第七章 球菌1模板

1、课程名称：临床微生物学和微生物学检验学期学年：2014-2015（一）授课内容：第七章 球菌1授课教师：宋新颖授课班级：2012级医学检验技术本科1、2班讲稿内容：球菌是指菌体形态为球形一类细菌常引起一些化脓性炎症也称化脓性球菌对人致病的球菌称病原性球菌。球菌按染色性分类:革兰阳性球菌：葡萄球菌属、链球菌属（链球菌、肺炎链球菌）、肠球菌属、微球菌属等革兰阴性球菌：奈瑟菌属、布兰汉菌属与医学有关的革兰阳性兼性厌氧球菌有9属。临床最常见的兼性厌氧球菌，包括葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌属。革兰阴性球菌主要包括奈瑟菌属（Neisseria）和莫拉菌属（Moraxella）。第一节 葡萄球菌属葡萄球菌属

2、（Staphylococcus）在自然界广泛分布。最常见的化脓性球菌，存在于人和动物的皮肤黏膜上的菌株可致多种化脓性感染，如疖、痈、脓肿、菌血症等，还可引起烫伤样皮肤综合征和毒性休克综合征等疾病。 医务人员的葡萄球菌带菌率高70%以上，革兰阳性、葡萄串状排列；产生不同的脂溶性色素；触酶试验阳性、发酵葡萄糖；金黄色葡萄球菌是主要致病菌。一、分类目前球菌有35个种，17个亚种（表7-2）是否产生凝固酶分为：凝固酶阳性葡萄球菌，凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）。引起人类疾病的重要菌有金黄色葡萄球菌（S.aureus），表皮葡萄球菌（S.epidermidis），头状葡萄球菌（S.capitis），人葡萄

3、球菌（S.hominis）等。 根据噬菌体分型，可分成45群26型。利用质粒大小分型、血清学分型、抗生素分型和细菌DNA的RFLP或PFGE分型，研究细菌的致病性、耐药性、流行病学特点和细菌鉴别的关系。该属细菌DNA G+C mol%为30%39%。根据产生色素的不同分类：金、白、柠临床传统分类：金黄色葡萄球菌、表皮、腐生、溶血葡萄球菌二、临床意义（一）致病因素1.酶类 （1）凝固酶 定义：能使含有肝素等抗凝剂的人或兔血浆纤维蛋白原转为纤维蛋白使血浆发生凝固的酶类物质, 作用：是鉴别葡萄球菌有无致病性的重要指标 结合凝固酶（聚集因子）:结合在菌体表面的凝固酶，能与血浆中的纤维蛋白原交联使菌体快

4、速凝集；游离凝固酶：是细菌分泌到菌体外的凝固酶，能被血浆中的协同因子（cofactor）激活形成复合物，再使纤维蛋白原转变成纤维蛋白，而使血浆凝固；保护病原菌不被吞噬或免受抗体等的作用。（2）耐热核酸酶耐热10015分钟，能水解DNA和RNA（3） 透明质酸酶、磷脂酶，分解结缔组织透明质酸酶2.毒素（1）葡萄球菌溶素:破坏红、白细胞、血小板肝细胞 （2）肠毒素 ：外毒素噬菌体群金黄色葡萄球菌产生的一组对热稳定可溶性蛋白质，引起食物中毒（3）毒性休克综合征毒素：噬菌体群金黄色葡萄球菌产生（4）杀白细胞素：不耐热的蛋白质，只损伤中性粒细胞和巨噬细胞（5）表皮剥脱毒素：噬菌体群金黄色葡萄球菌产生（二

5、）致病类型 1.化脓性疾病 1）皮肤化脓性感染：疖、痈、甲沟炎、中耳炎、脑膜炎2）各种器官的化脓性感染3）全身感染：败血症、脓毒血症2.毒素性疾病1）食物中毒：毒素性的食物中毒 2）烫伤样皮肤综合征 3）毒素性休克综合征（TSS） 4）假膜性肠炎 3.医院感染三、微生物学检验1.形态染色革兰阳性球菌、葡萄串状排列直径0.51.5m无鞭毛、无芽孢、一般不形成荚膜,某些菌株形成荚膜2.抗原成分1）葡萄球菌A蛋白（Staphylococcal protein A,SPA）存在于金黄色葡萄球菌菌细胞壁的一种表面蛋白。可与人和其它哺乳动物IgGFc段非特异性结合，用于协同凝集试验，A蛋白有抗吞噬作用；激

6、活补体替代途等活性。是完全抗原，具属特异性无型的特异性。2）多糖抗原，具有群特异性，存在细胞壁中的磷壁酸中：N-乙酰葡胺核糖醇残基为A群多糖抗原；N-乙酰区糖胺甘油残基为B群多糖抗原。 3）荚膜抗原，几乎所有金黄色葡萄球菌菌株表面有荚膜多糖抗原。表皮葡萄球菌仅个别菌株有此抗原。3.变异性（1）细菌细胞壁缺陷型，受抑制破坏细胞壁的药物或外界因素作用，可以形成细胞壁缺陷型细菌，在高渗环境中生存。（2）耐药性变异，部分菌株通过获得外源性的mecA而产生青霉素结合蛋白2a（PBP2a），导致对所有内酰胺类抗生素耐药。易耐药。4.培养特性1）生长条件：需氧、兼性厌氧营养要求不高，普通培养基上生长良好，某

7、些菌株耐盐，1015NaCl上能生长，最适生长温度3537，最适pH7.47.6。2） 生长现象液体培养基：均匀混浊、少许沉淀，普通培养基上形成直径23mm不透明的中等大小、圆形、凸起、边缘整齐、光滑、湿润的圆形凸起不透明S型菌落。产生金黄色、白色、柠檬色等脂水溶性色素附着在菌落上。金黄色葡萄球菌：血平板（营养培养基）：中等大小、光滑型菌落、脂溶性色素、透明溶血环（致病葡萄球菌）高盐甘露醇平板（选择鉴别培养基）：淡橙黄色菌落（致病葡萄球菌）卵黄高盐琼脂平板（选择鉴别培养基）：菌落周围形成白色沉淀圈（致病葡萄球菌）5.抵抗力是抵抗力最强的无芽孢细菌，耐干燥，对龙胆紫敏感，易形成耐药性：耐甲氧西林

8、金黄色葡萄球菌（MRSA）近年来耐药性增强，对多种抗菌药物不敏感，已成为医院感染最常见的致病菌。（二）葡萄球菌的临床检验1、病种不同，采集不同标本：脓液、创伤分泌液、穿刺液、血液、尿液、痰液、脑脊液、粪便，采取时避免病灶周围正常菌群污染。2、标本直接检查 1）显微镜检查 无菌体液如脑脊液和关节穿刺液等可直接涂片、革兰染色后，显微镜检查见类似葡萄球菌的革兰阳性球菌，则具有重要临床价值；其他体液标本查见细菌的同时伴有炎性细胞则也具有参考价值。可初步报告查见革兰阳性葡萄串状排列球菌，疑似葡萄球菌” “查见革兰阳性球菌”并进一步进行分离和鉴定。2）抗原检测，乳胶凝集试验测定SPA及荚膜抗原。3）核酸检

9、测，针对耐热核酸酶nuc、16S rRNA可鉴定葡萄球菌，测定macA可以快速检出MRSA。3、分离培养脓液、分泌物等临床标本可接种血琼脂平板；有污染的标本如粪便等应接种在选择平板上，如甘露醇高盐平板、哥伦比亚多粘菌素奈啶酸平板；血标本5ml增菌（葡萄糖肉汤50ml）分离培养（血平板）生长现象：混浊、胶胨状凝固、溶血，无细菌生长继续培养7天，并以血平板培养确定。4、 鉴定（1）菌落性状，平板培养基上孵育24h后，菌落外观疑为葡萄球菌者应进行革兰染色证实。（2）鉴别试验，触酶试验是鉴定革兰阳性球菌的重要试验，触酶试验阳性、溶葡萄球菌素（200g/ml）和呋喃唑酮100g敏感，氧化酶试验阴性可以与

10、其他革兰阳性球菌区别。红霉素（0.4g/ml）耐药和甘油需氧产酸可以与微球菌区别。 （3）种的鉴定 1）凝固酶试验试验玻片法：检测结合型血浆凝固酶，简便快速；试管法：检测游离型（分泌型）血浆凝固酶：金黄色葡萄球菌+ 表皮、腐生、溶血葡萄球菌-凝固酶试验是鉴定金葡菌的重要标志。金黄色葡萄球菌、中间型葡萄球菌呈现阳性反应。路邓葡萄球菌产生结合型凝固酶，不分泌游离型凝固酶, 因而玻片凝固酶试验阳性、试管凝固酶试验阴性。2）耐热核酸酶试验原理：金黄色葡萄球菌产生耐热核酸酶能分解DNA为短链，水解后的DNA为短链与甲苯胺蓝结合，使甲苯胺蓝琼脂显粉红色。方法：菌落加盐水-10015分，制备甲苯胺蓝琼脂打孔

11、，加入菌液。结果：373小时孔外出现粉红色圈为阳性，无颜色为阴性。3）触酶试验+18小时培养菌落或菌液内，滴加3%的过氧化氢，30秒内观察产生大量气泡+：金黄色葡萄球菌，无气泡4）其他鉴定试验磷酸酶试验、吡咯烷酮芳基酰胺酶试验、鸟氨酸脱羧酶试验、脲酶试验、-半乳糖苷酶、3-羟基丁酮酸试验、新生霉素敏感试验、多粘菌素B耐药试验、糖产酸试验是常用的葡萄球菌属种间细菌的鉴定生化试验。（4）肠毒素检测 1）生物学试验，采用幼猫腹腔注射(肉汤培养物或呕吐物)，4h 内发生呕吐腹泻和体温升高或死亡等现象者，提示金黄色葡萄球菌肠毒素存在。2）琼脂扩散试验或ELISA法测定，用琼脂扩散试验、ELISA法或放射免疫分析法检测样本中的肠毒素。3）肠毒素基因测定，针对肠毒素基因设计毒素的通用引物及特异性引物，应用PCR技术可直接进行分型测定。凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）：条件致病菌,皮肤黏膜正常菌群，致病力弱，医院内感染的重要