对乙酰氨基酚片微生物限度检查方法的验证

1、对乙酰氨基酚片微生物限度检查方法的验9956?黑龙江医药 heilonsjlangmedicinejournalvol23no.620109临床药学？对乙酰氨基酚片微牛物限度检查方法的验证王选骏，李延春黑龙江仁合堂药业有限责任公司(牡丹江157011)摘要目的:验证吋乙酰氨基酚片的微生物限度检 查方法是否适用于该供试品的检查方法:细菌计数采用 低速离心一培养基稀释法，霉菌及酵母茵计数按常规检查 法,控制茵按常规检查法.结果:稀释剂对照组的茵回收率 大于70%,试验组的茵回收率大于70%;阴性对照组未检出 阴性对照茵，试验组检出阳性试验茵结论:可以用该微生 物限度检查法进行对乙酰氨基酚片的检查.

2、关键词:对乙酰氨基酚片;微生物限度检查法;验证 中图分类号:r927.1文献标识码:a文章编号:10062882j2010)0695602valiuationofmicrobiallimittestforparacetamolwangxuanj un,et02heilongjiangrenhetangmedicine.co.,ltd(l 57011) abstract:objecfive:totestwheatheritisfeasibletome.diumparaeetamolbyvaliuationofmicrobiallimit.mettlotis: dilulingpalatemeth

3、odforbacteriacount.conventionalmethod terialcounlresuits:therecoveryofbacteriumincontrolgroup ismorethan70%.therecoveryofbacteriumintestgroupis morethan70%.nonegativecontrolbacteriuminnegative controlgroup.conclusionritisfeasibletotestparacetamolby valiuationofmicrobiallimitmethod.keywords:paracetam

4、ol;valiuationofmicrobiallimittest:medium对乙酰氨基酚片是临床常用的解热镇痛类非处方药，其微生物限度检查法本公司以前采用常规法，为了保证检 验方法的科学性，现对本公司生产的对乙酰氨基酚片的微 生物限度检查方法进行方法学验证，验证此方法是否适用 于该供试品的检查，以保证检品检验结果的准确性.1材料与仪器1.1试验样品药品名称:对乙酰氨基酚片批号:20090501,20090502,20090503生产厂家:黑龙江仁合堂药业有限责任公司1.2验证用仪器121电热恒温干燥箱,电冰箱，电热恒温培养箱,恒温水 浴锅,离心机，蒸汽灭菌锅，集菌仪等.1.2.2玻璃器皿:

5、锥形瓶(250ml),培养1111(直径9cm),量筒(100ml),试管,吸管等.(使用前均洗涤干净，并高压蒸汽121 °c灭菌30min或160cc干热灭菌2h.)1.3验证用菌种金黄色葡萄球菌cmcc(b)26003;大肠埃希菌cm cc(b)44102;枯草芽泡杆菌cmcc(b)63501;白色念珠 菌 | cmcc(f)98001 ;黑曲霉cmcc(f)98003|.以上菌种 由黑龙江省药品检验所提供.1.4验证用培养基及稀释剂营养琼脂培养基，批号080424;玫瑰红钠琼脂培养基，批号061208;胆盐乳糖培养基，批号070118;营养肉汤培养 基，批号070313;改良马

6、丁培养基，批号080408;曙红亚甲蓝 琼脂培养基，批号060111.以上培养基由中国药品生物制 品检定所提供.2验证条件无菌室环境洁净度为10000级,局部洁净度为100级，开启无菌室紫外灯和空气过滤装置30min以上，供试品及灭 菌的器具等经传递窗紫外杀菌灯照射30rain至无菌室内，试 验人员手消毒后穿无菌服进入操作间.3方法与结果3.1菌液制备接种金黄色葡萄球菌，大肠埃希菌，枯草芽也杆菌的新鲜斜面培养物接种于营养肉汤培养基中，于3035c培养1824小时,分别取各菌种培养液iml加入0.9%无菌氯化 钠溶液9ml中,10倍依次稀释，金黄色葡萄球菌稀释至 1o，大肠埃希菌稀释至10 一,

7、枯草芽砲杆菌稀释至10， 约为 50100cfu/ml,备用.接种白色念珠茵的新鲜培养物至改良马丁培养基中，于2328cc培养2348小时，取培养液1ml加入0.9%无 菌氯化钠溶液9ml中,10倍依次稀释至1o，约为50 100cfu/ml,备用.取黑曲霉的新鲜斜面培养物，用0.9%无菌氯化钠溶液5ml将砲子洗下，吸取此溶液lml至一个无菌的比色管中， 加0.9%无菌氯化钠溶液适量与标准比浊管进行比浊，取比 浊后的菌悬液lml加入0.9%无菌氯化钠溶液9ml中,10倍 依次稀释至10 一，约为50100cfu/ml,备用.3.2供试液制备取供试品10g,加ph7.0无菌氯化钠一蛋口腺缓冲液至

8、 looml,用匀浆仪分散混匀，作为1:10的供试液.3.3细菌,霉菌及酵母菌计数验证试验331试验组:细菌计数釆用低速离心一培养基稀释法，取 1:10供试液10ml,500转/分离心5分钟,取全部上清液，用 ph7.0无菌氯化钠一蛋口腺缓冲液补足至原量，混匀，再从 屮取lml分别加入5个平皿中（每1ijl 0.2ml）,加入各阳性细 菌试验菌1血,立即倾注相应的琼脂培养基，置32c恒温培 养箱中培养48h,测定细菌数霉菌及酵母菌计数采用常规 黑龙江医药 heilongjiangmedicinejournalvol23no.620107957? 法，取1:10供试液lml,加入各霉菌及酵母菌试

9、验菌lml,立 即倾注玫瑰红钠琼脂培养基置25e恒温培养箱中培养 72h.测定霉菌及酵母菌数.每株试验菌平行制备二个平 皿.3.3.2菌液组:取稀释好的各菌液lml,分别加入平皿中， 加人相应培养基，至规定条件培养，测定所加的试验菌数， 每株试验菌平行制备二个平皿.333供试品对照组:按试验组方法，测定供试品本底菌 数3.3.4稀释剂对照组:取稀释剂替代供试液，方法同试验 组.试验组茵回收率（）=（试验组平均菌落数一供试品 对照组平均菌落数）/菌液组平均菌落数 x 100%（1） 稀释剂对照组菌回收率（）：（稀释剂对照组平均菌 落数/菌液组平均茵落数）x 100% 三次试验结果见表1,表2,表

10、3.表1第一次试验结果刊金黄色大肠枯草芽白色黑曲刖 葡萄球菌埃希菌也杆菌念珠菌霉菌拍酬金黄色大肠枯草芽口色黑曲刺葡萄球菌埃希菌孑包杆菌念珠菌霉菌3.4控制菌检查方法的验证3.4.1试验组:取1:10的供试液10ml,置无菌条件下离心 （5oo转/分）5分钟，取上清液置无菌试管中,ph7.0无菌氯 化钠一蛋口陈缓冲液补足至原量，混匀，加至胆盐乳糖培养 基looml屮，再加阳性对照菌大肠埃希菌菌液1ml,摇匀，置 3537°c恒温培养箱中培养18-24小吋大肠埃希菌浓度 同细菌，霉菌及酵母菌数验证.3.4.2阴性对照组:方法同试验组，加入lml阴性菌（即金 黄色葡萄球菌，浓度同细菌，霉菌

11、及酵母菌数验证），置35- 37°c恒温培养箱屮培养1824小时.结果见表4,表5,表6.?表4第一次试验结果表5第二次试验结果表6第三次试验结果3.5结果分析351细菌,霉菌及酵母菌计数验证结论由表1,2,3及公式（1）和（2）可知，在三次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率均大丁 70%,试齡组的菌 回收率均大于70%,故可照供试液制备方法和计数法测定 对乙酰氨基酚片的细菌，霉菌及酵母菌数.3.5.2控制菌验证结论由表4,5,6可知，在三次独立的平行试验中，阴性对照 组未检出阴性对照菌，试齡组检出阳形试齡菌，故可用此供 试液制备法和控制菌检查法进行对乙酰氨基酚片的控制菌 检查.4讨论4.1许多药品木身的特性（如抑菌性）会对检验结果带来 影响，因此在进行微生物检验前，需要对供试品进行适当的 预处理，以消除其本身带来的干扰.4.2药品的微生物检查是保证药品使用安全的重要检查 项目,为保证药品的微牛物检查的准确性，必须对每个品种 的检验方法进行验证.4.3试验过程中，