组菌落数的值与菌液对照组菌落数的 比值（即试验菌的回收率）应在05?2范围内。736.常规倾注平皿法方法验证的结果736丄常规倾注平皿法测定需氧菌总数方法验证

10、结果试验次数复方氨酚那敏颗粒批号：；胰酪大豆月东琼脂培养基配制批号：培养箱型号编号；培养温度：;培养时长：金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽抱杆菌3天，白色念珠菌、黑曲霉5天试验人/日期：复核人/日期：试验次数2：复方氨酚那敏颗粒批号：;胰酪大豆月东琼脂培养基配制批号：培养箱型号编号;培养温度：；培养时长：金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽葩杆菌3天，白色念珠菌、黑曲霉5天试验人/日期：复核人/fi期：试验次数3：复方氨酚那敏颗粒批号：；胰酪大豆陈琼脂培养基配制批号：培养箱型号编号；培养温度：；培养时长：金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽抱杆菌3天，白色念珠菌、黑曲霉5天试验人/日期:核

11、人/日期：73.6.2.常规倾注平皿法测定霉菌与酵母菌总数方法验证结果试验次数1：复方氨酚那敏颗粒批号：批号：培养箱型号养温度：；培养时长：5天试验人/日期：核人/日期：试验次数2：复方氨酚那敏颗粒批号：批号：培养箱型号温度：；培养时长：5天试验人/日期：核人/fi期：试验次数3：复方氨酚那敏颗粒批号：批号：培养箱型号温度：；培养时长：5天试验人/日期：;沙氏葡萄糖琼脂培养基配制编号；培复;沙氏葡萄糖琼脂培养基配制编号；培养复:沙氏葡萄糖琼脂培养基配制编号；培养复核人/fi期：7.3.7.常规倾注平皿法测定需氧菌总数、霉菌与酵母菌总数 方法验证小结74控制菌检查方法验证一常规倾注平皿法7.4.

12、1试验菌株复方氨酚那敏颗粒质量标准中规定检查的控制菌为大肠埃希菌、乙型 副伤寒沙门菌，所以选择这两种菌株进行控制菌检查的方法学验证。试验菌株的传代次数不得超过5代，并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以 保证试验菌株的生物学特性。7.4.2控制菌检查方法验证的菌液制备分别接种大肠埃希菌、乙型副伤寒沙门菌的新鲜培养物至10ml胰酪 大豆月东液体培养基中，3035°c培养18-24小时，取此培养液lml加0.9%无菌氯化钠溶液9ml, 采用10倍递增稀释法，稀释至10-10,制成50100cfu/ml的菌悬液备用。菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在28°c, 可

13、在24小时内使用。验证时，对各试验菌的回收率逐一进行验证。7.4.3大肠埃希菌检查方法验证7.4.3.1供试液的制备取供试rs lo.og,加ph7.0氯化钠蛋白腺缓冲液至100ml,振摇，制成 1： 10的供试液。7.432.试验组取供试液10ml,加入7.4.2项下制备的50loocfu的大肠埃希菌接种 至100ml胰酪大豆月东液体培养基中，混匀，3035°c培养1824小时。取上述增菌培养物lml接种至100ml麦康凯液体培养基中,4244°c培 养2448小时o取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上，3035°c 培养18-72小时。麦康凯琼脂

14、培养基平板上应有大肠埃希菌典型菌落生 长。7.43.3阳性对照组照7.4.2项下菌液制备方法，以0.9%无菌氯化钠为稀释液，将大肠埃 希菌液稀释至含菌50100cfu/ml,取 菌液1 ml,接种至100ml胰酪大豆 月东液体培养基中，混匀，3035°c培养18-24小时。取上述增菌培养物lml接种至100ml麦康凯液体培养基中,4244°c培 养2448小时。取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上，3035°c 培养18-72小时。麦康凯琼脂培养基平板上应有大肠埃希菌典型菌落牛 长。7.43.4阴性对照组取ph7.0氯化钠蛋口腺缓冲液10ml,接种至100ml胰酪大豆月东液体培 养基中，混匀，3035°c培养1824小时。阴性对照应无菌生长。7.43.5常规倾注平皿法测定大肠埃希菌方法验证结果试验次数复方氨酚那敏颗粒批号：大肠埃希菌对照菌来源批号（菌种编号）57试验人/日期：复核人/日期：试验次数2：复方氨酚那敏颗粒批号：大肠埃希菌对照菌来源批号（菌种编