头孢哌酮钠中乙二胺四乙酸二钠的检查

1、头孑旬哌酮钠中乙二胺四乙酸二钠的检查摘要目的运用高效液相色谱法测定头抱哌酮钠原料药屮乙二胺 四乙酸二钠的含量。方法 釆用依利特ods c18色谱柱(4. 6 mmx250 mm, 5 inn)；以ph 3.4醋酸盐缓冲液及乙睛为流动相，进行梯度洗脱；流速 1.5 ml/min；检测波长254 nm；柱温40°c。结果edta-2na的浓度与峰 面积在25. 23-75. 68 u g/ml范|韦|内呈良好的线性关系，回归方程为： y=6. 5401x +5. 4383, r=0. 9999；平均回收率 97. 7%, rsd 为 1. 0%。结论 该 方法可行，对头抱哌酮钠的质量控制

2、有一定的意义。关键词高效液相色谱法；梯度洗脱；头砲哌酮钠；乙二胺四乙酸 二钠中图分类号r927 文献标识码b 文章编号2095-0616 (2013) 10-102-02头抱哌酮钠是日本富山化学工业公司研制开发的笫三代头孑包菌素， 1981年上市，在国外通过辉瑞公司销售。头砲哌酮钠是我国国家基本药物, 与其他第三代头砲菌素相比具有抗菌谱广、抗菌作用强、毒性低、疗效好、 过敏反应少等优点，所以从上市以来，在临床上得到广泛的应用。我公司 在生产头抱哌酮钠过程中，用乙二胺四乙酸二钠作为络合剂，查阅相关文 献得知，但edta-2na易与钙螯合，长期大剂量使用或静脉注射速度过快, 乙二胺四乙酸二钠会与血

3、液及骨骼中的钙形成水溶液螯合物引起低血钙 症或骨钙流失，为确保其临床用药安全性，我们对产品中残留的二乙胺四 乙酸二钠进行定量研究1-2 o本实验参照文献3-9采用高效液相梯度洗 脱法测定其中乙二胺四乙酸二钠的含量，操作简便、快速、结果准确可靠, 并不受其他成分的干扰，可用于本产詁屮乙二胺四乙酸二钠的含量测定。1材料与方法1. 1仪器与试剂美国安捷伦1200型高效液相色谱仪，chemistation色谱工作站； bp211d型万分之一电子分析天平，德国赛多利斯，科学仪器（北京）有限 公司。头抱哌酮钠样品（由珠海保税区丽珠合成制药冇限公司提供，批号 为100400k 1004002. 100400

4、3）；乙二胺四乙酸二钠（分析纯，天津市福 晨化学试剂厂提供）；水为注射川水；无水醋酸钠（分析纯，天津市广成 化学试剂有限公司）；冰醋酸（分析纯，广州化学试剂厂）。1.2方法1.2. 1色谱条件 色谱柱为依利特ods c18柱（46mmx 250 mm, 5 p m）；柱温为40°c；流动相a为ph 3. 4醋酸盐缓冲液（取醋酸钠0.68 g, 冰醋酸5. 8 g,加水稀释成1000 ml,用冰醋酸调节ph值至3. 4）,流动 相b为乙月青；流速为1.5 ml/min；检测波长为254 nm；进样量为20 u lo 按表1进行线性梯度洗脱。在此条件下，乙二胺四乙酸二钠色谱峰与相邻 成分

5、均可达到基线分离，见图1。1. 2. 2溶液制备（1）对照品溶液的配制:精密称取edta对照品50. 00 mg,置于100 ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液; 精密量取对照品储备液5 ml,置50 ml容量瓶中，先加5 ml的1%硫酸铜溶液，再用水稀释至刻度，摇匀。（2）供试品溶液的制备：精密称取头他 哌酮钠样品50. 00 mg,置50 ml容量瓶中，先加5 ml的1%硫酸铜溶液使 溶解，再用水稀释至刻度，摇匀。2结果2. 1方法学考察2. 1. 1线性关系的考察取edta-2na对照品适量，加水溶解并定量稀 释制成每1毫升中含100 p g的溶液，作为线性母液。分别取

6、线性母液5. 0 ml、8.0 ml、10.0 ml、12.0 ml、15.0 ml 置 20 ml 容量瓶中;加水稀释 至刻度，摇匀，即得线性iv溶液。按“121项”色谱条件精密进样 20 ul注入液相色谱仪，测定峰面积，以edta浓度（x）为横坐标，峰面 积（y）为纵坐标，进行线性回归，回归方程为：y =6. 5401x + 5.4383, r=0. 9999,结果表明，edta-2na 在 25. 23 u g/ml 75. 68 u g/ml 范围内 浓度与峰面积线性关系良好。2. 1. 2精密度试验 精密吸取edta-2na对照品溶液,按“12. 1项” 色谱条件进样，重复进样5次，

7、记录所测量色谱的峰面积，得出edta峰 面积的相对标准偏差rsd值为1.30%,实验结果表明，使用高效液相色谱 法对乳酸钠的含量进行检测具有良好的精密度。2. 1.3稳定性试验 取对照品溶液在5°c条件下放置，分别于0、2、4、6、8h进样，以edta峰面积计算，rsd值为1.3%,表明对照甜溶液在8 h 内稳定。2. 1. 4加样回收率试验精密称取edta对照品50. 50 mg,置100 ml 容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液；精密称取 已知edta-2na残留含量的本品（批号1004001, edta-2na残留未检出） 50.01 mg> 50.

8、17 mg、50. 28 mg,置50讥 容量瓶中，分别加入上述对照 品贮备液4讥、5 ml. 6 ml,再分别加5 ml的1%硫酸铜溶液，最后用水 定容至刻度；分别制成高、屮、低3个浓度的供试品溶液，按“ 1.2.1项” 色谱条件进样，每个浓度下测试3次，计算edta的平均回收率（n二9）为 97. 7%, rsd=1. 0%,见表 2。2. 1.5检测限和定量限 取edta对照品溶液，逐步稀释，精密量取20 ul,注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，按s/n二3 （噪音高度的3倍） 计算检测限；按s/n二10 （噪音高度的10倍）计算定量限。结果edta的检 测限为 0. 0238 ?g/m

9、l；定量限 0. 0595 ?g/mlo2.2样品测定取不同批次的头抱哌酮钠样品共3批，按“1. 2. 2项”方法制备供试 品溶液，按“12. 1项”色谱条件进样,测定edta-2na的含量，见表3。3讨论乙二胺四乙酸二钠含量测定多釆用薄层分析、滴定法和比色法，由于 这些方法专属性差、选择性差,故考虑采用专属性较高的hplc法。在本 实验中，我们通过较全面的方法学验证，建立了一种梯度反相hplc测定 法，在该色谱系统中，色谱峰保留时间适宜，峰形良好，重现性好，该方 法用于测定头也哌酮钠原料药屮乙二胺四乙酸二钠的含量，准确、可靠。参考文献1刁岩忠，韩继永，陈祥峰.hplc法测定注射用泮托拉哇钠中

10、乙二 胺四乙酸二钠的含量j约物分析杂志，2011, 31 （2）： 282-284.2韩继永，张秋香，袁玉，等反相高效液相色谱法测定注射用奥 美拉呼钠中乙二胺四乙酸二钠含量j医药导报，2010, 29 ( 11 )： 1493-1495.3 耿志旺，刘蔚，刘茜，等.hplc法测定丙泊酚注射液屮乙二胺四 乙酸二钠含量j药物分析杂志，2011, 31 (3)： 586-588.4 屈蓉，钱桂英，陈佳反相离子对高效液相色谱法测定盐酸林可 霉素注射液中乙二胺四乙酸二钠的含量j约学与临床研究，2012, 20(4)： 372-374.5 薛琦，杨龙华反相离子对高效液相色谱法测定混悬滴眼液中乙 二胺四乙酸二钠含量j中国药业,2012, 21 (1)： 24-25.6 雒丽红，徐英，高雪军，笔.hplc法测定病毒性疫苗中edta二钠 残余量j微生物学免疫学进展，2010, 38 (1)： 55-59.7 郑睿行，张旭，方芳，等高效液相色谱法测定酱腌菜制品中edta 残留量j中国食品添加剂,2011, 105 (2)： 212-21