DNAFeulgen染色课件

1、DNAFeulgen染色PPT课件DNADNA的的FeulgenFeulgen染色法染色法DNAFeulgen染色PPT课件1.1.了解了解Feulgen染色反应原理；染色反应原理；2. 掌握掌握FeulgenFeulgen染色的方法，观察染染色的方法，观察染色结果。色结果。实验目的实验目的DNAFeulgen染色PPT课件 DNA DNA经弱酸（经弱酸（lmollmolL HCIL HCI）水解）水解, ,其上的其上的嘌呤碱和脱氧核糖之间的配糖键打开嘌呤碱和脱氧核糖之间的配糖键打开, ,使脱氧使脱氧核糖的一端形成游离的醛基核糖的一端形成游离的醛基, ,这些醛基在原位这些醛基在原位与与Schi

2、ffSchiff试剂试剂( (无色品红亚硫酸溶液无色品红亚硫酸溶液) )反应反应, ,形形成紫红色的化合物成紫红色的化合物, ,使细胞内含使细胞内含DNADNA的部位呈紫的部位呈紫红色阳性反应红色阳性反应. .实验原理实验原理DNAFeulgen染色PPT课件 碱性品红为红色，结构如图碱性品红为红色，结构如图1中中A，A与与能产生能产生SO2的试剂作用后（如偏重亚硫酸钾的试剂作用后（如偏重亚硫酸钾与盐酸作用，还原出与盐酸作用，还原出SO2），双链打开，成），双链打开，成为无色的为无色的Schiff试剂，试剂，Schiff试剂的结构如图试剂的结构如图中中B所示，所示，B分子再与分子再与2个醛基（

3、个醛基（DNA水解后水解后释放出的醛基）结合又出现双链，成为结构释放出的醛基）结合又出现双链，成为结构如图中如图中C所示的化合物，呈紫红色。所示的化合物，呈紫红色。 DNAFeulgen染色PPT课件图图1 Feulgen反应的染色原理反应的染色原理 DNAFeulgen染色PPT课件 DNA染色后，除形成紫红色染色后，除形成紫红色C化合物化合物外，必然有多余的外，必然有多余的A和和B分子，分子，B分子很容分子很容易被氧化转变为易被氧化转变为A有色分子，从而造成伪差。有色分子，从而造成伪差。因此必须迅速地多次用现配的因此必须迅速地多次用现配的SO2水清洗，水清洗，使使A分子转变为无色的分子转变

4、为无色的B分子，消除染色的分子，消除染色的伪差。伪差。DNAFeulgen染色PPT课件 本次实验对照组的设立：本次实验对照组的设立：不经稀不经稀酸水解；酸水解；预先用热三氯醋酸或预先用热三氯醋酸或DNA酶酶处理，抽提去细胞中的处理，抽提去细胞中的DNA，而得到阴，而得到阴性反应，从而证明了性反应，从而证明了Feulgen反应的专反应的专一性。一性。DNAFeulgen染色PPT课件实验用品实验用品材料材料 洋葱内表皮洋葱内表皮试剂试剂 Carnoy固定液固定液 l mol/L HCl Schiff试剂试剂 亚硫酸水溶液亚硫酸水溶液(漂白液漂白液) 0.5%固绿染液固绿染液DNAFeulgen

5、染色PPT课件实验方法：实验方法：取材（洋葱内表皮）取材（洋葱内表皮） 固定固定 1015分钟分钟 对照对照2 水洗水洗 2分钟分钟 5%三氯醋酸三氯醋酸90度度15分钟分钟 对对 照照 水解水解(1M HCl ) （置室温（置室温1分钟后，分钟后，608分钟）分钟） 1 水洗（可省）水洗（可省） 反应反应 ( Schiff s) （暗袋中（暗袋中 40分钟）分钟） 洗涤洗涤 ( 亚硫酸水亚硫酸水) 洗三次，每次洗三次，每次5分钟分钟 水洗水洗 5分钟分钟 复染（复染（0.5 固绿固绿) 1分钟分钟 水洗水洗 镜检镜检 实验组：细胞核呈紫红色，核仁及细胞质呈绿色实验组：细胞核呈紫红色，核仁及细

6、胞质呈绿色DNAFeulgen染色PPT课件 1.取材薄，幼嫩，大小合适。取材薄，幼嫩，大小合适。 2.固定剂以固定剂以Carnoy固定最合适，涂片可用甲醇固定。固定最合适，涂片可用甲醇固定。 3.水解时间勿过短或过长。水解时间勿过短或过长。 4.Schiff试剂质量可靠，无色，强刺激气味，密封，试剂质量可靠，无色，强刺激气味，密封， 避光使用保存（避光使用保存（6个月）。个月）。 5.洗涤剂现用现配，保持有足够的二氧化硫浓度。洗涤剂现用现配，保持有足够的二氧化硫浓度。 6.认真做对照，以示阳性反应的真实性。认真做对照，以示阳性反应的真实性。 7.对照组不可反应对照组不可反应40分钟以上。分钟以上。 8.避免固绿过染。避免固绿过染。注意事项